Метод биологической пробы

Биологическая проба – определение жизнеспособности инвазионных яиц гельминтов посредством их скармливания лабораторным животным. Это наиболее точный метод. Личинками гельминта заражают соответствующего промежуточного или окончательного хозяина, можно использовать также лабораторных животных, которым скармливают зрелые яйца или личинки паразитов. Например, для определения жизнеспособных яиц аскаридат (аскариды человека, свиней, токсокары и др.) на 1 животное (морские свинки, мыши) необходимо не менее 100-300 яиц с развившейся личинкой. Яйца аскаридат в изотоническом растворе натрия хлорида вводят пипеткой через рот мыши или морской свинке. Через 6-7 сут животное забивают, вскрывают и исследуют его печень и легкие в отдельности на наличие личинок аскаридат. Для этого печень и легкие измельчают на мелкие кусочки и исследуют по методу Бермана. Если животных заражали живыми и инвазионными яйцами, то при вскрытии в печени и легких обнаруживают мигрирующие личинки аскаридат. Для определения жизнеспособности адолескариев фасциол, собранных на растениях в биотопах малого прудовика – промежуточного хозяина паразита, используют мышей, морских свинок или кроликов, которым скармливают или вводят эти личинки пипеткой через рот.

В случае заражения яйца фасциол в фекалиях лабораторных животных можно обнаружить у кроликов через 2 мес., у морских свинок через 50 сут, у мышей через 35-40 сут. Для более быстрого получения ответа лабораторных животных вскрывают через 20-30 сут и исследуют печень на наличие молодых фасциол.

Для определения жизнеспособности яиц карликового цепня также рекомендуется их скармливание не зараженным ими ранее белым мышам с последующим вскрытием животных через 92-96 ч и выявлением цистицеркоидов в кишечных ворсинках или цестод в просвете кишечника.

Личная профилактика персонала при проведении санитарно-паразитологических исследований

Пути заражения гельминтами: а) через руки, загрязненные при работе в саду, огороде, поле, на ферме, при уходе за домашними животными, сборе и исследовании материала от больных людей и животных, с объектов окружающей среды и т.д.; б) попадание инвазионного материала с рук в рот (с пищей, при курении), при активном нападении промежуточных хозяев (кровососущих насекомых); в) при активном нападении в водоеме фуркоцеркариев шистосомат, а на суше – личинок стронгилоид разных животных и анкилостомид собак и жвачных животных; г) при употреблении в пищу сырых или недостаточно термически обработанных продуктов, содержащих яйца и личинки гельминтов; д) при питье сырой воды из водоемов, в которые поступают стоки с территории населенных мест, сточные воды и т.д.; е) при работе с пробами фекалий, сточных вод и их осадков, пыли с предметов обихода.

Профилактика. Для предупреждения заражения персонала гельминтами при отборе и исследовании проб объектов окружающей среды необходимо пробы свежих и полежавших фекалий собак, лисиц, песцов и других плотоядных животных брать и упаковывать в резиновых перчатках. Взятый материал целесообразно консервировать, применяя физические или химические средства. Из физических способов известно воздействие пониженных температур. В пробах фекалий, помещенных в холодильник или ледник при температуре 0-4⁰С, развитие личинок в яйце и личинок, выделившихся из яйцевых оболочек, задерживается. Длительное хранение материала при этой температуре не предотвращает бактериального развития и гнилостного процесса в нем. Для обеззараживания исследуемого материала предложены следующие химические средства.

1. Растворы детергентов (моющие средства), в состав которых входят жирные спирты, относящиеся к группе поверхностно-активных веществ, а также полифосфаты, силикаты натрия, алкиломиды, карбоксиметилцеллюлоза и др. Применяют порошок «Лотос», «Экстра», «Барф», «Тайд» и т.д.

гранулированный порошок «Лотос» содержит около 5% влаги. Для удаления ее перед приготовлением раствора порошок выдерживают в сушильном шкафу при 100⁰С в течение 2 ч. Водный раствор «Лотоса» (1%) в соотношении его концентрата с фекалиями 5:1 препятствует развитию яиц трихостронгилид. При этом последние не претерпевают существенных морфологических изменений.

Порошок «Экстра» применяют в виде 1,5% раствора. На пробу массой 3 г требуется 15 г раствора. В пробах, залитых таким раствором, яйца и личинки гельминтов могут сохраняться длительное время, однако материал рекомендуют хранить не более 2 недель.

