2. Метод биологической оценки сердечных гликозидов

НА КОШКАХ

Отбор кошек и их содержание

Для опыта отбирают кошек обоего пола, здоровых, не беременных и не лактирующих, массой 2,0-3,5 кг, находившихся в условиях лабораторного содержания в течение 2-3 сут. За 16-20 ч до начала опыта животных лишают пищи, но не воды.

Техника испытания и принцип расчета

Опыт проводят под легким наркозом (например, 200-250 мг/кг гексенала в мышцу бедра). В отпрепарированную бедренную вену животного вводят канюлю, соединенную тонкой каучуковой трубкой, с градуированной бюреткой вместимостью 50-100 мл, откуда поступает раствор ИП, приготовленный на 0,9% растворе натрия хлорида для инъекций. На пути между бюреткой и канюлей включают стеклянный змеевик, помещенный на водяную баню с температурой 39 град. C для поддержания постоянной температуры (37 град. C) вводимого раствора. В резиновую трубку, соединяющую стеклянный змеевик с канюлей, вставляют с помощью стеклянного тройника термометр, показывающий температуру жидкости, поступающей к животному. Жидкость из бюретки вытекает под постоянным давлением, что достигается введением в бюретку стеклянного капилляра внешним диаметром не более 1 мм, укрепленного при помощи каучуковой пробки в верхнем отверстии бюретки (по принципу сосуда Мариотта). Длина капилляра должна быть такова, чтобы его нижний конец доходил до уровня нижнего деления бюретки. Скорость вытекания жидкости из бюретки регулируют при помощи зажима, наложенного на каучуковую трубку, или стеклянного крана таким образом, чтобы в вену животного в 1 мин. поступал 1 мл испытуемого раствора. Можно использовать другое оборудование, позволяющее соблюдать указанную скорость введения и температуру испытуемого раствора. Введение раствора проводят до наступления остановки сердца. Длительность опыта должна составлять не менее 30 и не более 55 мин. Момент остановки сердца определяют по исчезновению сердечного толчка и контролируют последующим вскрытием грудной клетки. При наличии патологических изменений в органах опыт в расчет не принимают.

Оценку активности ИП можно проводить двумя способами:

1) по сравнению со стандартным образцом;

2) в кошачьих единицах действия (КЕД).

1. Оценка активности ИП по сравнению со стандартным образцом.

В опыт берут не менее 12 кошек: по 6 животных, как для стандартного образца, так и для ИП. Данные, полученные при биологическом испытании стандартного образца, могут быть использованы для расчетов в последующих опытах в течение 15 сут. без повторного испытания.

Результаты опыта обрабатывают согласно подразделу "Обработка результатов определения биологической активности сердечных гликозидов на кошках" общей фармакопейной статьи "Статистическая обработка результатов химического эксперимента и биологических испытаний".

Результаты опытов удовлетворяют требованиям метода, если отношение

_

стандартного отклонения среднего результата S_ к средней смертельной дозе y

y

не превышает 5,7%. В противном случае необходимо увеличить число опытов.

ИП считают прошедшим испытание, если отношение средних смертельных доз

ИП и стандартного образца составляет 90-110%, а их разность не превышает

величины S x t.

d

2. Определение активности ИП в КЕД. Для выражения активности ИП в кошачьих единицах действия (КЕД) расчет проводят для каждого животного по формуле:

K x m

A = ------,

a

где: K - разведение ИП;

m - масса животного в килограммах;

a - доза разведенного ИП в миллилитрах.

Из данных, полученных в опытах, выводят среднее число КЕД и вычисляют (в КЕД и процентах) отклонения результатов отдельных опытов от среднего числа КЕД.

Результаты опытов удовлетворяют требованиям метода, если найденное среднее отклонение от среднего числа КЕД будет меньше максимально допустимого отклонения для данного числа опытов, указанного в табл. 30.2.

Таблица 30.2

Максимально допустимое отклонение отдельных опытов

от среднего значения

Число опытов	Отклонение, %	Число опытов	Отклонение, %
3	9,4	7	16,3
4	11,5	8	17,6
5	13,3	9	18,9
6	14,9	10	20,0

Из табл. 30.2 следует, что испытания можно проводить на 3 кошках (минимальное число опытов), но только в том случае, если полученное в опытах отклонение будет меньше 9,4%. В противном случае, число опытов следует увеличить.

Таблица 30.3

Пример расчета: определение числа КЕД для

раствора строфантина K 0,05% для инъекций

N п/п	Масса животного, кг	Разведение раствора для инъекций	Доза, мл	Число КЕД	Отклонение от средней
					КЕД	%
1.	2,63	1:50	37	3,55	+0,22	+6,6
2.	2,56	1:50	39	3,28	-0,05	-1,5
3.	2,22	1:50	35	3,17	-0,16	-4,8

Среднее число КЕД = 3,33