3. Визначення фракцій білка методом електрофорезу.

Електрофоретичний розподіл білків широко використовується для діагностики захворювань, препаративної роботи і дозволяє з суміші білків (сироватки крові) виділити окремі фракції.

Принцип методу грунтується на різній рухливості білків в електричному полі в залежності від заряду та молекулярної маси білка.

а) Електрофорез на папері дозволяє розділити білки сироватки крові на 5 фракцій і найчастіше використовується в медичній практиці.

Хід роботи. Смужку хроматографічного паперу 4х40 см змочують буферним розчином і на відстані 5-6 см від краю наносять мікропіпеткою 0,01-0,005 мл сироватки. Смужку вміщують в електрофоретичну камеру, ванни якої заповнені буфером, і проводять електрофорез при напрузі 220 вольт; сила струму 0,1-0,3 мА/см на 18-20 годин. Електрофореграми висушують при +105^oС 20 хвилин, занурюють в лоток з барвником (бромфеноловий синій) на 20 хвилин, промивають у 2% розчині оцтової кислоти і висушують на повітрі. З електрофореграми вирізають забарвлені смужки, які відповідають певним фракціям білка, подрібнюють і вміщують в пробірки з 5 мл 0,01 М розчину гідроксиду натрію на 1 годину. Для контролю вирізають смужку електрофореграми, яка не містить білка. Вимірюють екстинкцію в кожній пробірці. Суму цих показників приймають за 100% і, виходячи з цього, вираховують вміст білка в кожній фракції у відсотках.

Розрахунок. Наприклад, якщо сума екстинкцій всіх фракцій білка складає 0,58, а екстинкція альбуміну - 0,36, то вміст альбуміну по відношенню до загального білка всіх фракцій складає:

0,36 х 100

вміст альбуміну = -------------------- = 62%.

0,58

б) Електрофорез в поліакриламідному гелі широко застосовують в науково-дослідницькій роботі. Він дозволяє розділити білки сироватки крові на 20 фракцій, тому що розподіл білків відбувається не тільки в залежності від заряду, але і від розміру і форми частинок.

Клініко-діагностичне значення

У здорової людини вміст білка в крові коливається від 60 г/л до 80 г/л, зниження нижче 60 г/л - гіпопротиїнемія, збільшення вище 80 г/л - гіперпротиїнемія. Найчастіше гіпопротеїнемію спостерігають при голодуванні, порушенні функції кишечника, хворобах печінки та нирок. Причиною гіперпротеїнемії може бути втрата води організмом.

За допомогою електрофорезу білки сироватки можна ділити на фракції, які характеризують стан організму і використовуються для діагностики. Зменшення кількості альбумінів вказує на захворювання печінки, де вони синтезуються або втрату їх з сечею при патології нирок. Збільшення кількості глобулінів спостерігається при інфекційних процесах, а зменшення цієї фракції може свідчити про СНІД. Значне зниження альбумінів і підвищення всіх глобулінових фракцій відбувається при злоякісних пухлинах.

Література:

1. Конспект лекцій.

2. Губський Ю. І. Біологічна хімія.- К.-Тернопіль: Укрмедкнига, 2000.- 509с.

3. Гонський Я.І., Максимчук Т.П. Біохімія людини. – Тернопіль: Укрмедкнига, 2001.- 736с.

4. Гонський Я.І., Максимчук Т.П. – Біохімія людини, 2004.

Обговорено і затверджено на засіданні кафедри

Зав. кафедрою проф. Ерстенюк А.М.