Биотехнология природного альфа-интерферона и лекарственные формы на

5.3.Изучение стабильности интерферона

âдифильных основах

Следующий этап работы включал определение срока годности готовой лекарственной формы – мази с интерфероном, изготовленной на дифильной основе. С этой целью 5 серий препарата с различным уровнем противовирусной активности ИФН, изготовленных по способу, предложенному нами и рассмотренному ранее (см. подразд. 5.1.), были заложены на хранение при температуре от 2 до 8 îС. ИФН экстрагировали из лекарственной формы методом, описанным выше (см. подразд. 5.2.). Образцы каждой серии контролировали один раз в три месяца. Результаты экспериментов по оценке срока годности мази с ИФН представлены в табл. 23.

Таблица 23

Оценка стабильности противовирусной активности ИФН в мази в условиях длительного хранения при температуре от 2 до 8 îÑ

Предлагаемая нами технология, предусматривающая применение в ка- честве наполнителя дифильную основу (вазелин, ПАВ и вода), позволяет сохранять активность ИФН– в данной лекарственной форме при использовании различных доз ИФН – от 4000 до 20000 МЕ/г не менее одного года (на протяжении 18 мес.) при температуре от 2 до 8 îÑ.

Для создания готовой лекарственной формы необходимо было изучить влияние упаковочного материала на физико-химические свойства мази. С этой целью было изучено три вида упаковки (табл. 24): пенициллиновые флаконы, укупоренные резиновыми пробками и завальцованные алюминиевыми колпачками; банки из стекломассы оранжевого цвета с треугольным венчиком, укупоренные натягиваемыми крышками с уплотняющим элементом из полиэтилена; тубы алюминиевые с внутренним лаковым покрытием, закрытые бушонами из полиэтилена.

91

Î ê î í ÷ à í è å ò à á ë . 2 4

* Для сравнительной оценки качественных характеристик мази с ИФН (исходные и через 1 год 6 мес. хранения) в различном упа-

ковочном материале использовали регламентированные для мазевых форм показатели.

93

Мазь в асептических условиях фасовали в вышеуказанные упаковочные материалы с помощью шприца-дозатора по 10,0 г, укупоривали и помещали на хранение согласно требованиям ГФ ХI при температуре от 2 до 8 °С. В процессе хранения брали выемки мази из всех трех видов упаковок через каждые три месяца в течение 18 месяцев (время наблюдения).

Полученные результаты показали, что пенициллиновые флаконы укупоренные резиновыми пробками под обкатку, обеспечивают удовлетворительную защиту мази с ИФН от внешних факторов при соблюдении условий хранения. Так, в течение 18 месяцев уровень противовирусной активности ИФН, микробиологическая чистота препарата сохраняются в допустимых нормативных пределах. Однако упаковка имеет недостатки: флаконы из стекла неудобны при транспортировании и применении. Так, для взятия мази из флаконов требуется палоч- ка или специальные тампоны, кроме того, при многократном вскрытии флаконов потребителем возможно микробное обсеменение содержимого флакона.

При хранении мази с интерфероном в банках из оранжевого стекла с треугольным венчиком, укупоренной полимерной натягиваемой крышкой, отмечается статистически достоверное снижение противовирусной активности ИФН (р1<0,05; ð2<0,05). Полимерная крышка недостаточно герметична, в результате чего не обеспечивает защиту мази от внешних факторов. Данная упаковка неудобна при транспортировании и при применении, как и пенициллиновые флаконы.

Исследование образцов мази, взятых из алюминиевых туб, показало, что в этой упаковке не изменяется внешний вид, сохраняются противовирусная активность и микробиологическая чистота препарата в течение 1 года 6 мес. Отсюда следует, что тубы алюминиевые – герметичная упаковка, прекрасно защищающая мазь от внешних воздействий, удобна при транспортировании и применении, обеспечивает ограниченный контакт со всей массой содержимого тубы при использовании мази.

Полученные результаты проведенных исследований свидетельствуют о том, что тубы алюминиевые – наиболее рациональная упаковка для фасовки мази. Образцы мази, исследуемые в течение 18 месяцев, по всем показателям соответствуют исходным показателям качества.

94

Контрольные вопросы к главе 5

1.Какие основы используются для приготовления мазей с интерфероном?

2.Какие основные физические свойства мазевых композиций отражают качество лекарственной формы?

3.Какой метод лежит в основе определения специфической активности интерферона в мази?

4.Какие виды упаковочного материала используются для мазей и в ч¸м их преимущество?

95

ГЛАВА 6 ОЦЕНКА БИОЛОГИЧЕСКОЙ ДОСТУПНОСТИ

МАЗИ С ИНТЕРФЕРОНОМ

Исследования по изучению биодоступности мази с ИФН проводили in vitro и in vivo на кроликах, морских свинках, крысах.

Данные, представленные нами ранее (см.подразд. 5.2.), позволили сделать вывод о том, что ИФН хорошо высвобождается из основы вода/масло, а предложенный нами метод контроля является простым и воспроизводимым.

6.1. Сравнительная оценка динамики противовирусной активности интерферона при ректальном

и внутривенном путях введения

Оценку динамики всасывания ИФН в форме мази и раствора проводили на кроликах породы Шиншилла. Исследовали два способа введения препарата ИФН: ректальный и внутривенный. Известно, что ректальный способ введения сопоставим с внутривенным в связи с интенсивным кровоснабжением прямой кишки и высокой всасывательной способностью [8], кроме того, слизистую прямой кишки используют как биологическую мембрану для введения препаратов [79].

