uchebnik

161

Для морфологии нокардий характерен полиморфизм. Они имеют первичный мицелий, при фрагментации которого образуются короткие ветвящиеся нити, кокки и палочки различной длины, имеющие характерное зигзагообразное расположение. Грамположительны, неподвижны, капсул не имеют, частично кислотоустойчивы, аэробы.

Для культивирования нокардий используют специальные питательные среды, на которых через 2-3 недели формируются кожистые, врастающие в агар, или сухие, крошащиеся колонии. Они пигментированы (красного, желтого, оранжевого и др. цвета). На поверхности колоний образуется воздушный мицелий.

Семейство Nocardiaceae делится на рода по биохимическим свойствам.

Антигенное строение изучено мало.

Основное место обитания нокардий - почва и, вероятно, вода. Поэтому нокардиоз - сапронозная инфекция. Больные нокардиозом не являются источником инфекции. Путь заражения воздушно-капельный. Клинически нокардиоз протекает как легочное или системное заболевание.

После перенесенного заболевания формируется нестерильный иммунитет, который носит клеточный характер.

Материалом для исследования служат мокрота, смывы или биопробы, полученные при бронхоскопии. При бактериоскопии могут быть обнаружены типичные по морфологии клетки нокардий. Основной метод микробиологической диагностики - бактериологическое исследование.

В качестве средств этиотропной терапии используют сульфаниламиды.

Специфическая профилактика не разработана.

162

Часть третья

МЕДИЦИНСКАЯ ВИРУСОЛОГИЯ

В разделе медицинской вирусологии данного учебника представлены сведения лишь о некоторых возбудителях наиболее актуальных для современной медицины вирусных инфекций.

РНК-овые вирусы.

Глава 22. Ортомиксовирусы. Вирус гриппа.

Семейство ортомиксовирусов - это РНК-овые вирусы со спиральным

суперкапсидной оболочки имеют сродство к муцину.

формой РНК “плюс-нити”, выполняющей функцию и-РНК. Это необходимо для синтеза вирусных белков в клетке. Также с нуклеопротеидом вируса связаны еще 2 геномных фермента - эндонуклеаза и репликаза, участвующие в репродукции вируса в клетке.

Форма вириона вариабельна, чаще сферическая (могут быть нитевые формы), размеры 80-120 нм. Капсидная оболочка построена из простых белков, способных к самосборке. В ее состав входит M- белок, который сверху покрывает бислойная липидная мембрана с гликопротеидными шипами суперкапсидной оболочки. Эти гликопротеидные шипы - ферменты гемагглютинин и нейраминидаза, связанные с суперкапсидной оболочкой. Гемагглютинин распознает мукопептидные рецепторы чувствительных клеток, содержащие N-ацетилнейраминовую кислоту, обеспечивает адсорбцию вируса на клетке. Нейраминидаза обуславливает проникновение вируса в клетку, отщепляя сиаловые кислоты, входящие в мембрану клетки.

Антигены вируса гриппа. Глубокий антиген капсидной оболочки связан с белком рибонуклеопротеида и M- белком. По строению этого антигена различают вирус гриппа типа А, В и С. Поверхностные антигены суперкапсидной оболочки - антигены гемагглютинина /H/ и нейраминидазы /N/ - вариантспецифические. Они более вариабельны: у вируса гриппа А различают 13 сероваров по антигену гемагглютинина /H-АГ/ и 10 сероваров по антигену нейраминидазы /N-АГ/. Так у вируса гриппа А наибольшее распространение

163

имеют гемагглютинины H1-3 и нейраминидазы N1-2. H-АГ вируса гриппа рассматривают как протективный антиген.

Вирус гриппа В имеет сходное строение с вирусом гриппа А, отличаясь только глубоким антигеном. Его геном также содержит минус-нитевую РНК, состоящую из 8 фрагментов, кодирующих 3 неструктурных белка (геномные ферменты) и 7 структурных оболочечных белков.

