ТЕМА 2. ДОСЛІДЖЕННЯ БУДОВИ І ФІЗИКО-ХІМІЧНИХ ВЛАСТИВОСТЕЙ БІЛКІВФЕРМЕНТІВ
Актуальність теми.
Ферменти це біологічні каталізатори реакцій обміну речовин. Білкова природа
ферментів обумовлює їх високу лабільність в залежності від багатьох факторів. Так, в залежності від температури тіла людини, а також від рН внутрішнього середовища
організму активність ферментів може змінюватись, що призводить до розвитку патологічних процесів.
Мета та вихідний рівень знань.
Загальна мета.
Вивчити фізико-хімічні властивості білків-ферментів.
Конкретні цілі:
1.Аналізувати механізми регуляції основних метаболічних процесів;
2.Трактувати біохімічні закономірності будови та функціонування різних класів фе-
рментів;
3.Аналізувати фізико-хімічні властивості білків-ферментів.
Вихідний рівень знань-вмінь: знати будову білків, класифікацію та структуру протеїногенних амінокислот.
Оpiєнтувальна каpтка для самостiйного вивчення студентами навчальної лiтеpатуpи пpи пiдготовцi до заняття.
Зміст і послідовність дій |
Вказівки до навчальних дій |
1. Практичне вивчення фізико- |
1.1. Довести білкову природу ферментів біуре- |
хімічних властивостей білків- |
товою реакцією, реакцією Фоля. Пояснити |
ферментів. |
принципи методу. |
1.2.Пояснити термолабільність ферментів на прикладі визначення активності амілази слини, яка попередньо нагріта або охолоджена та по-
передньо не оброблена.
1.3.Вивчити залежність ферменту слини амілази від рН середовища.
2.Ферменти як біологічні каталі- 2.1. Фізико-хімічні властивості білків-
затори реакцій обміну речовин. |
ферментів. |
2.2.Електрохімічні властивості, розчинність.
2.3.Термодинамічна стабільність білкових мо-
лекул ферментів; денатурація.
3.Будова ферментних білків. 3.1. Апофермент, кофермент (простетична
Прості і складні ферменти. група). Олігомерні білки-ферменти, мульти-
|
ензимні комплекси. |
|
3.2. Мембранно-асоційовані ферменти. |
4. Методи виділення ферментів з |
4.1. Ультрацентрифугування. |
біооб’єктів. |
4.2. Гельта іонообмінна хроматографія. |
|
4.3. Електрофорез. |
Алгоритм лабораторної роботи.
1. Довести білкову природу ферментів біуретовою реакцією, реакцією Фоля. 1.1. Біуретова реакція на білки:
Принцип реакції: іони міді (Cu2+) у лужному середовищі утворюють з пептидними
групами комплексну сполуку синьо-фіолетового кольору.
Хід роботи: у пробірку налити 0,5 мл досліджуваного розчину та 0,5 мл біуретового реактиву. Розвиваєть синьо-фіолетове забарвлення.
1.2. Реакція Фоля.
11