Биотехнология природного альфа-интерферона и лекарственные формы на

Ò à á ë è ö à 4 4

Оценка показателей белкового спектра сыворотки крови кроликов после ежедневного введения ИФН в таблетках в течение 1,5 мес. после последнего приема

* р > 0,05 по сравнению с контролем.

Ò à á ë è ö à 4 5

Относительная масса органов кроликов через 1,5 мес. ежедневного введения ИФН в таблетках

р > 0,05 по сравнению с контролем.

131

Таким образом, проведенная доклиническая оценка препарата ИФН в таблетках позволяет заключить, что он не обладает токсичностью и относится к нетоксичным веществам.

На основании положительного доклинического контроля трех экс- периментально-производственных серий препарата решением ученого совета ГИСКа и Комитета МИБП МЗ РФ утверждена Программа клинических исследований эффективности препарата и разрешено их проведение на базах городской инфекционной больницы ¹ 1, г. Пермь, и городской инфекционной больницы, г. Киров.

8.3. Оценка фагоцитарной активности нейтрофилов

óкроликов при длительном введении интерферона

âтаблетках

Известно, что препараты ИФН обладают также и иммуномодулирующими свойствами, оказывая существенное влияние на формирование иммунного ответа. В ряду многочисленных иммуномодулирующих эффектов препаратов ИФН важная роль отводится его стимулирующему влиянию на фагоцитоз, описанному на различных моделях как in vivo, òàê è in vitro [1;14]. Возможно, что активирующее влияние на процесс фагоцитоза во многом объясняет положительный клинический эффект препаратов ИФН при заболеваниях различной этиологии. В ряде работ показано, что ИФН не оказывает прямого бактериостатического или бактериоцидного действия, но при этом, по данным ряда исследователей, повышает эффективность лечения бактериальных инфекций. Существует мнение, что модулирующая фагоцитоз активность опосредуется самой молекулой ИФН, и в пользу этой мысли свидетельствуют данные о нейтрализации указанной активности ИФН специфическими антителами к нему[86].

Как известно, нейтрофилы отличаются высокой подвижностью и реакцией на различные факторы, что подтверждает их роль как наиболее мобильных клеток, быстро реагирующих на изменение гомеостаза организма [89]. Поэтому изучение влияния интерферона в таблетках на фагоцитарную активность нейтрофилов является необходимым в плане оценки его иммунотоксических свойств. Изучение влияния ИФН в таблетках проводили модифицированным методом В.Н. Каплина [42] с использованием в качестве объектов фагоцитоза формалинизированных эритроцитов барана. Исследование проведено

132

на 15 самцах кроликах породы Шиншилла, по 5 животных на каждое введение. В табл. 46 представлены данные по изучению фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови кроликов на фоне ежедневного введения ИФН в таблетках из расчета 10000 МЕ/кг (таблетка 30000 МЕ) и 2500 МЕ/кг (таблетка 7500 МЕ) веса животных в течение 1,5 мес.

Таблица 46

Фагоцитарная активность нейтрофилов периферической крови кроликов на фоне ежедневного введения ИФН в таблетках в течение 1,5 мес.

* р < 0,05; ** р < 0,01 по сравнению с контролем.

Результаты, приведенные в табл. 46, свидетельствуют, что при длительном ежедневном оральном введении интерферона в таблетках наблюдается достоверное повышение относительных показателей фагоцитоза. При этом рост показателей происходит за счет увеличения количества фагоцитирующих нейтрофилов.

Таким образом, длительное введение ИФН в таблетках в дозах, в 5,6 и 22,5 раза превышающих курсовую дозу, не оказывает угнетающего влияния на фагоцитоз, а, напротив, приводит к стимуляции неспецифической фагоцитарной активности нейтрофилов. Данный эффект еще раз является подтверждением наличия у препарата иммуномодулирующей активности.

133

8.4.Изучение фармакодинамики интерферона

óдобровольцев после однократного приема таблетки

ñинтерфероном

Изучение уровня противовирусной активности ИФН в плазме крови и моче у добровольцев после приема препарата «Интерферон таблетки 4000 МЕ» проводилось нами впервые. В исследовании приняли участие 10 здоровых добровольцев женского пола в возрасте от 20 до 45 лет.

До введения таблетки, через 1, 3, 5 и 7 часов после введения у всех исследуемых брали кровь из пальца в объеме 0,5 мл в стерильные пластмассовые пробирки, содержащие 0,1 мл 50 % раствора цитрата натрия. Кровь отстаивали в течение 16–18 часов при температуре 8–10 îС, затем центрифугировали при 2000 об/мин в течение 60 мин, отделяли плазму, в которой определяли уровень противовирусной активности интерферона цитопати- ческим методом. Полученные результаты представлены в табл. 47.

Полученные на добровольцах данные еще раз подтвердили, что ИФН хорошо высвобождается из таблетированной формы и всасывается кровеносными сосудами слизистой полости рта, о чем свидетельствует повышение уровня противовирусной активности интерферона в плазме крови добровольцев, сохраняемая в течение 6 ч, что согласуется с результатами, полу- ченными на кроликах.

Ò à á ë è ö à 4 7

Оценка противовирусной активности интерферона в плазме крови добровольцев после однократного приема препарата «Интерферон таблетки»

134

Î ê î í ÷ à í è å ò à á ë . 4 7

Следующий этап наших исследований посвящен определению ИФН в моче добровольцев после одноразового приема препарата ИФН в таблетках (рис. 17). Показано, что ИФНподвергаются быстрому расщеплению в почках. Почечный катаболизм является основным путем элиминации ИФН [59].

Рис. 17. Фармакокинетика интерферона в моче и крови добровольцев

Полученные данные свидетельствуют о том, что ИФН, введенный в таблетке, достаточно быстро всасывается кровеносными сосудами слизистой рта и уже через 1 ч с момента введения обнаруживается в крови добровольцев. Максимально количество ИФН (134,4 33,66 МЕ/мл) в плазме у добровольцев обнаруживается через три часа, при этом в моче отмечается увеличение уровня ИФН в 1,32 раза по сравнению с исход-

135

ным уровнем. Максимальный же уровень ИФН в моче обнаруживается через 7 ч с момента рассасывания таблетки с ИФН, однако в плазме добровольцев к этому моменту количество ИФН возвращается к первона- чальному уровню.

Таким образом, результаты проведенного опыта показали, что таблетки с интерфероном, предназначенные для длительного контакта со слизистой рта и введенные однократно, обладают хорошей абсорбцией и достаточно высокой биодоступностью. Препарат «Интерферон таблетки» для рассасывания в полости рта без разжевывания является эффективной лекарственной формой природного лейкоцитарного интерферона.

Ò à á ë è ö à 4 8

Результаты определения содержания интерферона в моче добровольцев до и после однократного приема интерферона в форме таблетки

В настоящее время завершены клинические исследования эффективности препарата «Интерферон таблетки» при лечении больных гриппом. Полученные результаты показали, что применение перорального

136

интерферона достоверно сокращает сроки основных проявлений гриппозной инфекции, уменьшает частоту развития вторичных осложнений. Важным позитивным моментом его применения является иммуномодулирующий эффект. Препарат хорошо переносится больными, не вызывает побочных эффектов и аллергических реакций. Интерферон в таблетках по клинико-иммунологической эффективности сопоставим с современными противовирусными средствами, применяемыми в терапии гриппа.

Контрольные вопросы к главе 8

1.Какие способы введения экспериментальным животным используются для оценки динамики всасывания таблеток?

2.Как осуществляют оценку динамики противовирусной активности интерферона из таблеток?

3.Какие методы введения специфической составляющей изучаются при оценке фармакокинетики лекарственных средств?

4.Что такое хроническая токсичность и как е¸ оценивают?

5.Какой путь элиминации интерферона является основным и как его можно определить?

6.Как оценивается иммуномодулирующая активность препаратов интерферона?

7.Какой метод используется для оценки фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови?

8.Каковы особенности фармакокинетики интерферона после однократного при¸ма интерферона в таблетках?

