2►Изучить схему выделения, индикации и идентификации бактериофага (этапы).

3►Учесть результаты качественного определения (индикации) бактериофага в исследуемом материале:

А) на жидких питательных средах; Б) на плотных питательных

средах.

4►Учесть качественные пробы по идентификации бактериофага в исследуемом фильтрате методами Фишера, Фюрта, и методом «стекающей капли» по Отто. 

5► Определить титр бактериофага в исследуемом фильтрате: А) по Аппельману; Б) по Грациа.

6► Определить фаготипы различных штаммов стафилококка и записать фагоформулу.

Схема выделения и идентификации бактериофага:

1 Этап. Выделение.

Фильтрация исследуемого материала через бактериальные фильтры, нагревание до 75°С и /или обработка хлороформом с целью устранения сопутствующей микрофлоры.

2 Этап. Индикация и идентификация.

2.1 МЕТОД ФИШЕРА Фаг наносится на поверхность засеянной на МПА культуры микроорганизма Вывод:____________________________ __________________________________ __________________________________	1. S.flexneri 2. S.sonnei 3. S.Schottmuelleri 4. E.coli 5. S.Typhi 6. S.Paratyphi A		2.2 МЕТОД ФЮРТА Фаг вносится в расплавленный и остуженный агар, на который штрихом засевают культуры микроорганизмов Вывод:_____________________________ ___________________________________ ____________________________________
2.3 Метод «стекающей капли» по Отто На чашку с МПА засевают газоном кишечную палочку и пипеткой наносят исследуемый фильтрат. Инкубация в термостате.				E.coli (газон) лизис культуры

Вывод:_______________________________________________________________________________________

3 Этап. Титрование

Титрование - это_______________________________________________________________________________

3.1 В жидкой питательной среде по Аппельману (в демонстрационных посевах)

Разведения	10-1	10-2	10-3	10-4	10-5	10-6	10-7	10-8	10-9	10-10	КК	КФ
Лизис

(-) результат - рост индикаторного штамма (муть)

(+) результат - фаголизис индикаторного штамма

Вывод. Титр бактериофага равен ________________________________________________________________

3.2 Методом агаровых слоев по Грациа (в демонстрационных посевах)

Количество бактериофагов выражают в количестве бляшкообразующих единиц на 1 мл исследуемого материала (БОЕ / мл). Для расчета содержания количества бактериофагов в 1 мл фаголизата необходимо умножить количество негативных колоний в газоне индикаторной бактериальной культуры на разведение исследуемого материала.

1мл разведения 10

Число негативных колоний _________

В 1мл разведения 10 содержится __________ фаговых частиц

Вывод. Концентрация бактериофагов в фаголизате ___________ БОЕ/мл

Практическое использование бактериофагов:

1. Фаготерапия_______________________________________________________________________________

2. Фагопрофилактика __________________________________________________________________________

3. Фагодифференцировка ______________________________________________________________________

4. Фаготипирование ___________________________________________________________________________

Фагоформула:

штамма N 1__________

штамма N 2__________

Штаммы St.aureus (газон) от разных больных

Индикаторные стафилофаги (в квадратах)

Вывод (отметить сходство и различия двух штаммов и указать связь с источником их выделения): _____________________________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________________________

ЗАНЯТИЕ № 6

ТЕМА: ГЕНЕТИКА МИКРООРГАНИЗМОВ. МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД ИССЛЕДОВАНИЯ.

ПЕРЕЧЕНЬ КОНТРОЛЬНЫХ ВОПРОСОВ

1. Наследственность. Организация генетического аппарата у бактерий (нуклеоид, плазмиды, IS-последовательности, транспозоны).

2. Принципы функционирования бактериального генома. Организация оперона. Генотип и фенотип.

3. Плазмиды, классификация, структура и свойства плазмид. R-плазмида, особенности структуры и функции. Плазмиды бактериоциногении.

4. Изменчивость микробов. Модификации у бактерий, значение, основные проявления и свойства (ненаследственный характер, адаптивность, высокая частота прямых и обратных изменений, множество индуцирующих факторов).

5. Генотипическая изменчивость. Мутации и их классификация. Мутагены. Фенотипические проявления мутаций. Судьба мутантов. Диссоциация у бактерий. Влияние отбора. Система репарации повреждений генома.

6. Рекомбинационная изменчивость. Механизмы образования комбинированных геномов. Частота изменений отдельных признаков. Трансформация, трансдукция, конъюгация.

7. Практическое значение знаний о генетике микробов. Принципы генетического картирования.

8. Методы генетического анализа (молекулярная гибридизация, полимеразная цепная реакция, блотинг, секвенирование).

9. Понятие о генной инженерии и использование ее методов в микробиологии и биотехнологии. Получение и применение генно-инженерных вакцин и цитокинов.

ЛАБОРАТОРНАЯ И САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА

1► Исследовать H- и О- модификации Proteus vulgaris на МПА с фенолом и без него.

Модификационная изменчивость культуральных свойств штамма Proteus vulgaris.

Чашки с МПА (одна с фенолом, другая без фенола) засеваются штриховым методом культурой Proteus vulgaris. Учет результатов проводится через сутки после посева.