7.3. Методы выявления туберкулёза
К сожалению, туберкулёз не имеет специфичных клинических признаков. В связи с этим такие физикальные методы обследования как расспрос, осмотр, перкуссия и аускультация позволяют лишь предположить наличие заболевания и требуют обязательного подтверждения другими методами. [1]
7.3.1. Метод Циля-Нильсена (бактериоскопический метод)
Одним из распространённых лабораторных методов выявления туберкулёза является метод Циля-Нильсена.
Метод проверки осуществляется следующим образом: [1,3,4,5]
На фиксированный мазок накладывается белая фильтровальная бумага и наливается карболовый раствор фуксина. Препарат подогревается 2‑3 раза в пламени до появления паров.
Препарат промывается водой, бумагу убирается.
Препарат обесцвечивают в 5% растворе серной кислоты.
Препарат снова промывается водой.
Препарат докрашивается синькой Леффлера в течение 3-5 минут.
Препарат промывается водой, высушивается и изучается под микроскопом.
Кислотоустойчивые бактерии туберкулёза окрашиваются в рубиново- красный цвет, а остальная микрофлора остаётся синего цвета (рис. 1).
Рис. 1i1
Подготовленная проба исследуется специалистом под микроскопом. Для этого специалист просматривает препарат вдоль предметного стекла. После просмотра одного поля зрения, препарат перемещается для просмотра второго поля зрения и т.д. Для того, чтобы дать отрицательный ответ, необходимо просмотреть более ста полей зрения. В объекте размером 1,5 см на 1,5 см количество полей зрения по длине стекла составляет около ста. [5] В среднем на исследование одного образца у специалиста уходит до 20 минут. Для обнаружения таким методом МБТ в препарате необходимо, чтобы в 1 мл мокроты содержалось не менее 100000 бактерий. При меньшем числе бактерий исследование может дать ложноотрицательный результат. Для увеличения концентрации бактерий в пробе используют различные методы, например, метод флотации, однако он увеличивает вероятность определения не более, чем на 10% [1].
Однако помимо ложноотрицательного результата тест может выдать и ложноположительный результат. Это может быть вызвано тем, что иногда в образце мокроты могут содержаться частицы, не являющиеся туберкулезными бактериями, однако также обладающие кислотоустойчивостью. При окраске по Цилю‑Нильсену они окрашиваются так же как и МБТ. Такими элементами, похожими под микроскопом на МБТ могут быть частички пищи (например, кусочки воска или жира), преципитаты, другие микроорганизмы, неорганические частицы, а также артефакты. [2]
Таким образом, к основным недостаткам данного метода относятся:
низкая точность при небольшой концентрации бактерий в пробе;
большая зависимость точности результата от квалификации исследователя.
7.3.2. Бактериологический (культуральный) метод
Значительно более точным в сравнении с прямым исследованием пробы мокроты является метод посева пробы на элективные среды. Для выделения культуры МБТ требуется всего 20-100 микробных клеток на 1 мл мокроты. Однако данный метод является очень долгим и в среднем требует от 4 до 8 недель. Существуют высокоселективные среды, позволяющие вырастить колонии и за 1-2 недели, однако в любом случае, требудется дополнительное время на идентификацию микроорганизма. [1]