Министерство здравоохранения Республики Беларусь
Учреждение образования
«Гомельский Государственный медицинский университет»
Кафедра микробиологии, вирусологии, иммунологии
Д.В. Тапальский, Т.Н. Ильинская, А.И. Козлова
ОБЩАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ
ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ И ПРИКЛАДНАЯ МЕДИЦИНСКАЯ ИММУНОЛОГИЯ
Рабочая тетрадь
для студентов 2 курса лечебного факультета
Гомель 2010
УДК 579+576.8(07)
ББК 52.64
Т 18
Авторы:
Д.В. Тапальский, Т.Н. Ильинская, А.И. Козлова
Рецензент:
заведующий Центральной научно-исследовательской лабораторией
Гомельского государственного медицинского университета,
кандидат медицинских наук Воропаев Е.В.
Тапальский, Д.В.
Т 18 Общая микробиология. Теоретическая и прикладная медицинская иммунология: рабочая тетрадь для студентов 2 курса лечебного факультета / Д.В. Тапальский, Т.Н. Ильинская, А.И. Козлова. — Гомель: Учреждение образования «Гомельский государственный медицинский университет», 2010. — 44 с.
ISBN
Содержит перечень контрольных вопросов и справочный материал по курсу общей микробиологии, теоретической и прикладной медицинской иммунологии для студентов лечебного факультета (16 практических занятий). Приведены описания и протоколы лабораторных работ, выполняемых студентами на занятиях. Включены задания для контролируемой самостоятельной работы студентов по изучаемым дисциплинам.
Утверждено и рекомендовано к изданию Центральным учебным научно-методическим советом УО «Гомельский государственный медицинский университет» 23 декабря 2009 г., протокол № 12.
УДК 579+576.8(07)
ББК 52.64
ISBN
© Учреждение образования
«Гомельский государственный
медицинский университет», 2010
ЗАНЯТИЕ № 1
ТЕМА: ОСНОВНЫЕ МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ГРУППЫ МИКРООРГАНИЗМОВ. МОРФОЛОГИЯ И УЛЬТРАСТРУКТУРА БАКТЕРИАЛЬНОЙ КЛЕТКИ.
ПЕРЕЧЕНЬ КОНТРОЛЬНЫХ ВОПРОСОВ
Формы и размеры истинных бактерий. Характеристика шарообразных, палочковидных и извитых форм истинных бактерий.
Структура бактерий. Основные отличия прокариотной клетки от эукариотной.
Клеточная стенка грамположительных и грамотрицательных бактерий.
Типы микроскопических препаратов. Техника приготовления фиксированных препаратов.
Техника микроскопии в световом микроскопе. Изучение морфологии микроорганизмов в электронном микроскопе.
Тинкториальные свойства микробов. Красители. Простые способы окраски фиксированных препаратов.
Принципы классификации патогенных прокариот (Берджи, 2001).
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА
1►Ознакомиться с организацией работы кафедры, оснащением и режимом работы бактериологической лаборатории.
2►Приготовить препараты-мазки стафилококка со скошенного агара, зафиксировать, окрасить водно-спиртовым раствором метиленового синего.
3►Изучить правила и технику иммерсионной микроскопии.
4►Приготовить мазки из смеси бульонных культур кишечной палочки, антракоида, сарцин, зафиксировать, окрасить водным раствором фуксина.
|
|
Staphylococcus aureus Окраска по ______________ Увеличение _____________
|
|
Смесь бульонных культур (Escherichia coli, Bacillus anthracoides, Sarcina flava) Окраска по ______________ Увеличение _____________ |
5►В демонстрационных препаратах изучить морфологию микроорганизмов:
|
Стрептококки в чистой культуре |
Пневмококки в органах белых мышей |
Гонококки в гное уретры |
Вибрионы в чистой культуре |
Боррелии в мазке крови
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
(указать методы окраски микроскопических препаратов и особенности морфологии микроорганизмов – форму и расположение в препарате)
ЗАНЯТИЕ № 2
ТЕМА: МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ МОРФОЛОГИИ БАКТЕРИЙ. МИКРОСКОПИЧЕСКИЙ МЕТОД ИССЛЕДОВАНИЯ.
