7. Особенности вирусологического метода диагностики (культивирование, индикация, идентификация вируса);

Вирусологический метод. Вирусологические исследования с це­лью выделения вируса гриппа проводят преимущественно в период массовой заболеваемости гриппом. Выделенные штаммы идентифи­цируют, изучают динамику их антигенной изменчивости, что помога­ет прогнозированию дальнейших эпидемических волн гриппа, отбору актуальных штаммов, пригодных для изготовления вакцин.

Материалом для выделения вирусов являются носоглоточные смывы и секционный материал после их специальной обработки.

Вирусы выделяют путем заражения куриных эмбрионов и однослойных клеточных культур.

Выделение вируса в куриных эмбрионах. Перед заражением куриных эмбрионов необходимо поместить исследуемый материал в раствор с антибиотиками для уничтожения бактериальной флоры. После этого прово­дят комбинированное заражение исследуемым материалом 10-11 днев­ных эмбрионов в амниотическую или аллантоисную полости. После 3 дней инкубации при 35°С проверяют присутствие вирусов в амниотической и аллантоисной жидкости с помощью реакции гемагагглютинации с эрит­роцитами кур, морской свинки или человека, устанавливают титр вируса.

Получив вируссодержащий материал - амниотическую и аллантоисную жидкости с высокой гемагглютинирующей активностью, про­водят серологическую идентификацию выделенного вируса с помощью РТГА для установления подтипа или штамма вируса гриппа. Эти реакции ставят с соответствующими диагностическими противогрип­позными сыворотками.

Выделение вирусов в культурах клеток. Осуществляют путем за­ражения нескольких типов культур клеток, чаще используют первич­ные культуры почек человека и некоторых животных. Клеточные культуры инкубируют в течение недели при 33°С, ежедневно регист­рируя изменения монослоя клеток с целью выявления ЦПД (цитопатического действия). При его отсутствии, вирус выявляют с помощью реакции гемадсорбции или гемагглютинации, а также ИФ-методом (иммунофлюоресцентным методом). Далее вируссодержащей культуральной жидкостью заражают куриные эмбрионы, получают аллан­тоисную жидкость с высоким содержанием вирусов, и проводят идентификацию выделенного вируса, как указано выше.

8. Противовирусный иммунитет;

Иммунитет. Человек, перенесший грипп, приобретает стойкий постинфекционный клеточный и гуморальный иммунитет, который отличается своей узкой специфичностью и направлен против сероварианта (штамма) вируса гриппа, вызвавшего данное заболевание. Сле­довательно, противогриппозный иммунитет является подтипо- и штаммоспецифичным. Поэтому появление новых штаммов того же подтипа вируса А даже с очень незначительным дрейфом поверхност­ных антигенов существенно снижает эффективность имеющегося им­мунитета. Дальнейшая антигенная изменчивость того же подтипа вируса, а тем более появление, вследствие шифта антигенов, нового подтипа вируса А, делает человека беззащитным против гриппозной инфекции.

Восприимчивость человека к вирусам гриппа очень высока, осо­бенно при первой встрече с вирусом. Поэтому чаще всего болеют ма­ленькие дети. Грипп у детей протекает тяжелее, чем у взрослых, часто с развитием осложнений.

Пассивный иммунитет, приобретенный ребенком от матери, со­храняется около 6 месяцев при грудном вскармливании и не более 3 месяцев при искусственном. Человек часто повторно заболевает грип­пом через 2-3 года, что связано с постоянной антигенной изменчивос­тью и одновременной циркуляцией нескольких типов и подтипов вирусов гриппа.