Методы оценки т-системы:

►Количественная оценка

Определение количества Т-лимфоцитов (CD3+) методом иммунных розеток в готовых препаратах

Принцип метода: На 1 этапе методом центрифугирования в градиенте плотности из крови выделяют лимфоциты. На 2 этапе с помощью реакции розеткообразования с эритроцитами барана определяют процент Т-лимфоцитов от общего числа лимфоцитов. Реакция розеткообразования основана на наличии на поверхности Т-лимфоцитов рецепторов, способных фиксировать эритроциты барана. При добавлении к суспензии лимфоцитов эритроцитов барана, последние адсорбируются Т-лимфоцитами, а образующиеся при этом структуры называются розетками. Общее количество лимфоцитов подсчитывают под микроскопом по количеству розеток.

Препарат _____________________ Окраска ______________________ Увеличение __________________

►Качественная (функциональная) оценка

1. Оценка способности к пролиферации в реакции бластной трансформации лимфоцитов

Принцип метода: Т-лимфоциты под воздействием некоторых биостимуляторов, например, фитогемагглютинина (ФГА) в культуре in vitro способны превращаться в большие бластоподобные клетки с разрыхленным ядром и базофильной цитоплазмой, активно синтезирующие ДНК.

2. Определение количества т-супрессоров, т-хелперов и т-киллеров в реакции иммунофлюоресценции (риф)

Принцип метода: Лимфоцитарная взвесь обрабатывается моноклональными антителами против CD-маркеров отдельных субпопуляций Т-лимфоцитов, а затем меченой флюорохромом антиглобулиновой сывороткой. Подсчет флюоресцирующих клеток проводят под люминесцентным микроскопом (двухэтапная РИФ).

Иммунологический статус Тесты первого уровня

№	Тест	Показатель	Содержание
1.	Число лейкоцитов; лейкоформула	Общее число лейкоцитов	4,5-9,5 тыс/мкл
		Нейтрофилы	50-77%
		Лимфоциты	18-38% (1250-2500 в 1 мкл)
		Моноциты	2-10%
		Базофилы	0,5-1,0%
		Эозинофилы	1-5%
2.	Т- и В-лимфоциты	Т-лимфоциты	55-75%
		Т-лимфоциты абс.	1000-2000 в 1 мкл
		В-лимфоциты	10-15%
		В-лимфоциты абс.	100-300 в 1 мкл
3.	Уровень Ig в сыворотке крови	Ig M	0,5-2,0 г/л
		Ig G	10,0-20,0 г/л
		Ig A	1,25-3,0 г/л
4.	Фагоцитарная активность лейкоцитов крови (показатели фагоцитоза)	Фагоцитарный индекс	Для кандиды 1-2,5 Для стафилококка 4-9
		Фагоцитарное число	Для кандиды 40-90 Для стафилококка 40-80

Источник информации: О.К. Поздеев «Медицинская микробиология» под редакцией акад. РАМН В.И. Покровского (Москва, 2001)

Тесты второго уровня (аналитические)

1. Определение субпопуляций Т-лимфоцитов (Т-хелперы, Т-супрессоры, Т-киллеры).

2. Оценка пролиферативной активности Т- и В-лимфоцитов (реакция бласттрансформации).

3. Определение спонтанной миграции лейкоцитов и тест торможения миграции лейкоцитов.

4. Определение лимфоцитов, несущих поверхностные иммуноглобулины различных классов (В-лимфоцитов).

5. Определение медиаторов иммунной системы.

6. Кожные тесты гиперчувствительности замедленного типа.

ЗАНЯТИЕ № 16

ТЕМА: ИТОГОВОЕ ЗАНЯТИЕ ПО РАЗДЕЛАМ «ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ И ПРИКЛАДНАЯ МЕДИЦИНСКАЯ ИММУНОЛОГИЯ»

ПЕРЕЧЕНЬ КОНТРОЛЬНЫХ ВОПРОСОВ

1. Основные понятия экологической микробиологии (популяция, биотоп, микробиоценоз, экосистема, биосфера). Экологические связи микробов (симбиоз, комменсализм, нейтрализм, конкуренция, паразитизм, хищничество).

2. Микрофлора тела человека. Нормальная (резидентная) микрофлора человека. Формирование и развитие нормальной микрофлоры. Функции нормальной микрофлоры.

3. Дисмикробиоценоз (дисбактериоз), причины, виды, принципы коррекции.

