73. Составление наборов и определение групповой принадлежности и ре-зус-фактора крови.

(Эритротестом^тм - цоликлонами Анти – А и Анти – В и Анти – АВ) Оснащение:цоликлоны Анти – А и Анти – В и Анти – АВ, пипетки для взятия и нанесения сывороток, маркированные белые фаянсовые или стандартные планшеты, стеклянные палочки, 0,9% раствор хлорида натрия, песочные часы на 5 мин.

Эритротест^тм - цоликлон Анти – А и Анти – В и Анти – АВ предназначены для определения групп крови человека системы АВО в прямых реакциях гемагглютинации и применяются взамен или параллельно с поликлональными иммунными сыворотками.

Цоликлоны выпускаются в жидкой форме во флаконах объемом 10мл. Цоликлон Анти – А – бесцветный. В качестве консерванта применяется азид натрия в конечной концентрации 0,1%.

Срок хранения – 2 года при температуре 2 - 8°. Вскрытый флакон можно хранить при температуре 2 - 8°С в течение месяца в закрытом виде.

^ Выполнение манипуляции

Определение производится в нативной крови, взятой в консервант; в крови, взятой без консерванта; в крови, взятой из пальца. Используется метод прямой гемоагглютинации на плоскости: на пластине или планшете. Определение группы крови производится в помещении с хорошим освещением при температуре 15 - 25°С.

1. Нанесите на планшет или пластину индивидуальными пипетками Цоликлоны Анти – А, Анти – В и Анти – АВ по одной большой капле (0,1мл) под соответствующими надписями.

2. Рядом с каплями антител нанесите по одной маленькой капле исследуемой крови (0,01-0,03мл).

3. Смешайте кровь с реагентом.

4. Наблюдайте за ходом реакции с Цоликлонами визуально при легком покачивании пластины или планшета в течение 3мин. Агглютинация эритроцитов с Цоликлонами обычно наступает в первые 3 – 5сек, но наблюдение следует вести 3мин ввиду более позднего появления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В.

5. Результат реакции в каждой капле может быть положительным или отрицательным. Положительный результат выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов. Агглютинаты видны невооруженным глазом в виде мелких красных агрегатов, быстро сливающихся в крупные хлопья. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются.

6. Интерпретация результатов реакции агглютинации исследуемой крови с Цоликлонами представлена в таблице

 

Результат реакции* с Цоликлном	Исследуемая кровь принадлежит к группе*
Анти – А	Анти – В	Анти – АВ
-	-	-	О (I)
+	-	+	А (II)
-	+	+	В (III)
+	+	+	АВ (IV)

 

* Знаком (+) обозначено наличие агглютинации, знаком (-) - отсутствие агглютинации.

** Окончательно АВО принадлежность устанавливается по результатам перекрестного определения: антигенов А и В на эритроцитах и изогемагглютининов в сыворотке.

Контроль специфичности реакции агглютинации

В составе Цоликлонов нет высокомолекулярных добавок, способных вызвать неспецифическую полиагглютинацию эритроцитов, поэтому не требуется проведения контроля с растворителями. При положительном результате реакции агглютинации со всеми тремя Цоликлонами необходимо исключить спонтанную неспецифическую агглютинацию исследуемых эритроцитов. Для этого смешайте на плоскости 1 каплю исследуемой крови (эритроцитов) с каплей физиологического раствора. Кровь можно отнести к группе АВ (IV)только при отсутствии агглютинации эритроцитов в физиологическом растворе.

^ Завершение манипуляции:

1. После определения группы крови необходимо сделать отметку о групповой принадлежности на лицевой части истории болезни, занести данные в протокол гемотрансфузии и журнал определения группы крови и резус принадлежности.

2. Использованный материал обрабатывается в соответствии с отраслевыми нормативными документами по дезинфекции, предстерилизационной очистке и стерилизации изделий медицинского назначения.

3. Провести дезинфекцию и утилизацию медицинских отходов в соответствии с СаНПиН 2.1.7.728-99 «Правила сбора, хранения и удаления отходов лечебно-профилактических учреждений»

 

Определение резусной принадлежности крови Оснащение: Эритротест^ТМ - Цоликлон Анти – D Супер, пробирки, 0,9% раствор хлорида натрия, маркированные белые фаянсовые или стандартные планшеты, стеклянные палочки,

Эритротест^ТМ - Цоликлон Анти – D Супер предназначен для выявления D антигена системы резус в эритроцитах человека.

Цоликлон Анти – D Супер выпускается в жидкой форме во флаконах по 2,5 или 10мл (1мл содержит 10доз). В качестве консерванта применяется азид натрия в конечной концентрации 0,1%.

Срок хранения – 1 год в холодильнике при 2 - 8°С. Вскрытый флакон можно хранить в холодильнике в течение месяца в закрытом виде. ^ Выполнение манипуляции

Реакция агглютинации на плоскости

На пластинку со смачиваемой поверхностью нанесите большую каплю (около 0,1мл) реагента. Рядом поместите маленькую каплю (0,01 – 0,05мл) исследуемой крови и смешайте кровь с реагентом. Наиболее крупная агглютинация наблюдается при использовании эритроцитов в высокой концентрации. Реакция агглютинации начинает развиваться через 10 – 15сек. четко выраженная агглютинация наступает через 30 – 60сек. Использование подогретой до 37 - 40°пластинки сокращает время наступления агглютинации. Результаты реакции учитывайте через 3мин. Пластинку после смешивания реагента с кровью рекомендуется покачивать не сразу, а через 20 – 30сек., что позволяет за это время развивать более полной крупнолепестковой агглютинации – резус положительный, если нет агглютинации – резус отрицательный. ^ Завершение манипуляции:

1. После определения резус-фактора необходимо сделать отметку о групповой принадлежности на лицевой части истории болезни, занести данные в протокол гемотрансфузии и журнал определения группы крови и резус принадлежности.

2. Использованный материал обрабатывается в соответствии с отраслевыми нормативными документами по дезинфекции, предстерилизационной очистке и стерилизации изделий медицинского назначения.

3. Провести дезинфекцию и утилизацию медицинских отходов в соответствии с Сан.ПиН 2.1.7.728-99 «Правила сбора, хранения и удаления отходов лечебно-профилактических учреждений»