Определение активности аспатратаминотрансферазы (аст). Ход работы.

1. Приготовить субстратный раствор: 29,2 мг ά-кетоглутаровой кислоты и 2,66 аспарагина растворить в 1 н растворе NaOH, добавляя его малыми порциями до pH = 7,4, затем раствор перелить в мерную колбу на 100 мл и довести до метки 0,1 М фосфатным буферным раствором с pH = 7,4 (добавление 1 капли хлороформа позволяет хранить в рефрижераторе).

2.0,1мл сыворотки крови смешать с 0,5 мл нагретого до 37ºС субстратного раствора, инкубировать 60 мин при 37ºС; прибавить 0,5 мл динитрофенилгидразинового реактива и экспонировать 15 мин при комнатной температуре. Прибавить 5 мл 0,4 N раствора NaOH и через 20 мин колориметрировать против контроля (кювета – 10 мм, фильтр зеленый). Контроль – те же реактивы + 0,1 мл H₂O. Определить активность по таблице.

Таблица для вычисления активности АСТ

Экстинкция	Е по Врублевскому	IE
0,020 0,040 0,060 0,080 0,100 0,120 0,140 0,160 0,180 0,200 0,220 0,240 0,260	8 16 24 32 40 49 59 71 83 100 118 140 167	4 8 12 15 19 24 28 34 40 48 57 62 80

Выполнить предложенные действия ли ответить на вопросы::

1. Назвать пути использования аминокислот в организме.

2. Назвать важнейшие индукторы и ингибиторы биосинтеза белка.

3. Назвать пути превращения аминокислот, не используемых в биосинтезах.

4. Изобразить структурными формулами процесс окислительного дез­амии­нирования аланина.

5. Нарисовать схему переаминирования глутамина и пировиноградной кис­­лоты.

6. Нарисовать схему взаимосвязи переаминирования и дезаминирования.

7. Назвать важнейшие реакции переаминирования.

8. Назвать ферменты трансаминирования и кофермент трансаминаз.

9. Почему при усиленном распаде аминокислот вследствие энергетического голодания ускоряется накопление кетоновых тел?

10. Назвать пути обезвреживания аммиака.

11. В каких тканях протекает образование глутамина и аспарагина?

12. Где и как образуются аммонийные соли?

13. Записать последовательность реакций орнитинового цикла.

14. Показать химизм образование биологически активных аминов (ГАМК, гистамина, серотонина, дофамина, норадреналина)

15. Назвать виды нарушений обмена аминокислот.

16. Назвать причины важнейших наследственных нарушений обмена аминокислот и (фенилкетонурии, алкаптонурии, цистинурии, цистиноза).

Решить следующие задачи:

1. При дезаминироании аланина образуется пировиноградная кислота.

Каков энергетический эффект полного окисления (в молях АТФ на моль кислоты)?

2. Известно, что потребление 1 г белка сопровождается образованием 0,16 г азота в форме мочевины.Энерготраты пациента составляют 3500 ккал в сутки, выделение мочевины - 20 г за сутки. Определить долю белка в энерготратах (калорийность белка - 4,1 ккал/ г).

3. Глутаминовая кислота в процессе окислительного дезаминирования превращается в α-кетоглутаровую. Рассчитать энергетический эффект полного окисления 1 М глутаминовой кислоты (в молях АТФ).

4. При инкубации с переживающей тканью печени аспарагиновой кислоты, содержащей радиоизотоп углерода в α-положении, в составе какого соединения обнаружится радиометка (другими словами, в состав какого соединения войдет α-углеродный атом)?