Установлено хорошее консервирующее действие «Лотоса» и «Экстры» на яйца аскариды, трихоцефалюса, анкилостомид, трихостронгилид, тениид гименолепидид, описторха, дикроцелиума, шистосомы. Не исключено, что это действие выражено и в отношении многих других возбудителей гельминтозов.

2. Жидкость Барбагало (3% раствор формалина и изотонический раствор натрия хлорида). Добавление к пробам фекалий этой жидкости позволяет сохранять их не менее 2 недель.

3. Смесь 0,2% водного раствора нитрата натрия (1900 мл), раствора Люголя (5г йода, 10 г калия йодида, 250 мл воды), формалина (300 мл), глицерина (25 мл). В ней яйца гельминтов сохраняются 6-8 мес.

4. Смесь глицерина (5 мл), формалина (5 мл) и воды (100 мл).

Перчатки после работы тщательно промывают, не снимая с рук, в горячем 1% растворе хлорной извести, содержащем 2,73% активного хлора. Пробы фекалий, как уже отмечалось, упаковывают на месте их взятия в целлофановые пакеты или стеклянные банки, чтобы предупредить загрязнение транспорта и окружающих предметов в пути. В лаборатории после исследования материала банки тщательно промывают и стерилизуют кипячением, а мешочки сжигают.

Подготовку материала для исследования и микроскопию препаратов проводят на отдельных столах, которые покрывают целлофановыми пленками; стол для обработки проб ставят рядом с водопроводным краном. Пробы фекалий для исследования готовят в больших кюветах: их легко мыть и деинвазировать (кипятком). Пробы фекалий, осадков сточных вод, навоза отбирают пинцетом, чтобы не прикасаться к ним руками. Особенно тщательно соблюдают меры предосторожности при исследовании испражнений собак, песцов, лисиц и других плотоядных, в районах, неблагополучных по эхинококкозу, альвеококкозу и другим тениидозам, независимо от времени взятия проб. Работу выполняют в резиновых перчатках.

Следует помнить, что в пробах фекалий, навоза животных (жвачных, свиней) в теплое время (при 25-30⁰С) через 1,5 суток могут развиваться инвазионные личинки стронгилоидес, представляющие опасность для персонала.

При исследовании мышц свиней, кабанов, медведей и других млекопитающих в случае обнаружения личинок трихинелл соблюдают особую осторожность, чтобы не занести эти личинки в рот. Инструментарий, стол и все, что соприкасалось с инвазионным материалом, после работы протирают куском марли, смоченной спиртом. Такую же предосторожность соблюдают и при обработке рыб, крабов и раков в районах, неблагополучных по описторху, псевдоамфистомозу, нанофиэтозу, парагонимозу и т.д.

При исследовании материала методикой переваривания в искусственном желудочном соке работают в резиновых перчатках. Материал набирают пипеткой с резиновым баллончиком. После окончания работы тщательно промывают горячей водой инструментарий, посуду, целлофановые покрытия столов, регуляторы подачи воды и т.д. Если анализировался материал от собак и других плотоядных, кроме того, обеззараживают кипячением посуду, кюветы, инструментарий, а целлофановые покрытия столов обрабатывают 10% раствором хлорной извести. Металлические части микроскопа протирают кусочком марли, смоченным спиртом.

После окончания исследования моют руки с мылом под струей воды, особенно тщательно подногтевые пространства, используя для этого щетку. После отработки материала (фекалии людей, собак, кошек, сточные воды, их осадки, навоз) все отходы лабораторной работы перед спуском в общую канализационную систему кипятят в течение 10-15 минут. При сборе и исследовании проб почвы, овощей, зелени соблюдают те же меры предосторожности, что и при обработке фекалий.

Основными факторами передачи при кишечных протозоозах служат руки, пищевые продукты, вода, сточные воды и их осадок, овощи, ягоды, предметы бытовой и производственной обстановки, загрязненные возбудителями этих инвазий. Следует учитывать, что цисты патогенных простейших выделяются в окружающую среду инвазионными. По механизму заражения кишечные протозойные инвазии не отличаются от кишечных инфекций бактериальной природы. Поэтому требования по предупреждению возможного заражения персонала возбудителями кишечно-протозойных инвазий при проведении санитарно-протозоологических исследований остаются такими же, как и при осуществлении санитарно-бактериологических исследований. Одним из надежных и безвредных способов обеззараживания лабораторного инструментария и лабораторной посуды при этих исследованиях является кипячение. Руки после исследований тщательно моют водой с мылом и обрабатывают 70% раствором этанола. Исследованный материал удаляют из лаборатории после его кипячения в течение 10-15 минут.