4. Понятие об инфекции. Определение, общая характеристика. Отличия инфекционных болезней от неинфекционных.

5. Роль микроорганизма в инфекционном процессе. Инфицирующая доза. Способы заражения. Входные ворота. Патогенность и вирулентность. Генетический контроль патогенности и вирулентности. Факторы, повышающие и снижающие вирулентность микробов.

6. Факторы патогенности. Методы определения вирулентности, единицы. Облигатно-патогенные и условно-патогенные микроорганизмы.

7. Токсичность и токсигенность микроорганизмов. Эндотоксины, свойства, получение, применение. Экзотоксины, свойства, получение, единицы измерения. Типы экзотоксинов, механизм действия.

8. Роль макроорганизма в развитии и течении инфекционных болезней. Наследственные факторы. Анатомо-физиологическое состояние организма. Роль условий жизни в развитии и течении инфекционных болезней.

9. Динамика инфекционного процесса, его особенности.

10. Биологический метод исследования, этапы, оценка. Лабораторные животные. Способы заражения.

11. Факторы и механизмы неспецифической резистентности. барьерные и противомикробные свойства кожи, слизистых оболочек, лимфатических узлов, ареактивность тканей, нормальная микрофлора.

12. Гуморальные факторы неспецифической защиты: эндогенные пептиды-антибиотики, пропердин, лизоцим, b-лизины, фибронектин, белки острой фазы воспаления.

13. Интерфероны. Группы интерферонов по продуцентам, типы ИФН по способу образования. Механизм действия интерферонов.

14. Система комплемента. Структура. Пути активации (классический, альтернативный). Активаторы системы комплемента. Ингибиторы и инактиваторы комплементарного каскада. Биологические функции активированных компанентов комплемента. Анафилатоксины, их биологическая роль. Мембраноатакующий комплекс. Методы определения активности системы комплемента.

15. Полиморфноядерные и мононуклеарные фагоциты (происхождение, характеристика, функции). Фагоцитарная реакция (фазы, механизмы и факторы внутриклеточной бактерицидности). Исходы фагоцитоза.

16. Показатели фагоцитоза и методы их определения.

17. Естественные киллеры. Механизмы распознавания и цитолиза клетки-мишени.

18. Антигены: определение, принцип строения, свойства антигенов. Классификации антигенов. Групповые, видовые, вариантные, стадийные антигены. Перекрестные антигены. Антигенная мимикрия. Антигены бактерий. Антигенные свойства грибов.

19. В-лимфоциты: развитие, маркеры. В-клеточный рецептор: структура (константные и вариабельные участки, полипептидные цепи). Механизмы В-клеточной активации. Функция В-лимфоцитов.

20. Антитела. Структура молекулы иммуноглобулинов: вариабельные и константные области, расположение и структура доменов. Антигенсвязывающие участки.

21. Антителогенез, динамика синтеза антител. Поликлональные и моноклональные антитела

22. Классы и субклассы иммуноглобулинов, изотипы, аллотипы, идиотипы. Биологические свойства иммуноглобулинов

23. Механизм взаимодействия антител с антигенами. Валентность, аффинность и авидность антител. Перекрестные реакции. Полные и неполные антитела. Иммунные комплексы.

24. Биологические эффекты взаимодействия антител с антигенами: активация комплемента, нейтрализация токсинов и вирусов, лизис, агглютинация и опсонизация микроорганизмов, торможение адгезии, инвазии, подавления фагоцитарной реакции.

25. Прямая и непрямая реакция Кумбса. Простая радиальная иммунодиффузия в агаре по Манчини.

26. Т-лимфоциты: развитие, маркеры. Субпопуляции Т-лимфоцитов (Т-хелперы нулевые, Т-хелперы 1, 2 типов, Т-регуляторы; Т-эффекторы: цитотоксические Т-лимфоциты, Т-лимфоциты памяти).

27. Т-клеточный рецептор: строение, типы, генетический контроль, разнообразие. Роль Т-клеточного рецептора. Т-зависимые антигены.

28. Клеточный иммунный ответ, динамика развития, мишени действия Т-килеров, проявления.

29. Серологический метод исследования: задачи, этапы, оценка. Общая классификация иммунологических методов диагностики: серотипирование, серодиагностика

30. Диагностикумы. Диагностические иммунные сыворотки. Методы их получения. Поливалентные, монорецепторные адсорбированные (поликлональные) и моноклональные диагностические сыворотки и тест-системы.