ПЕРЕЧЕНЬ КОНТРОЛЬНЫХ ВОПРОСОВ
Защитные приспособления у микроорганизмов. Споры, стадии и условия образования спор, биологическое значение.
Капсулы бактерий, их значение.
Жгутики, их строение. Реснички. Секс-пили.
Сложные способы окраски. Техника окраски по Граму, Цилю-Нельсену, Бурри-Гинсу, Нейссеру.
Методы исследования микроорганизмов в живом состоянии. КОН-тест. Принцип метода.
САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ И ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА
Техника окраски по Граму (указать, в какие цвета окрашиваются бактерии на каждом этапе окрашивания по методу Грама/ раскрасить таблицу)
|
Этап окраски |
Грамположительные бактерии |
Грамотрицательные бактерии |
|
1. Окрашивание _________________________ (время экспозиции ______ ) |
|
|
|
2. Обработка ____________________________ (время экспозиции ______ ) |
|
|
|
3 !. Обработка ___________________________ (время экспозиции ______ ) |
|
|
|
4. Окрашивание __________________________ (время экспозиции ______ ) |
|
|
Основные морфологические группы бактерий (изобразите в виде цветных рисунков в соответствии с окраской по Граму):
|
КОККИ | |||||
|
Диплококки |
Стрептококки |
Стафилококки |
Сарцины | ||
|
|
|
|
| ||
|
ПАЛОЧКИ | |||||
|
Бактерии |
Бациллы |
Стрептобациллы |
Клостридии | ||
|
|
|
|
| ||
|
ИЗВИТЫЕ ФОРМЫ | |||||
|
Вибрионы |
Спириллы |
Спирохеты | |||
|
|
|
| |||
1►Окраска по Граму мазков из бульонной культуры стафилококка, агаровой культуры кишечной палочки и их смеси. Зарисовка препаратов.
|
|
Смесь бактерий (Staphylococcus aureus, Escherichia coli) Окраска по ______________ Увеличение _____________
|
2►Приготовление мазка из культуры дифтерийной палочки, окраска метиленовым синим по Леффлеру и по Нейссеру. Зарисовка препаратов.
|
|
Corynebacterium diphtheriae Окраска по ______________ Увеличение _____________
|
|
Corynebacterium diphtheriae Окраска по ______________ Увеличение _____________
|
3►Постановка и учет результатов КОН-теста с культурами золотистого стафилококка и кишечной палочки.
Результат КОН-теста ___________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
ДЕМОНСТРАЦИИ
|
C.diphtheriae |
Bordetella |
Escherichia coli |
B. anthracis |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
(указать методы окраски микроскопических препаратов и особенности морфологии микроорганизмов – форму и расположение в препарате)
4►Приготовление мазка из агаровой культуры спороносных бацилл, окраска по Цилю-Нельсену (или по методу Ожешко), микроскопия и зарисовка.
Техника окраски по Цилю-Нельсену (указать, в какие цвета окрашиваются бактерии на каждом этапе окрашивания/ раскрасить таблицу)
|
Этап окраски |
Окраска спор |
Окраска кислото-устойчивых бактерий |
|
1. Обработка __________________________ (время экспозиции _________ ) Также необходимо _____________________ ______________________________________
|
|
|
|
2 !. Обработка _________________________ Концентрация __________
|
|
|
|
3. Окрашивание ________________________ (время экспозиции __________ )
|
|
|
* МТ – Mycobacterium tuberculosis; Str – стрептококк.
5►Микроскопия препаратов микроорганизмов, окрашенных по Цилю-Нельсену. Зарисовка препаратов.
|
|
Bacillus anthracoides Окраска по ______________ Увеличение _____________
|
|
Mycobacterium tuberculosis в мокроте Окраска по ______________ Увеличение _____________
|
6►Приготовление мазка из агаровой культуры палочки риносклеромы, окраска по Бурри-Гинсу, микроскопия и зарисовка.
|
|
Klebsiella rhinoscleromatis Окраска по __________________ Увеличение _________________
|
7►Приготовление препарата «раздавленная капля» или «висячая капля» из сенного настоя для изучения подвижности (указать особенности микроскопии препарата)
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
ЗАНЯТИЕ № 3
ТЕМА: МОРФОЛОГИЯ СПИРОХЕТ, АКТИНОМИЦЕТОВ, ГРИБОВ, РИККЕТСИЙ, ХЛАМИДИЙ, МИКОПЛАЗМ, L-ФОРМ БАКТЕРИЙ
ПЕРЕЧЕНЬ КОНТРОЛЬНЫХ ВОПРОСОВ
Спирохеты. Систематическое положение и морфология спирохет. Особенности ультраструктуры и химического состава. Методы исследования.
