Занятие 22 («Обмен сложных белков»)

Цель занятия: усвоить, какие ферменты, и в какой последовательности обеспечивают переваривание ДНК и РНК, в каких тканях и из каких пред­шественников они синтезируются; усвоить схему метаболизм гема - его биосинтез и распад, а также то, что нарушения метаболизма гема, пуриновых и пиримидиновых оснований возникают при нарушении функций определенных ферментов, и что эти нарушения могут быть приобретенными и наследуемыми.

Студент должен знать:

1. Ферменты, участвующие в переваривании нуклеопротеидов;

2. В каких тканях, и из каких предшественников синтезируется пуриновый скелет и пиримидиновое ядро;

3. Как протекает катаболизм пуриновых и пирамидиновых оснований и пути удаления конечных продуктов;

4. Нарушение обмена пуриновых и пиримидиновых оснований;

5. Биосинтез глобина, гема и гемоглобина, нарушения синтеза, последствия;

6. Распад гема, конечный продукт распада, пути его устранения, нарушения билирубина.

Студент должен уметь:

1. Написать схему переваривания нуклеопротеидов;

2. Изобразить структурными формулами биосинтез пиримидинового ядра,

3. Показать на структурной формуле пуринового скелета его предшественники;

4. Написать структурными формулами катаболизм пиримидиновых и пуриновых оснований;

5. Назвать факторы, обусловливающие нарушения обмена пуриновых и пиримидиновых оснований;

6. Назвать этапы синтеза гема и ферменты процесса;

7. Нарисовать схему превращения билирубина, причину возникновения и виды желтух;

8. Провести определение билирубина в сыворотке крови и мурексидную пробу.

Студент должен получить представление:

1. О патологических состояниях, сопровождающихся нарушением метаболизма пуриновых и пиримидиновых оснований,

2. О патологических процессах, ведущих к билирубинемиям.

Сведения из базыовых дисциплин, необходимые для изучения темы:

Строение сложных белков (нуклеопротеинов, хромопротеинов), аминокислот, мочевины, простетические группы сложных белков (ДНК, РНК, гем).

Аудиторная работа

Лабораторная работа (мурексидная проба, обнаружение мочевой кислоты).

1. Мурексидная проба. Химизм: продукты окисления и гидратации мочевой кислоты, образующиеся при нагревании с концентрированной азотной кислотой в присутствии аммиака образуют аммонийную соль пурпурной кислоты – мурексид, отличающийся красивым пурпурно-красным цветом.

Ход работы. Порошок мочевой кислоты (с булавочную головку) поместить на дно фарфоровой чашки, прилить 1-2 капли концентрированной HNO₃ и ос­торожно (!) нагреть (не выше 70˚С), сдувая образующиеся пары низших окислов азота. После охлаждения рядом с коричнево-красным осадком (продукты окисления и гидратации) нанести с одной стороны каплю раствора аммиака – появляется пурпурно-красное окрашивание (образование мурексида), с другой стороны на осадок нанести 1 каплю 10% раствора едкого натра - появляется фиолетовое окрашивание.

2. Определение билирубина в сыворотке крови по Иендрашику. Метод основан на образовании характерного окрашивания при взаимодействии связанного (прямого) билирубина с диазореактивом. Для определения общего билирубина (связанный + свободный, который, образуя комплекс с белками, не открывается прямой реакцией) необходимо предварительно разрушить связь непрямого (свободного) билирубина с белками с помощью кофеинового реактива. Определив сумму билирубинов и прямой билирубин, можно по разнице рассчитать содержание свободного билирубина.

В норме концентрация свободного (непрямого) билирубина в сыворотке крови составляет 0,5 – 1,0 мг%. В здоровом организме связанный билирубин в крови практически не появляется, и поэтому количества сво бодного и общего билирубина совпадают.

Ход работы.В три пробирки отмерить указанные ниже в таблице реактивы. Через 10 мин колориметрировать против контроля (проба 2) в кювете с толщиной рабочего слоя = 10 мм (фильтр зеленый)

Реактивы	№№ пробирок
	1	2	3
Сыворотка Кофеиновый реактив Диазореактив Раствор NaCl 0,14 н	1,0, мл 3,5, мл 0,5, мл -	1,0, мл 3,5, мл - 0,5, мл	1,0, мл - 0,5, мл 3,5, мл
Что определяется	Общий билирубин	Контроль	Связанный билирубин

Расчет: [С] = 6,34 · m, где С – концентрация, мг %, m – экстинкция.