Биотехнология природного альфа-интерферона и лекарственные формы на

При оценке качества таблеточной массы, содержащей очищенный ИФН с лактозой, показано, что она обладает значительно лучшей сыпучестью – 7,4 0,55 г/с см2 по сравнению с массой, содержащей неочищенный ИФН – 4,6 0,89 г/с см 2, и большей насыпной массой. Учитывая полученные данные, а также технологичность изготовления и сохранение в препарате достаточной противовирусной активности ИФН, в дальнейшем для приготовления таблеточной массы мы использовали сухую субстанцию очищенного интерферона.

С целью изучения прессуемости таблеточной массы субстанцию очищенного интерферона смешивали с наполнителем – лактозой, добавляли аэросил для устранения шероховатости гранул и улучшения сыпучести, стеарат магния в качестве смазывающего вещества и подвергали таблетированию. Использование стеаратов, являющихся гидрофобными веществами, обусловлено тем, что они затрудняют проникновение жидкостей в пористую структуру таблетки, чем замедляют ее распадаемость и, следовательно, пролонгируют действие специфической составляющей [74].

Учитывая, что разрабатываемая таблетированная форма ИФН предназначена для рассасывания в полости рта, эффективность е¸ воздействия прямо пропорционально зависит от длительности е¸ растворения. С целью пролонгирования растворения таблетки в качестве связывающего вещества нами опробованы сахар-рафинад, который добавлялся в таблеточную массу в разных вариантах: в виде сахарной пудры или 10% сахарного сиропа, а также 5 % – в конечной концентрации раствора поливинилпирролидона (ПВП).

Все вспомогательные вещества, наполнители и их количества, использованные нами при приготовлении таблеток с интерфероном, разрешены к медицинскому применению в Российской Федерации и описаны в Государственной фармакопее (издание XI, вып.2., с.154).

Для выбора альтернативного варианта нами изучены различные составы таблеточной массы, содержащей указанные вещества с оценкой показателей сыпучести, однородности, прессуемости, а приготовленные из них экспериментальные серии таблеток с ИФН проверяли на прочность, распадаемость (рис. 12). Данные сравнительной оценки различных составов таблеточной массы по регламентированным показателям представлены в табл. 34.

111

Ò à á ë è ö à 3 4

Сравнительная оценка качества таблетированной формы ИФН в зависимости от состава таблеточной массы

Как видно из табл. 34, для улучшения прессуемости таблеточной массы, необходимо сначала готовить гранулят из лактозы с использованием 5 %-ного раствора ПВП, способствующего достаточно длительному времени распадаемости таблеток. На основании результатов проведенных исследований нами выбрана данная пропись таблеточного состава с интерфероном, которая обеспечивает более длительное время распадаемости таблетки (в течение 9 мин), что необходимо для длительного контакта действующего начала со слизистой полости рта.

Схематично технологический процесс приготовления таблеток с ИФН представлен на рис. 13.

Как видно из рис. 13, процесс получения таблеток с ИФН проходит следующим образом. Все компоненты таблеточной массы просеивают че- рез сита с размером отверстий 2 мм и готовят гранулят, который затем повторно протирают через сито с вышеуказанным диаметром отверстий. По-

112

Рис. 13. Технологическая схема получения таблеток с ИФН

113

ленные таблетки подвергают обеспыливанию, затем контролируют средний вес одной таблетки. Приготовление и фасовку таблеток проводят с соблюдением правил асептики. Для приготовления 10 000 таблеток используют сухую субстанцию ЧЛИ с суммарной активностью не менее 40 млн МЕ в количестве 41,67 г, аэросил 43 г, гранулята лактозы 2884 г, стеарата кальция – 30 г.

По разработанной технологии нами приготовлено 11 эксперимен- тально-производственных серий таблеток с интерфероном – «Интерферон таблетки». В табл. 35 представлены сводные результаты оценки основных регламентированных показателей качества 3 эксперименталь- но-производственных серий препарата «Интерферон таблетки 4000 МЕ», а именно: подлинности, средней массы, распадаемости, специфи- ческой безопасности, специфической активности, микробиологической чистоты. Все серии по результатам контроля в ОБТК НПО «Биомед» и ГИСК им. Л.А. Тарасевича соответствовали регламентированным показателям качества препарата «Интерферон таблетки 4000 МЕ», заложенным в НТД (ФСП,ЭПР и Инструкции по применению).

Ò à á ë è ö à 3 5

Сравнительная оценка качества по основным технологическим показателям трех экспериментально-производственных серий таблеток с ИФН 4000 МЕ

114

Ï ð è ë î æ å í è å ê ò à á ë . 3 5

*Подлинность всех серий была подтверждена реакцией нейтрализации с антиальфа-ин- терфероновым иммуноглобулином; **в 1 г препарата допускается наличие не более 10000 аэробных бактерий, 200 дрожжевых и плесневых грибов; при отсутствии Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Salmonella и не более 100 других кишечных бактерий.

115

7.2. Разработка метода определения противовирусной активности интерферона в таблетированной форме

Степень эффективности лечебного действия таблеток зависит от содержания в них специфически действующих веществ и физиологи- ческой доступности последних. Изучение содержания действующих веществ с использованием объективных методов их количественного определения является непременным требованием оценки лекарственных препаратов.