Актиномицеты, морфология, ультраструктура, химический состав. Патогенные виды. Роль актиномицетов в природе и медицине. Методы выявления.
Таксономия хламидий. Морфология, структура, способы выявления. Цикл развития хламидий.
Риккетсии, морфология, ультраструктура, химический состав. Патогенные виды.
Микоплазмы. Классификация. Филогенез. Способы выявления.
Дефектные формы микробов: протопласты, сферопласты, L-формы.
САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ И ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА
1► Приготовление мазков из агаровой культуры дрожжеподобных грибов, окраска водным раствором фуксина, микроскопия.
2► Изучение морфологии плесневых грибов.
|
|
Candida albicans Окраска по ______________ Увеличение _____________ Обозначьте на рисунке: 1- дрожжевая клетка; 2- псевдомицелий.
|
|
Препарат культуры плесневых грибов Окраска по ______________ Увеличение _____________ Обозначьте на рисунке: 1- конидии (спорангии); 2- стеригмы; 3- конидиеносец (спорангиеносец); 4- мицелий. |
3► Микроскопия и зарисовка риккетсий Провацека в готовых препаратах, окрашенных по Романовскому-Гимзе и Здродовскому.
ДЕМОНСТРАЦИИ
|
Rickettsia prowazekii в органах белых мышей |
Rickettsia prowazekii вакцинный штамм |
Borrelia recurrrentis в мазке крови |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
(указать методы окраски микроскопических препаратов и особенности морфологии микроорганизмов – форму и расположение в препарате)
ЗАНЯТИЕ № 4
ТЕМА: ФИЗИОЛОГИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ. БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ (КУЛЬТУРАЛЬНЫЙ) МЕТОД ИССЛЕДОВАНИЯ. БИОХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА МИКРООРГАНИЗМОВ.
ПЕРЕЧЕНЬ КОНТРОЛЬНЫХ ВОПРОСОВ
Питание бактерий. Питательные вещества – источники углерода и азота. Классификация бактерий по типам питания Аутотрофы и хемоорганотрофы
Факторы роста и их источники. Источники минеральных элементов.
Способы и механизмы переноса питательных веществ через мембрану.
Энергетические потребности бактерий. Пути получения энергии у аутотрофов (фотосинтез, хемосинтез). Источники и пути получения энергии у хемоорганотрофов.
Аэробный и анаэробный типы биологического окисления у бактерий. Аэробные, анаэробные, факультативно анаэробные и микроаэрофильные бактерии. Способы создания анаэробных условий.
Задачи, этапы, преимущества и недостатки бактериологического (культурального) метода исследования.
Рост и размножение микроорганизмов. Способы размножения. Бинарное (простое) деление, механизм. Размножение бактериальных популяций.
Принципы и методы культивирования бактерий. Питательные потребности микробов.
Питательные среды для культивирования бактерий. Требования к питательным средам. Классификация питательных сред.
Условия и техника культивирования бактерий. Техника посева на питательные среды. Закономерности и характер роста бактерий на плотных и жидких питательных средах.
Способы выделения чистых культур аэробных и анаэробных бактерий.
Свойства, используемые для идентификации выделенных культур.
САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ И ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА
Бактериологический метод (этапы):
1► 1-й этап выделения чистой культуры аэробных бактерий:
А) Микроскопия патологического материала.
Окраска мазков из патологического материала по Граму. Зарисовка препарата.
|
|
Мазок из патологического материала Окраска по ______________ Увеличение _____________
|
Б) Освоение под руководством преподавателя техники посева патологического материала бактериологической петлей и шпателем на пластинчатые питательные среды.
Посев патологического материала бактериологической петлей на пластинчатый мясопептонный агар (МПА) для получения изолированных колоний.
