2. Зависимость скорости реакции от рН
Зависимость также описывается колоколообразной кривойс максимумом скорости приоптимальном для данного ферментазначении рН.
Для каждого фермента существует определенный узкий интервал рН среды, который является оптимальным для проявления его высшей активности. Например, оптимальные значения рН для пепсина 1,5-2,5, трипсина 8,0-8,5, амилазы слюны 7,2, аргиназы 9,7, кислой фосфатазы 4,5-5,0, сукцинатдегидрогеназы 9,0.
|
|
3. Зависимость скорости реакции от концентрации субстрата
При увеличении концентрации субстрата скорость реакции сначала возрастает соответственно подключению к реакции новых молекул фермента, затем наблюдается эффект насыщения, когда все молекулы фермента взаимодействуют с молекулами субстрата. При дальнейшем увеличении концентрации субстрата между его молекулами возникает конкуренция за активный центр фермента и скорость реакции снижается.
4. Зависимость от концентрации фермента
При увеличении количества молекул фермента скорость реакции возрастает непрерывно и прямо пропорционально количеству фермента, т.к. большее количество молекул фермента производит большее число молекул продукта.
Основы количественного определения активности ферментов
1. Активность фермента выражается в скорости накопления продукта или скорости убыли субстрата в пересчете на количество материала, содержащего фермент.
В практике обычно используют:
единицы количества вещества – моль (и его производные ммоль, мкмоль), грамм (кг, мг),
единицы времени – минута, час, секунда,
единицы массы или объема – грамм (кг, мг), литр (мл).
Активно используются и другие производные – катал (моль/с), международная единица активности (МЕ, Unit) соответствует мкмоль/мин.
Таким образом, активность фермента может выражаться, например, в ммоль/с×л, г/час×л, МЕ/л, кат/мл и т.д.
Например, известно,
что 1 г пепсина расщепляет 50 кг яичного белка за один час – таким образом, его активность составит 50 кг/час на 1 г фермента,
если 1,6 мл слюны расщепляет 175 кг крахмала в час – активность амилазы слюны составит 109,4 кг крахмала в час на 1 мл слюны или 1,82 кг/мин×г или 30,3 г крахмала/ с×мл.
2. Создание стандартных условий, чтобы можно было сравнивать результаты, полученные в разных лабораториях – оптимальная рН и фиксированная температура, например, 25°С или 37°С, соблюдение времени инкубации субстрата с ферментом.
3. Необходимо наличие избытка субстрата, чтобы работали все имеющиеся в растворе молекулы фермента.
2) Синтез жирных кислот. Внутриклеточная локализация. Биосинтез триацилглицеролов.
Биосинтез жирных кислотидёт в цитоплазме, нужен ацетил-КоА из митохондрий, участвует малонил-КоА,происходит перенос ацетил-КоА в цитоплазму,участвует мультиферментный комплекс синтетаза жирных кислот, требуется биотин, нужен НАДФН2, требуется АПБ на всех этапах.Перенос ацетил-КоА из митохондрий в цитоплазму Ацетил-КоА не проникает через мембрану митохондрий в цитоплазму.
Ацетил-КоА + ЩУК = цитрат + НSКоА
Цитрат с помощью транслоказы переносится в цитоплазму.
В цитоплазме:
цитрат + НSКоА +АТФ = Ацетил-КоА +АДФ+Фн+ЩУК
цитратлиаза
НАДН+ НАД+ НАДФН+Н+ НАДФ+
ЩУК = малат = ПВК+ СО2
Малик-фермент
Реакции синтеза жирных кислот
СН3-CО-S-KoA + биотин-СО2 + АТФ =
Ацетил-КоА-Карбоксилаза(Инсулинзависимая)
НООС-СН2-CО-S-KoA + АДФ + Фн малонил-КоА
Ацетил-КоА-карбоксилаза аллостерический фермент, активатором является цитрат, повышение содержания цитрата в митохондриях приводит к тому, что при помощи челночного механизма он поступает в цитоплазму. Далее действует мультиферментный комплекс – синтетаза жирных кислот, который представляет собой 6 ферментов, связанных с АПБ.
СН3-CО-S-KoA + HS-АПБ = HS-КоА + СН3-CО-S-АПБ
АПБ-ацетилтрансфераза ацетил-АПБ
НООС-СН2-СО-S-КоА + НS-АПБ = HS-KoA + HOOC-CH2-CO-S-АПБ
АПБ-малонилтрансфераза малонил-АПБ
Далее происходит конденсация малонил-АПБ и ацетил-АПБ.
СН3-CО-S-АПБ + НООС-СН2-CО-S-АПБ =
ацетил-АПБ малонил-АПБ B-Кетоацетил-АПБсинтаза
СН3-CО-СН2-CО-S-АПБ + НАДФН+Н+ =
ацетоацетил-АПБ В-Кетоацил-АПБ-редуктаза
СН3-CH(ОH)-СН2-CО-S-АПБ + НАДФ+ =
β-оксибутирил-АПБ В-оксиацил-АПБ-дегидратаза
СН3-CH=СН-CО-S-АПБ + НАДФН+Н+ =
кротонил-АПБ еноилАПБ-редуктаза
СН3-CH2-СН2-CО-S-АПБ +НАДФ+
бутирил-АПБ
Далее цикл повторяется.Малонил-КоА переносится на SH-группу фосфопантетеина АПБ.
Бутирил-АПБ + малонил-АПБ = кетокапронилАПБ + СО2
Пальмитиновая кислота – предшественник для других жирных кислот.
Биосинтез ТАГ
В почках, стенке кишечника, печени высока активность глицеролкиназы.В мышцах, жировой ткани активность глицеролкиназы низкая и образование глицерол-3-фосфата связано с гликолизом и гликогенолизом. Жиры, синтезированные в жировой ткани, там и откладываются, а из печени жиры транспортируются в составе липопротеинов
3. Больной жалуется на боли в правом подреберье. Слизистые и кожные покровы желтушны. Оцените состояние больного на основании данных анализа его крови: общий билирубин - 60 мкмоль/л, прямой билирубин - 45 мкмоль/л. Активность щелочной фосфатазы резко повышена.
Механическая желтуха
Билет 25