Биодоступность лекарственных средств обусловлена скоростью их высвобождения из лекарственных форм, на которую могут влиять адсорбция специфических составляющих таблеткобразующими компонентами, скорость растворения активных ингредиентов в биологи- ческих жидкостях и другие факторы. Анализ данных литературы свидетельствует о том, что большинство исследователей допускают возможность оценки биодоступности лекарственных средств в таблетках in vitro. За основу в данном случае берут показатели растворимости или распадаемости.

Любая разрабатываемая технология приготовления лекарственных препаратов, в том числе таблеток с интерфероном, требуют адекватных методов количественного определения действующего начала

âпрессованной лекарственной форме, в данном случае интерферона.

Ñэтой целью нами разработан метод определения противовирусной активности интерферона в таблетках. Опытные серии таблеток изготовлены с различным уровнем противовирусной активности интерферона, который рассчитан, исходя из активности и количества вводимого в таблетку сухого порошка ИФН от 6000 до 20000 МЕ. Средний арифметиче- ский расчетный титр противовирусной активности интерферона в таб-

летках соответствовал 11710,0 2244,0 МЕ/табл. Изучена различная масса таблеток от 0,1 до 0,3 г, в которую заключали ИФН с различной активностью. В качестве экстрагентов ИФН нами опробованы различ- ные растворители, в их числе питательная среда 199, стерильная очи- щенная вода, изотонический раствор натрия хлорида.

Определяли время растворения таблеток в указанных растворителях. Полученные растворы таблеток подвергали стерилизующей фильтрации, используя фильтр фирмы Millipor с диаметром пор 0,22 м, в которых затем определяли уровень противовирусной активности.

116

Данные по определению противовирусной активности ИФН в таблетках при различных условиях растворения таблеток представлены в табл. 36.

Ò à á ë è ö à 3 6

Оценка уровня противовирусной активности интерферона в таблетках, время их растворения в зависимости от природы использованного растворителя

*р <0,05 – по отношению к расчетной противовирусной активности интерферона.

По результатам титрования ИФН в таблетках можно сделать вывод, что наиболее полное высвобождение интерферона из таблеток происходит при его экстрагировании с помощью среды 199. По нашим данным, различия между расчетной активностью 11710,0 2240,0 МЕ/табл. и тестированным уровнем противовирусной активности ИФН после извлече- ния из таблеток с помощью среды 199 – 9643,0 2809,0 МЕ/табл. – статистически недостоверны, р>0,5. При этом время растворения таблеток в среде 199 и других растворителях (физиологический раствор, стерильная очищенная вода) практически равнозначно. Однако уровень противовирусной активности ИФН был несколько выше при применении среды 199.

Полученные данные при определении уровня ИФН в отдельно взятой серии таблеток (табл. 37), экстрагированных с помощью различных растворителей, еще раз подтверждают наше предположение о том, что наиболее лучшим экстрагентом ИФН из таблеток является среда 199.

В настоящее время разработанный нами метод контроля противовирусной активности интерферона в таблетках включен в проект ФСП 42 «Интерферон таблетка 4000 МЕ» и утвержден ГИСК им. Л.А. Тарасевича.

117

Ò à á ë è ö à 3 7

Сравнительная оценка количества экстрагированной противовирусной активности ИФН из таблеток в зависимости от природы растворителя

* В зависимости от массы таблетки.

118

7.3.Оценка стабильности специфической активности интерферона в таблетке в процессе хранения

Следующий этап работы посвящен определению срока годности готовой лекарственной формы ИФН в таблетках. С этой целью 3 серии интерферона в таблетках, изготовленных по предлагаемой нами технологии, хранили в регламентированных условиях: в сухом защищенном от света месте при температуре от 2 до 8 îС. Образцы каждой серии контролировали один раз в три месяца. Определение специфиче- ской активности в лекарственной форме проводили методом, описанным выше. Результаты оценки стабильности свойств серий ИФН в таблетках представлены в табл. 38.

Как видно из табл. 38, полученные серии готовой таблеточной формы интерферона по показателям распадаемости, безвредности, прочности на растирание и отсутствие посторонней бактериальной и грибковой контаминации соответствуют требованиям, предъявляемых к таблетированным лекарственным средствам. Полученные результаты свидетельствуют также о воспроизводимости разработанной технологии получения ИФН в таблетках. По нашим данным, препарат «Интерферон в таблетках» сохраняет качественные показатели в течение 27 месяцев.

Существует несколько способов защиты таблетированных препаратов от влияния внешних воздействий, среди которых основным является применение различных упаковочных средств. В последнее время в фармацевтической практике нашли широкое применение полимерные материалы (комбинированные полиэти- лен-целлофановые пленки, поливинилхлоридные, лакированная алюминиевая фольга). Наиболее широкое применение нашли пленочные контурные упаковки.

Исходя из вышеуказанного, следующим этапом наших исследований явилось изучение влияния различного упаковочного материала на сохранение качественных показателей таблеток с ИФН (табл. 39).

Как видно из табл. 39, в процессе хранения ИФН в таблетках показатели распадаемости и прочности на истирание существенно не отли- чаются как при хранении в контурной ячейковой упаковке, так и в полимерных банках. На уровень противовирусной активности ИФН в таблетках также не влияет вид упаковки, поэтому возможно применение обоих вариантов упаковки.

119

Ò à á ë è ö à 3 8

Оценка стабильности качественных показателей серий препарата «Интерферон таблетки» в процессе длительного хранения

при температуре от 2 до 8 îÑ

* В 1 г препарата выявлено не более 10000 аэробных бактерий, 200 дрожжевых и плесневых грибов; при отсутствии Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Salmonella и не более 100 других кишечных бактерий.

120