Классификация питательных сред (указать области применения)
1. По консистенции: ___________________________________________________________________________
2. По происхождению: _________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
3. По составу: ________________________________________________________________________________
4. По назначению:
А) Общего назначения __________________________________________________________________________
Б) Специальные:
элективные (селективные) _________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________________
дифференциально-диагностические (ДДС) ____________________________________________________
____________________________________________________________________________________________
дифференциально-селективные ____________________________________________________________
____________________________________________________________________________________________
В) Обогащения ________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________________
Г) Транспортные _______________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________________
Питательные среды (примеры):
Среда Эндо
Тип среды ____________________________________________________________________________________
Питательная основа ____________________________________________________________________________
Дифференцирующий фактор ____________________________________________________________________
Индикатор ____________________________________________________________________________________
Солевой агар
Тип среды ____________________________________________________________________________________
Питательная основа ____________________________________________________________________________
Элективный фактор ____________________________________________________________________________
Среда Плоскирева
Тип среды ____________________________________________________________________________________
Питательная основа ____________________________________________________________________________
Элективный фактор ____________________________________________________________________________
Дифференцирующий фактор ____________________________________________________________________
Индикатор ____________________________________________________________________________________
Желточно-солевой агар
Тип среды ____________________________________________________________________________________
Питательная основа ____________________________________________________________________________
Элективный фактор ____________________________________________________________________________
Дифференцирующий фактор ____________________________________________________________________
Индикатор ____________________________________________________________________________________
2► 2 этап бактериологического метода исследования (выделение чистой культуры):
А) Изучение изолированных колоний (эшерихий, стафилококка) на пластинчатом МПА..
|
Изучаемые культуральные свойства |
1 тип колоний |
2 тип колоний |
|
- форма колонии |
|
|
|
- консистенция |
|
|
|
- размер колонии |
|
|
|
- цвет |
|
|
|
- характер края |
|
|
|
- характер поверхности |
|
|
Б) Приготовление мазков из отобранных колоний (окраска по Граму).
|
2. Морфология микроорганизмов из изолированных колоний (окраска по Граму)
|
В) Пересев изолированных колоний на скошенный МПА для накопления чистой культуры.
3►Выделение чистой культуры анаэробных бактерий: посев суспензии почвы на среду Китта-Тароцци для выделения патогенных клостридий
Методы создания анаэробиоза: ________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________
Питательные среды для создания анаэробных условий:
Среда Вильсона-Блера:
Питательная основа____________________________________________________________________________
Дыхательный субстрат__________________________________________________________________________
Редуцирующий фактор__________________________________________________________________________
Тиогликолевая среда (среда для контроля стерильности):
Питательная основа____________________________________________________________________________
Дыхательный субстрат__________________________________________________________________________
Редуцирующий фактор__________________________________________________________________________
Индикатор ____________________________________________________________________________________
Глюкозо-кровяной агар Цейсслера:
Питательная основа____________________________________________________________________________
Дыхательный субстрат__________________________________________________________________________
Редуцирующий фактор__________________________________________________________________________
ЗАНЯТИЕ № 5
ТЕМА: БИОХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА МИКРООРГАНИЗМОВ. МЕТОДЫ ИДЕНТИФИКАЦИИ ЧИСТЫХ КУЛЬТУР АЭРОБНЫХ И АНАЭРОБНЫХ БАКТЕРИЙ. БАКТЕРИОФАГИЯ.
ПЕРЕЧЕНЬ КОНТРОЛЬНЫХ ВОПРОСОВ
Ферменты бактерий, классификация. Способы изучения биохимических свойств микроорганизмов. Практическое использование биохимической активности в идентификации бактерий
Определение сахаролитических свойств, состав сред Гисса; определение протеолитических свойств, определение каталазной и оксидазной активности.
Принцип работы и особенности применения приборов автоматической идентификации бактериальных культур (гемокультиватор, автоматический анализатор).
Особенности культивирования риккетсий и хламидий.
Бактериофаги (фаги). История открытия. Морфология, структурные особенности, химический состав и свойства фагов.
Вирулентные фаги. Фазы взаимодействия с бактериальной клеткой. Результаты взаимодействия фага и клетки. Умеренные фаги. Профаг. Явление лизогении. Фаговая конверсия.
Методы выделения и титрования бактериофагов на плотных и жидких питательных средах.Применение фагов в микробиологии и медицине. Фагодиагностика и фаготипирование.
ЛАБОРАТОРНАЯ И САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА
|
|