Аудиторная работа

Лабораторные работы (определение сахара в крови и моче цветной реакцией с o-толуидином).

1. Определение глюкозы в крови.

Принцип определения. Глюкоза при нагревании с о-толуидином в растворе уксусной кислоты вызывает зеленое окрашивание смеси, интенсивность которого пропорциональна содержанию сахара.

Ход работы. В центрифужную пробирку внести 0.9 мл 3% раствора трихлоруксусной кислоты, затем по стенке внести 0.1 мл крови, взятой микропипеткой из прокола опушки пальца. Смешать, центрифугировать.

К 0.5 мл центрифугата добавить 4.5 мл ортотолуидинового реактива, поместить пробирку на кипящую водяную баню точно на 8 мин и затем сразу же охладить проточной водой до комнатной температуры. В Конт­рольную пробу внести вместо крови столько же 0.14 н раствора NaCl и проделать те же операции. Если жидкость после нагревания мутна – отфильтровать.

Колориметрия проводится против контроля (красный фильтр, кю­вета - 10 мм).

Стандартные пробы выполняются также, как опытные с той разницей, что вместо крови вносят столько же раствора глюкозы (100 мг%). Расчет по формуле:

С_оп = (С _ст х Е _оп) : Е _ст

где С_оп – концентрация глюкозы в исследуемой крови, мг%;

С _ст – в стандартной пробе, Е_оп и Е_ст - оптическая плотность опытной и стандартной проб соответственно.

2.Определение глюкозы в моче. 0.1 мл мочи смешать с 4.5 мл о-толу­и­ди­нового реактива, пробы обработать как при определении глюкозы (присутствие белка в моче определению не мешает).

Примечание: при высоком содержании глюкозы в моче или крови количество реактива может оказаться недостаточным для выявления всего продукта. В этом случае следует исследуемую жидкость разбавить в 2 раза, а результат увеличить соответственно (т.е. в 2 раза).

Ответить на поставленные вопросы, указав последовательность действий.

1. В переживающий гомогенат печени, использующий глюкозу в качестве субстрата окисления, внесли ингибитор цитохромоксидазы.

В каком направлении изменятся синтез АТФ, высвобождение СО₂ и концентрация молочной кислоты?

2. В тканях переживающего органа, который потребляет глюкозу как субстрат окисления, повысился уровень НАДФ.Н+ и концентрация молочной кислоты, замедлилось потребление кислорода.

С чем это связано?

3. Активность фермента, катализирующего синтез тиаминдифосфата /ТДФ/, резко ограничена.

Какие сдвиги могут произойти в обмене углеводов?

4. При аэробном окислении глюкозы исследуемой тканью образуется 54 мкмоля СО₂ за 1 ч. Рассчитать интенсивность потребления глюкозы.

5. Ткань обеспечивается кислородом с такой скоростью, что 4/5 всей глюкозы окисляется аэробно. Рассчитать энергетический эффект 60 мкмолей глюкозы (в мкмолях АТФ) при описанном характере окисления (ПФП в расчет не принимать).

6. Что больше: энергетический эффект 2-х молей ацетил-КоА или 8-и молей α-кетоглутаровой кислоты?

ЗАНЯТИЕ 12 (исследование углеводного обмена).

Цель: изучить гормональную регуляцию, важнейшие молекулярные нарушения обмена углеводов и принципы контроля его состояния

Студент должен знать:

1. Почему поддержание уровня сахара крови в определенных пределах - обязательное условие нормальной жизнедеятельности.

2.Пути транспорта сахара с момента всасывания.

3. Возрастные изменения уровня сахара в крови.

4. Изменения концентрации сахара в крови, выход за пределы которых обозначают терминами «гипергликемия» и «гипогликемия».

5. Источники, за счет которых восполняется содержание сахара в кровотоке, пути, по которым расходуется сахар крови..

6. Регуляторные факторы, обеспечивающие гомеостаз уровня сахара в кровотоке, направление и механизмы действия этих регуляторов

7. Биохимические сдвиги, связанные с дефицитом инсулина.

8. Как компенсируется дефицит инсулина регуляторными системами, к каким биохимическим сдвигам это может приводить.

9. Возможные причины появления кетонемии и кетонурии.

10. Понятие «сахарный порог почек», его значение.

11. С чем связана непереносимость дисахаридов, биохимические сдвиги при этих состояниях.

12. Принципы выявления наследственной непереносимости дисахаридов.

13. Химизм превращения галактозы и фруктозы в тканях, биохимические сдвиги при галактоземии, фруктоземии.

14. Виды гликогенозов, принципы их классификации.

15. Условия отбора проб крови для изучения показателей состояния обмена углеводов

.Студент должен уметь:

1. Обосновать необходимость лабораторной оценки состояния углеводного обмена.

2. Анализировать гликемические кривые: ориентируясь на их характер обосновать и сформулировать предположение о направленности сдвигов в углеводном обмене.

4. Обосновать необходимость определения у пациента промежуточных метаболитов галактозы и фруктозы, активности ферментов, участвующих в их превращениях.

Студент должен получить представление:

1. О целях и характере лечебных мероприятий при дефиците инсулина.

2. О характере лечебных мероприятий при дефиците дисахаридаз.

3. О характере диагностических и терапевтических мероприятий при галактоземии.

Сведения из базовых дисциплин, необходимые для изучения темы:

Простейшие приёмы графического анализа (построение графиков зависимости в системы координат, экстра- и интерполяция)