137

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВАЖ – вируссодержащая аллантоисная жидкость ВБН – вирус болезни Ньюкасла ВВС – вирус везикулярного стоматита

ВИЧ – вирус иммунодефицита человека ГАЕ – гемагглютинирующая единица ГФ – Государственная фармакопея

ИРЛ – интерфероновая реакция лейкоцитов ИФН – интерферон

ИФН- – интерферон - альфа ИФН- – интерферон - бета ИФН- – интерферон - гамма

КЭ – куриный эмбрион МГД – моноглицериды дистиллированные

ПАВ – поверхностно-активные вещества ПВП – поливинилпирролидон ПЭГ – полиэтиленгликоль

РНГА – реакция непрямой гемагглютинации ФБР – фосфатный буферный раствор ФС – фармакопейная статья

ФСП – фармакопейная статья предприятия ТЦД – титр цитопатического действия

ЧЛИ – человеческий лейкоцитарный интерферон

138

СЛОВАРЬ ТЕРМИНОВ И ПОНЯТИЙ

Абсолютная биодоступность (f) – часть дозы препарата (в %), которая достигла системного кровотока после внесосудистого введения, равна отношению AUC после введения исследуемым методом (внутрь, в мышцу и др.) к AUC после внутривенного введения.

Адсорбция – концентрирование вещества (адсорбата) из объема фаз на поверхности раздела между ними.

Антикоагулянты – тормозят свертывание крови. Различают антикоагулянты прямого действия (влияют непосредственно на факторы свертывания крови и действуют in vivo и in vitro) и непрямого действия (эффективны только in vivo).

Антиоксиданты – замедляют или предотвращают окислительные процессы, приводящие к прогорканию жиров и др. Механизм действия основан на способности антиоксидантов обрывать цепную реакцию окисления в результате взаимодействия с образующимися активными радикалами или промежуточными соединениями

Антитела – белки, обладающие способностью специфически взаимодействовать с определенными антигенами. Синтезируются в организмы иммунокомпетентными клетками.

Биодоступность или биоусвоение – выражается как отношение количества усвоенного организмом вещества, которое вызывает биологи- ческий или фармакологический ответ, к общей принятой дозе. Однако количественная оценка фармакологического ответа довольно сложна. Биодоступность лекарств обычно определяют по концентрации активных ингредиентов в плазме крови после их применения, основываясь на том, что фармакологический эффект лекарства есть функция его концентрации в биофазе, т.е. в среде взаимодействия с рецептором

Биосинтез – синтез веществ в живых системах или вне их воздействия под действием биокатализаторов – ферментов. Характер биосинтеза

âклетке определяется наследственной информацией, закодированной

âе¸ генетическом аппарате. Биосинтез широко применяется в промыш-

139

ленности для получения витаминов, антибиотиков, аминокислот, фер-

ментов и др.

Гидрофобные вещества – вещества, которые не подвергаются сма- чиванию.

Гель-хроматография (гель-фильтрация) – метод разделения смесей, основанный на различии в вероятности проникновения молекул разного размера в поры сорбента при отсутствии адсорбционного взаимодействия молекул с поверхностью сорбента. В лабораторной и промышленной практике в качестве сорбентов используют сефадексы, агар и акриламидные гели.

Грануляция – это процесс превращения порошкообразного материала в зерна определенной величины (отсюда иногда встречающийся в технологии термин «зернение»). Грануляция необходима для улучшения сыпучести таблетируемой смеси и предотвращения ее расслаивания. Существующие в настоящее время способы грануляции подразделяются на следующие основные типы: 1) грануляция продавливанием; 2) грануляция размолом; 3) структурная грануляция.

Диафильтрация – процесс очистки раствора путем фильтрации че- рез мембрану с одновременной подачей чистого растворителя в зону фильтрации.

Замена среды – процесс удаления из культуры кондиционированной среды и внесение среды с иным составом по сравнению с исходной средой.

Индуктор интерферона – вирус или вещество невирусной природы (бактерии, естественные и синтетические двухспиральные РНК, некоторые химические вещества), способные индуцировать интерферонообразование в организме или в культуре клеток.

Индукция – относительное увеличение скорости синтеза того или иного вещества.

Интактное животное – животное не вовлеченное в какой-нибудь эксперимент, процесс, неповрежденное.

Интерферон – неспецифический фактор противовирусного иммунитета. Представляет собой белок с молекулярной массой около 30000.

ИНФ гетерологичный – препарат интерферона, полученный на одном виде животных, а испытываемый на другом виде.

ИНФ гомологичный – препарат, испытываемый на клетках того же вида животных, на которых был получен интерферон.

ИНФ нативный – неочищенный и неконцентрированный препарат интерферона.

140