семиотика++для+студов+20г
.pdf
ДНК-диагностика
ПРЯМАЯ КОСВЕННАЯ
Определение мутации, |
Определение хромосомы, |
являющейся |
несущей поврежденный ген |
непосредственной |
при семейном анализе |
причиной заболевания |
|
ПРЯМАЯ ДНК-ДИАГНОСТИКА
+100%-ная точность
+возможна при сомнительном диагнозе
+возможна при полилокусном заболевании
+возможна беспробандная диагностика
-необходимо знание структуры гена
-информативна не для всех семей
Принцип косвенной- θ ДНК-диагностики
|
|
D5S435 |
|
S c |
D5S629 |
5q13 |
|
|
M |
|
|
|
|
|
|
N t |
D5S557 |
|
|
МАР1В
JK53
Локализация генов SMNt и SMNc и некоторых сцепленных с ними полиморфных ДНК-маркеров
- |
θ |
|
КОСВЕННАЯ ДНК-ДИАГНОСТИКА
+не требуется знание гена и спектра мутаций в нем
+информативна практически для всех семей
-абсолютная уверенность в клиническом диагнозе
-точность 95-99%
-обязательно наличие одного локуса заболевания
-обязательно проведение семейного анализа 
Блот-гибридизация по Саузерну
1. После окончания э/ф гель помещают в раствор
щелочи, в котором 2-цепочечные фрагменты ДНК становятся одноцепочечными
2.Перенос ДНК с геля на нитроцеллюлозный или нейлоновый фильтр в буферном растворе фиксируют на фильтре
3.Для визуализации проводят гибридизацию со специфическим по нуклеотидной последовательности меченым радионуклидом или флюоресцентной меткой олигонуклеотидным синтетическим зондом
4.Радиоактивно меченные участки выявляют путем экспонирования фильтра с рентгеновской пленкой Нерадиоактивные метки визуализируют с помощью флюоресценции или с помощью
Эт им мет одом выявляют уникальные фрагмент ы ДНК, размер кот орых
сост авляет приблизит ельно одну миллионную част ь генома
Мет од используют для выявления крупных перест роек в ДНК и некот орых т очечных
антител |
мут аций |
Секвенирование
это общее название методов, которые позволяют установить последовательность нуклеотидов в молекуле ДНК
Анализ 4800 клинически значимых генов, которые связаны с известными наследственными заболеваниями. Подходит для обнаружения точечных мутаций, вставок, делеций, инверсий и перестановок в экзоме
Полное исследование экзома конкретного пациента
Образцы должны поступить в лабораторию течение 48 часов с момента взятия
Одна из цепочек анализируемой ДНК выступает в качестве матрицы для синтеза комплементарной цепочки ферментом ДНК-полимеразой На сегодняшний день секвенирование ДНК по Сэнгеру полностью автоматизировано и проводится на специальных
приборах, секвенаторах. Результаты анализируют с помощью компьютера и представляют в виде последовательности разноцветных пиков, соответствующих четырём нуклеотидам.
Next Generation Sequencing
Техника определения нуклеотидной последовательности ДНК и РНК для получения формального описания их первичной структуры
Технология методов секвенирования нового поколения
(NGS) позволяет «прочитать» единовременно сразу несколько участков генома , что является главным
отличием от более ранних методов
NGS осуществляется с помощью повторяющихся
циклов удлинения цепи, индуцированного
полимеразой , или многократного лигирования олигонуклеотидов
В ходе NGS могут генерироваться до сотен
миллионов и миллиардов нуклеотидных
последовательностей за один рабочий цикл
Спасибо за внимание!