де (фаза А) и 0,01% СН3С00Н в смеси ацетонитрил:метанол = 1:1 (фаза В). Параметры детектирования: длина волны 230 нм, ширина полосы 12 нм, длина волны сравнения – 180 нм, ширина полосы сравнения – 80 нм. Идентификацию веществ проводят по временам удерживания и по библиотечным спектрам исследуемых соединений для УФ-диапозона.
В случае твердофазной экстракции пробу воды объемом 2 л подкисляют фосфорной кислотой до pH = 2,0, добавляют 200 г хлорида натрия и пропускают через картридж С со скоростью 1 000 мл/ч. Затем картридж высушивают током азота в течение 20 мин и элюируют определяемые вещества 4 мл ацетона. Элюент испаряют в токе азота до сухого остатка, растворяют в 0,5 мл смеси ацетонитрил-вода в соотношении 15:85 и подвергают хроматографированию. Картридж перед употреблением промывают последовательно 5 мл метанола и 6 мл воды, подкисленной до pH = 2.
Контрольные вопросы
1.На чем основано разделение веществ методом ВЭЖХ?
2.Как построена блок-схема жидкостного хроматографа?
3.Каковы области применения ВЭЖХ?
Литература
1.Карцова А.А. Жидкостная хроматография в медицине // Соросовский образовательный журнал. 2000. № 11. С. 35 –40.
2.Майстренко В.Н., Хамитов Р.З., Будников Г.К. Эколого-аналитический мониторинг супертоксикантов. М.: Химия, 1996. С. 270-277.
8.6. Понятие об аффинной или биоспецифической хроматографии
Особое место в жидкостной хроматографии занимает так называемая аффинная, или биоспецифическая, хроматография (от англ. affinityсродство). Аффинная хроматография основана на исключительной способности биологически активных веществ связывать специфически и обратимо другие вещества. Научные основы метода заложены в 1951 году в США, хотя первые экспериментальные указания на большие потенциальные возможности аффинной хроматографии были получены еще в 1910 году Штаркенштейном, использовавшим крахмал для выделения амилазы. В основе аффинной хроматографии лежит уникальное
152
свойство биологически активных соединений узнавать строго определенные вещества, в процессе которого реализуется так называемый принцип молекулярного распознавания. Фермент узнает свой субстрат, антиген-антитело, гормон-рецептор.
Процесс разделения веществ с использованием аффинной хроматографии включает несколько самостоятельных этапов. Хроматографическую колонку заполняют носителем, ковалентно связанным с какимлибо биологически активным веществом (лигандом). Лигандами могут служить самые различные соединения: белки, пептиды, аминокислоты, витамины, нуклеотиды, нуклеиновые кислоты, углеводы и многие другие вещества. В качестве носителей в аффинной хроматографии получили широкое распространение гранулированные гели агарозы и полиакриламида (биогель P), полистирольные смолы с химически активными группами, целлюлоза и ее производные и т.д. Затем через колонку пропускают анализируемую смесь веществ, к одному из которых иммобилизованный лиганд обладает биологическим сродством. Выбирая из смеси требуемое соединение, лиганд образует с ним комплекс. Остальные компоненты пройдут через колонку, не задерживаясь. Специфически адсорбированный компонт может быть освобожден из комплекса изменением природы элюента, pH или ионной силы.
p,“. 8.9. n“…%"…/е .2=C/ =--,…- …%L .!%ì=2%ã!=- ,,: 1 - C%äã%- 2%"*= “%!Kе…2= äë =- - ,……%L
.!%ì=2%ã!=- ,,: ,ìì%K,ë,ƒ=ö, ë,ã=…ä= …= C%"е!.…%“2, …%“,2еë ; 2 - ä%ƒ,!%"=…,е " .!%ì=2 %ã!=- ,- ÷е“*3þ *%ë%…*3 =…=ë,ƒ,!3еì%L “ìе“,; 3 - .ëþ,!%"=…,е (C%ä=÷= C%ä", ›…%L - =ƒ/), " C!%öе““е *%- 2 %!%ã% C!%, “.%ä, 2 “Cеö, - , ÷е“*%е “" ƒ/"=…, е ë, ã=…ä%ì 2 !еK3еì%ã% *%ìC%…е…2 =; 4 - ƒ=ìе…= C%ä", ›- …%L - =ƒ/ äë !=ƒ!3øе…, *%ì- Cëе*“= , "/äеëе…, “" ƒ=……%ã%
K, %ë%ã, ÷е“*, =*2 , "…%ã% "е?е“2 - "=.
153
Контрольные вопросы
1.На чем основан метод аффинной хроматографии?
2.Каковы основные этапы аффинной хроматографии?
Литература
1.Безвершенко А.И. Аффинная хроматография. Киев: Наукова думка,
1973.
2.Карцова А.А. Жидкостная хроматография в медицине // Соросовский образовательный журнал. 2000. № 11. С. 35-40.
154