Интерферон в изученных лекарственных формах вводили однократно из расчета 13500 МЕ на 1 кг веса животного. Исследованы две формы (мазь и раствор), содержащие ЧЛИ. Животным первой группы вводили мазь с ИФН ректально, второй группы – раствор (очищенная субстанция ИФН для изготовления мази) вводили ректально с помощью клизмы, третьей – раствор ИФН в виде инъекции внутривенно.

Нами установлено, что кролики хорошо переносят введение ИФН как ректально в форме мази и раствора, так и внутривенно в виде раствора. При наблюдении в течение 24 ч эксперимента и после него, в последующие сутки, каких-либо отклонений в состоянии и поведении живот-

96

ных всех трех групп не выявляется. Функциональные изменения отклонений также не регистрируются: дыхание спокойное, не затруднено, повышенного слюноотделения не отмечено, экскрет оформленный, мо- чеиспускание без особенностей, моча обычная.

Рис. 9. Динамика уровня интерферона в плазме крови кроликов при внутривенном введении очищенного жидкого интерферона (1), при ректальном введении мази с интерфероном (2) и при ректальном введении очищенного жидкого интерферона (3)

Для определения специфической активности ИФН через 30 мин, затем через каждый час в течение 9 ч и через 24 ч проводили заборы крови из ушной вены кроликов в количестве 2–5 мл. Контролем служила сыворотка крови интактных животных. Результаты оценки противовирусной активности ИФН н сыворотках экспериментальных животных представлены в табл. 25 и на рис. 9.

Как видно из табл. 25, до введения интерферона у всех кроликов исходный уровень интерферона находится в пределах 60–125 МЕ/мл. При введении ИФН внутривенно активность его в плазме крови кроликов быстро нарастает и достигает 1250 МЕ/мл через 30 мин, а через 4 ч активность ИФН снижается до исходных показателей.

Подъем уровня ИФН при введении его в форме мази отмечается че- рез 1 ч, затем наблюдается длительное сохранение его уровня в плазме до 5 ч, с последующим постепенным снижением. Исходный уровень

97

ИФН регистрируется через 8 ч. При введении ректально жидкого ИФН отмечается аналогичный подъем уровня противовирусной активности, как и при введении мази, но более быстрое снижение его уровня до исходных показателей.

Ò à á ë è ö à 2 5

Показатели динамики противовирусной активности ИФН в сыворотках крови экспериментальных кроликов при введении интерферона в различных лекарственных формах

На рис. 9 представлены концентрационные кривые интерферона в сыворотках крови кроликов при ректальном и внутривенном путях введения. Полученные кривые позволяют вычислить площади (АUС) под ними с момента введения препарата до точки, когда активность его снижается до исходного уровня.

Отношения площадей (АUС3/ÀUÑ1, ÀUÑ2/ÀUÑ1) при одинаковых дозах дают значения абсолютной биодоступности при внутривенном и ректальном способах введения. Сравнительный анализ площадей под фарма-

98

кокинетической кривой при различных способах введения ИФН показал, что мазь с ИФН, введенная ректально, имеет более высокую степень биодоступности, по сравнению с жидким ИФН, введенным ректально, и составляет 73,6% (54% при ректальном введении жидкой формы ИФН).

6.2. Изучение фармакокинетики мази с интерфероном при введении интраназально и при нанесении на кожу

В связи с тем, что мазь, содержащая ИФН, рекомендуется для интраназального введения или нанесения на кожу и слизистые при герпетиче- ских высыпаниях, нами изучена биодоступность мази с ИФН при данных способах введения.

Изучена динамика всасывания ИФН слизистой верхних дыхательных путей (носовая полость) при нанесении мази, содержащей ИФН, кроликам породы Шиншилла. Мазь вводили однократно в дозе 2000 МЕ в каждый носовой ход. В ходе эксперимента установлено, что животные хорошо переносят нанесение мази, никаких реакций местного характера у них не отмечается.

До введения мази с ИФН уровень противовирусной активности находится в пределах 15 МЕ/мл (исходный уровень). После нанесения мази активность ИФН в сыворотке крови увеличивается через 1 ч до 200 МЕ/мл, максимальный уровень определяется через 2 ч после введения (218,8 МЕ/мл), причем достаточно высокий уровень его сохраняется до 4-го часа, постепенно возвращаясь к исходному уровню к 5 ч (рис. 10).

Следующим этапом являлось изучение эффективности всасывания ИФН из мазевой основы, нанесенной на кожу животных. В эксперименте использовались морские свинки весом 280,0–300,0 г гладкошерстные. Перед нанесением мази с ИФН и дифильной основы, используемой для приготовления мази, животным выстригали шерсть на обоих боках: правый – служил контролем – на него наносили основу мази без ИФН, левый – опытный. Мазь и основу наносили однократно на заднебоковую поверхность спинки животных площадью 2 2 см в количестве 0,5 г (3000 МЕ) на каждое животное.

Время контакта мази с ИФН и дифильной основы с поверхностью кожи был не менее 30 мин. Взятие кожи у опытных животных осуществляли под наркозом, предварительно убрав излишки мази стерильной марлевой салфеткой. Образцы кожи прополаскивали 2–3 раза в теплом 0,9% растворе натрия хлорида с целью удаления остатков мази. Образцы

99

Рис. 10. Противовирусная активность интерферона в сыворотке крови кроликов при интраназальном введении мази с интерфероном

растирали в ступке, ресуспензировали в среде 199, фильтровали через стерильный одноразовый фильтр «Миллипор» с диаметром пор 0,22 мкм и определяли противовирусную активность ИФН. Кинетику всасывания поверхностью кожи ИФН из мази исследовали через 30 мин и в течение 6

÷ежечасно (рис. 11).

Âходе исследований установлено, что животные хорошо переносят воздействие мази с ИФН, никаких реакций местного и общего характера у животных не выявляется.

Рис. 11. Уровень интерферона, проникающего в кожу морских свинок

100