31. Качественная и количественная оценка серологических реакций: титр иммунных сывороток, диагностический титр, нарастание титра антител, аффинность и авидность антител.

32. Механизмы течения и проявления реакций агглютинации. Нагрузочные реакции агглютинации: постановка и учет реакции непрямой гемагглютинации (РНГА), латекс-агглютинации. Реакция ко-агглютинации. Оценка результатов.

33. Реакции иммунопреципитации: варианты постановки. (кольцепреципитация по Асколи, двойная диффузия в агаре, иммуноэлектрофорез), методы учета и оценки.

34. Реакции нейтрализации токсина антитоксической сывороткой.

35. Реакции иммунного лизиса и связывания комплемента: методика постановки, учета и оценки, применение в диагностике инфекционных заболеваний.

36. Реакции иммунофлюоресценции. Диагностическое значение, информативность, варианты постановки реакций: прямой и непрямой.

37. Иммуноферментный анализ. Варианты постановки. Возможные ошибки и ограничения метода, иммуноферментного анализа.

38. Иммуноблотинг (вестерн-блотинг). Проведение и учет результатов. Варианты применения метода.

39. Радиоиммунный анализ, сущность, способы постановки, методы учета и оценки реакций, достоинства и недостатки метода.

40. Аллергия, определение, стадии аллергии. Аллергены. Бытовые, пыльцевые, эпидермальные, пищевые, химические, лекарственные, микробные экзоаллергены. Пути проникновения аллергенов в организм. Эндоаллергены.

41. Гиперчувствительность немедленного типа (ГНТ). Медиаторный тип ГНТ (I). Анафилактический шок, механизм развития. Атопии, механизм развития, клинические формы. Цитотоксический тип ГНТ (II). Иммунокомплексный тип ГНТ (III).

42. Гиперчувствительность замедленного типа (ГЗТ, IV). Контактная аллергия. Инфекционная аллергия.

43. Методы диагностики аллергических болезней. Кожные пробы. Провокационные тесты. Элиминационные тесты. Методы аллергодиагностики in vitro – определение антигенспецифических и антигеннеспецифических IgЕ.

44. Общие принципы специфической и неспецифической профилактики и терапии аллергических заболеваний. Проведение специфической аллерговакцинации. Профилактика аллергических заболеваний на производстве, в быту, при оказании медицинской помощи

45. Иммунопрофилактика инфекционных болезней. Определение. Активная иммунопрофилактика. Вакцины, требования, предъявляемые к ним. Типы вакцин (инактивированные, живые, анатоксины, химические, субъединичные, генно-инженерные). Адъюванты. Основные бактериальные, вирусные и паразитарные вакцины. Методы оценки поствакцинального иммунитета. Защитный титр антител.

46. Пассивная иммунопрофилактика. Определение. Иммунные сыворотки и иммуноглобулины. Типы и способы получения. Показатели активности. Показания к применению.

47. Иммунотерапия. Определение. Препараты для иммунотерапии. Механизм действия. Показания к применению. Осложнения иммунопрофилактики и иммунотерапии.

48. Иммунный статус организма. Популяционные и возрастные особенности иммунного статуса. Показатели и методы определения и оценки.

49. Иммунограмма. Показания к назначению иммунограммы. Основные правила интерпретации иммунограмм. Принципы постановки иммунологического диагноза.

50. Иммунодефициты: наследственные и приобретенные. Клинические синдромы.

51. Аутоиммунные болезни. Механизмы развития. Клинические формы. Аутоантигены.

52. Противоопухолевый иммунитет. Концепция иммунного надзора. Характеристика антигенов опухолей. Механизм элиминации опухолевых клеток под действием цитотоксических лимфоцитов и естественных киллеров. Гуморальный тип иммунного ответа на опухолевые антигены, роль в противоопухолевом иммунитете. Механизмы ускользания опухолей от иммунного надзора.

53. Трансплантационный иммунитет. Типы трансплантатов. Трансплантационные антигены. Условия развития реакции иммунного отторжения трансплантата и его механизмы. Способы подавления трансплантационной реакции Осложнения.

54. Аналитическое заключение по результатам оценки иммунного статуса. Соответствие с другими лабораторными тестами.

55. Особенности изменений иммунного статуса при различных иммунопатологических состояниях: первичных и вторичных иммунодефицитах, органоспецифических и органонеспецифических аутоиммунных заболеваниях, аллергических заболеваниях, опухолях.

51