1. Изучить структурную организацию молекул иммуноглобулинов:

Отметьте на рисунке: 1 – H-цепь 2 – L-цепь 3 - Шарнирный участок 4 – Fab-фрагмент 5 – Fc-фрагмент 6 – Вариабельный домен легкой цепи 7 – Константный домен легкой цепи 8 – Эпитоп 9 – Паратоп (активный центр) 10 - Вариабельный домен тяжелой цепи 11 – Константные домены тяжелой цепи Валентность данного Ig ________

Отметьте на рисунке: 1 – IgG, 2 – IgM, 3 – IgA, 4 – s IgA, 5 – IgD, 6 – IgE

Характеристика иммуноглобулинов

Класс Ig	Концентрация	Характеристика
Ig__________		Молекулярная масса 154 кДа. 85% всех иммуноглобулинов. Четыре субкласса. Мономер. Проникает через плаценту. Высокоэффективны в противоинфекционной защите.
Ig__________		Молекулярная масса 900 кДа. 5-10% всех иммуноглобулинов. Пентамер. Образуются преимущественно при первичном иммунном ответе.
Ig__________		Молекулярная масса 160 кДа. 5-15% всех иммуноглобулинов. Два субкласса. Мономерные, димерные, тримерные. Сывороточный является мономером, а секреторный ди- или триммером. Секреторный выделяется на поверхность слизистой, обеспечивая местный иммунитет.
Ig__________		Молекулярная масса 190 кДа. ‹ 1% всех иммуноглобулинов. Мономер. Высокая цитофильность. Участвуют в аллергических реакциях немедленного типа.
Ig__________		Молекулярная масса 185 кДа. 1% всех иммуноглобулинов. Мономер. Экспрессируются в основном на мембране В-лимфоцитов, участвуют в их дифференцировке, выполняют рецепторную функцию.

2. Схемы прямой и непрямой реакции Кумбса (нарисуйте)

Прямая реакция Кумбса  позволяет выявить неполные антитела, фиксированные на эритроцитах. К капле антиглобулиновой сыворотки (АГС), полученной иммунизацией кроликов глобулинами человека, прибавляют взвесь эритроцитов крови исследуемого человека, отмытых от плазмы. Результат учитывают через 5-15 мин.

Непрямая реакция Кумбса  основана на способности неполных антител фиксироваться на нормальных эритроцитах при инкубации их в термостате с сывороткой исследуемого. К исследуемой сыворотке прибавляют взвесь отмытых от плазмы эритроцитов здорового человека 0-группы крови (эритроцитарного диагностикума). Смесь ставят в термостат. Затем реакция ставится так же, как и прямая.

Схема прямой реакции Кумбса	Схема непрямой реакции Кумбса

3. Метод оценки В-системы.

►Количественная оценка.

Определение количества В-лимфоцитов методом розеткообразования с эритроцитами мыши.

Принцип метода: На 1 этапе из крови выделяют лимфоциты. На 2 этапе с помощью реакции розеткообразования с эритроцитами мыши определяют процент В-лимфоцитов от общего числа лимфоцитов. При добавлении к суспензии лимфоцитов эритроцитов мыши, последние адсорбируются В-лимфоцитами, а образующиеся при этом структуры называются розетками. Общее количество лимфоцитов подсчитывают под микроскопом по количеству розеток.

Препарат _________________________________________________________________ Окраска __________________________________________________________________ Увеличение _______________________________________________________________ Метод выявляет маркер CD 20 на поверхности В-лимфоцитов; Содержание В-лимфоцитов – (CD 20) = 8-20% от общего числа лимфоцитов.

►Качественная (функциональная) оценка

Определение концентрации иммуноглобулинов G класса в сыворотке крови методом простой радиальной иммунодиффузии по Манчини (в реакции преципитации).

Принцип метода: На стеклянную пластинку (или чашку Петри) наливают агар, смешанный с антителами против IgG. После застывания в агаре делают лунки диаметром 2 мм. В один ряд лунок вносят разведения стандартной сыворотки с известной концентрацией IgG. В другие лунки добавляют исследуемые сыворотки крови больных. Иммуноглобулины диффундируют в агар и на месте встречи с антителами, которые находятся в агаре, образуется зона кольца преципитации. Диаметр этого кольца зависит от концентрации Ig (чем больше Ig, тем больше диаметр). Измеряют диаметр зоны преципитации для трех разведений стандартной сыворотки и по ней на полулогарифмической бумаге строят график зависимости квадрата диаметра кольца преципитации (Д) от количества Ig в сыворотке крови. Затем измеряют диаметр кольца преципитации исследуемой сыворотки, наносят на построенный график и определяют концентрацию Ig. Стандарт IgG = 10-20 г/л.

Заключение __________________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________________________

ЗАНЯТИЕ № 12

ТЕМА: Т-ЛИМФОЦИТЫ. КЛЕТОЧНЫЙ ИММУННЫЙ ОТВЕТ. ИММУНОДИАГНОСТИКА ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ

ПЕРЕЧЕНЬ КОНТРОЛЬНЫХ ВОПРОСОВ

1. Т-лимфоциты: развитие, маркеры. Субпопуляции Т-лимфоцитов (Т-хелперы нулевые, Т-хелперы 1, 2 типов, Т-регуляторы; Т-эффекторы: цитотоксические Т-лимфоциты, Т-лимфоциты памяти).

2. Т-клеточный рецептор: строение, типы, генетический контроль, разнообразие. Роль Т-клеточного рецептора. Т-зависимые антигены.

3. Клеточный иммунный ответ, динамика развития, мишени действия Т-килеров, проявления.

4. Серологический метод исследования: задачи, этапы, оценка. Общая классификация иммунологических методов диагностики: серотипирование, серодиагностика

5. Диагностикумы. Диагностические иммунные сыворотки. Методы их получения. Поливалентные, монорецепторные адсорбированные (поликлональные) и моноклональные диагностические сыворотки и тест-системы.

6. Качественная и количественная оценка серологических реакций: титр иммунных сывороток, диагностический титр, нарастание титра антител, аффинность антител, их авидность.

7. Механизмы течения и проявления реакций агглютинации. Нагрузочные реакции агглютинации: постановка и учет реакции непрямой гемагглютинации (РНГА), латекс-агглютинации. Реакция ко-агглютинации. Оценка результатов.

8. Реакции иммунопреципитации: варианты постановки. (кольцепреципитация по Асколи, двойная диффузия в агаре, иммуноэлектрофорез), методы учета и оценки.

9. Реакции нейтрализации токсина антитоксической сывороткой: варианты постановки.

ЛАБОРАТОРНАЯ И САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА