2 курс / Гистология / РУКОВОДСТВО_ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКИЕ_ММУНОГИСТОХИМИЧЕСКИЕ_МЕТОДЫ

Может появиться липофусцин – артефакт температурной демаскировки антигенов, пылевидное окрашивание – в печени, тканях сердца, или как специфическое окрашивание срезов поджелудочной железы.

Фоновое окрашивание при использовании щелочной фосфатазы

ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ | 209

Рекомендовано к покупке и изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

Реагенты отрицательного контроля

Приготовьте реагенты отрицательного контроля

•Поликлональные: неиммунизированную сыворотку того же животного, разведите до тех же концентраций белка, что и первичные антитела.

•Моноклональные: реагенты отрицательного контроля, того же изотипа, что и первичные антитела. Растворитель, используемый производителем моноклональных первичных антител и отрицательный контроль должен содержать те же ионы. Растворители, содержащие ионы натрия или фосфора, могут изменить чувствительность некоторых моноклональных антител.

•Подсчет:

• Ig или общая концентрация белка первичных антител зависит от фактора разведения первичных антител .

• Ig или общая концентрация белка реагентов отрицательного контроля зависит от фактора разведения реагентов отрицательного контроля.

ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ | 211

Блокирование эндогенных ферментов

Фоновое окрашивание определяется как неожиданное или нежелательное окрашивание в

контрольном образце, которое не затрагивает таргетную зону антигена. Частой причиной фонового окрашивания является активность эндогенных ферментов и биотина.

Пероксидаза – фермент окислительно-восстановительного ряда, который взаимодействует с субстратом, содержащим перекись водорода, как акцептор электронов. Чтобы блокировать ее активность, клетки можно обработать реагентами, содержащими перекись водорода.

Щелочная фосфатаза – фермент, встречающийся в разных изоформах, продуцируемый лейкоцитами, печенью, костями, тонкой кишкой, плацентой и Regan (карциномой). Добавление левамизоля к хромогену/субстрату ингибирует активность эндогенной щелочной фосфатазы, за исключением изоформы тонкой кишки. При необходимости ее можно блокировать раствором слабой кислоты, например, 0,03-0,05 N HCl.

Биотин, витамин В, может быть связан с белками ткани и может мешать правильной интерпретации окраски при использовании стрептовидина или биотина. Биотин/авидин блок разрушит это связывание.

Пероксидазный блок:

3% H2O2

Метанол/ H2O2

Азид натрия

Пероксидазный блок (S2001)

Другое

Блокирование щелочной фосфатазы:

Левамизоль

0,03 N HCl (не использовать на замороженных тканей)

Другое

Блокирование биотина:

Биотиновый блок (Х0590)

Другое

Протеиновый блок:

Протеиновый блок (Х0909)

Нормальная сыворотка животного-донора вторичных антител

Другое

ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ | 213

ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ | 215

216 | ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ

Рекомендовано к покупке и изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

Словарь

Мы не стремились собрать в этом словаре все термины, использованные и издании. Скорее, здесь приведены базовые понятия, необходимые для лучшего понимания данного руководства.

Агглютинация – склеивание и выпадение в осадок клеток, равномерно распределенных в жидкости. Причина агглютинации – агглютинины – антитела к специфическим клеткам, явление

наблюдается при обработке колонии бактерий иммунизированной от этого вида микроорганизмов сывороткой или при обработки взвеси клеток, например эритроцитов, антисывороткой. При добавлении к цельной крови специфических антител из сыворотки донора, реакция агглютинации эритроцитов позволяет определить группу крови.

Адъювант – в иммунологии, любое вещество или комплекс веществ, используемое для усиления иммунного ответа. Существует два типа: позволяющие увеличить как клеточный, так и гуморальный иммунитет (общее потенциирование) и усиливающие ответ только на определенные антигены (специфическое потенциирование). Адъюванты работают по нескольким механизмам: увеличение времени высвобождения антигена, улучшение иммуногенности путем денатурации антигенов, привлечением иммунокомпетентых клеток и увеличением воспаления.

Алгоритм – перечень правил, позволяющих решить некоторые проблемы с изображением.

Анализ изображения – получение значимой информации из изображения.

Антиген – молекула, способная связаться с антителом.

Антигенная детерминанта – см. Эпитоп.

Антисыворотка (иммунная сыворотка) – сыворотка, содержащая антитела.

Асцит или асцитическая жидкость – скопление жидкости в брюшной полости.

Афинная адсорбция – метод разделения с помощью афинной хроматографии. Можно использовать, например, для удаления нежелательных антител при их изготовлении. Первичная смесь антител пропускается через колонку с матрицей, содержащей антитела к нежелательным антителам. Таким образом, примеси антител остаются на колонке, на выходе имеем раствор антител, очищенный методом аффинной адсорбции.

Афинная изоляция – метод разделения смеси с помощью афинной хроматографии. Например,

антитела, осевшие на колонке после процедуры афинной адсорбции, можно выделить из связи с антигеном при помощи специальных разделителей.

Виртуальный препарат – цифровое изображение препарата.

Внутренний тканевой контроль – образец ткани пациента, содержащей целевые антигены не только в опухолевых структурах, но и в неизмененной ткани. Таким образом, можно обойтись без положительного контроля.

ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ | 217