6. Определение осмотической устойчивости эритроцитов.

Основано на оценке степени гемолиза в гипотонических растворах хлорида натрия, в которых происходит набухание и гемолиз эритроцитов. Выделяют 2 вида осмотической устойчивости эритроцитов: максимальная 0,28-0,32 % NaCl (разрушаются молодые эритроциты); минимальная 0,44-0,48 % NaCl (разрушаются старые эритроциты). Если границы сдвигаются в сторону максимальной устойчивости, то в периферической крови преобладают молодые эритроциты; если к минимальной устойчивости, то старые (кроветворение ослаблено).

ЦЕЛЬ: освоить методику определения осмотической устойчивости эритроцитов.

ОСНАЩЕНИЕ: дефибринированная кровь, штатив для пробирок, 10 пробирок, восковой карандаш, пипетка, стеклянная палочка, растворы хлорида натрия убывающей концентрации.

ХОД РАБОТЫ: предварительно готовят рабочие растворы натрия хлорида различной концентрации от 0,15 до 0,6%. Рабочие растворы натрия хлорида разливают по 5 мл в 10 центрифужных пробирок. В каждую добавляют по 3-5 капель дефибринированной крови. Пробирки оставляют на 1 час при комнатной температуре, а затем центрифугируют 5 мин при 2000 об/мин. Надосадочную жидкость из каждой пробирки исследуют на фотоэлектроколориметре. Определяют процент (степень) гемолиза, приняв за 100% гемолиз в пробирке с 0,15% раствором натрия хлорида. Гемолиз можно определять и визуально по цвету надосадочной жидкости. При его отсутствии наблюдается бесцветный раствор и большое количество осадка. При частичном гемолизе - появление окраски надосадочной жидкости (розовение) и уменьшение осадка. При полном гемолизе эритроцитов - интенсивная красно-лаковая окраска надосадочной жидкости и отсутствие осадка.

Частичный гемолиз характеризуется окрашиванием раствора и появлением осадка неразрушенных эритроцитов. Начало гемолиза (минимальная его степень) определяется по легкому порозовению (при визуальном определении гемолиза количество рабочего раствора в пробирке должно быть меньше 1,0 мл). Бесцветный раствор и большое количество осадка свидетельствуют об отсутствии гемолиза.

Определить, при какой концентрации раствора хлорида натрия наступает гемолиз и сделать вывод об осмотической устойчивости исследованных эритроцитов.

7. Эритроцитометрия и кривая Прайс-Джонса.

Эритроцитометрия – определение размеров эритроцита: диаметра, объёма и толщины.

Определение диаметра эритроцитов можно проводить под микроскопом с помощью окулярмикрометра и автоматических счётчиков.

Кривая Прайс-Джонса отражает распределение эритроцитов по диаметру. На оси абсцисс откладывают величину диаметра эритроцитов в мкм, а на оси ординат – процентное содержание эритроцитов соответствующего диаметра. В норме большинство эритроцитов (~70 %) имеет диаметр 7 – 8 мкм, максимум приходится на эритроциты диаметром 7,2 – 7,5 мкм. Эритроциты диаметром меньше 6,7 мкм относят к микроцитам, больше 7,7 мкм к макроцитам, больше 9,5 мкм к мегалоцитам.

Ширина основания кривой характеризует анизоцитоз. При макроцитозе и мегалоцитозе кривая имеет пологую форму, широкое основание, две или несколько вершин и сдвинута в сторону больших диаметров эритроцитов. При микроцитозе кривая имеет широкое основание, две вершины, сдвинута влево в сторону меньших диаметров.

Средний объём эритроцита определяется отношением гематокритного показателя к количеству эритроцитов в 1 мкл крови. В норме он колеблется от 76 до 96 мкм³. При количестве эритроцитов 5 млн в 1 мкл крови и гематокритном показателе 45 % средний объём эритроцита равен 90 мкм³. Средний объём эритроцита увеличивается при макроцитозе, а уменьшается при микроцитозе.

Средняя толщина нормальных эритроцитов 1,9 – 2,1 мкм.