Различают несколько сероваров по H- и N- антигенам, но антигенный дрейф выражен слабее.

Вирус гриппа С отличается не только антигенами, но и некоторыми другими признаками: у него 7 фрагментов РНК, нуклеотидные последовательности в которых отличаются от таковых у вируса гриппа А и B; в геноме закодировано 2 неструктурных белка и 6 структурных, отсутствует нейраминидаза. Клеточные мукопептидные рецепторы к вирусу С имеют иное строение, чем клеточные рецепторы к вирусам А и B. Антигенный дрейф не выражен.

Вирус гриппа хорошо размножается в культурах тканей и курином эмбрионе (амниотической и аллонтоисной оболочках). Из культур тканей оптимальной для репродукции вируса является культура клеток почек эмбриона человека. Цитопатическое действие выражено слабо и не во всех культурах тканей. Вирус гриппа С труднее адаптируется к куриному эмбриону, лучше культивируется при температуре 320 - 330С.

В окружающей среде вирус гриппа разрушается под действием температуры 560С, УФ-лучей, детергентов и дезинфектантов, но может сохраняться при низких температурах до - 700С.

Эпидемиология и патогенез гриппа.

Грипп - это острая респираторная вирусная инфекция, имеющая тенденции к распространению в человеческой популяции в виде эпидемий с характерной сезонностью и даже пандемий.

Вирус гриппа А поражает человека и некоторые виды животных (лошадей, свиней, птиц), а вирусы гриппа B и C только людей. Источником инфекции для человека являются больные люди, путь заражения - воздушно-капельный. Эпидемические вспышки наблюдаются в зимнее время и каждые 10 лет могут перерастать в пандемии. Особенно это характерно для вируса гриппа А, в то время как вирус гриппа B чаще вызывает эндемические, локальные вспышки, а для вируса гриппа С регистрируются лишь спорадические случаи заболевания.

Одна из самых тяжелых пандемий гриппа, получившая название "испанки", разразилась в 1918г. и унесла 20 млн. жизней. Ответственен за нее был вирус гриппа А (HsN1). Азиатская пандемия 1957 г. была вызвана вирусом гриппа А (H2N2) и охватила 2 млрд. человек, а тяжелая эпидемия, начавшаяся в Гонконге в 1968г., - вирусом гриппа А (H3N2).

В организме человека основное место локализации вируса - дыхательный эпителий трахеи, бронхов, бронхиол и альвеолы.

164

За счет гемагглютина вирус гриппа адсорбируется на гликопротеиновых рецепторах эпителиальных клеток нижних отделов дыхательного тракта и с помощью нейраминидазы проникает в клетку путем эндоцитоза. В фагосоме идет частичное раздевание вируса, а окончательное происходит у ядра пораженной клетки. В ядре клетки идут процессы репликации и транскрипции вирусных нуклеиновых кислот с участием геномных ферментов самого вируса, т.к. его РНК, являясь минус-нитевой молекулой, служит лишь матрицей для построения и-РНК за счет вирусной РНК-зависимой РНКполимеразы. Вирусная эндонуклеаза, формируя модифицированный конец вирусной и-РНК - шапочку (сap), откусывает его от клеточной м-РНК, после чего происходит транскрипция и становится возможным синтез вирусных белков в рибосомах клетки. Окончательное формирование вириона идет на внутренней клеточной мембране после трансляции вирусных белков. Углеводные и липидные компоненты свой суперкапсидной оболочки вирус захватывает из мембраны клетки, когда выходит из нее путем почкования. Из-за повреждения мембран

вирус попадает в кровь, развивается вирусемия, сопровождающаяся высокой

отека легкого при нарушении проницаемости сосудов под действием нейраминидазы. Часто присоединяются бактериальные инфекции, что связано с повреждающим действием вируса на лимфоциты в лимфоузлах и созданием условий развития вторичных иммунодефицитов.

Иммунитет переболевших вариантспецифический.

Методы микробиологической диагностики.

Материалом для исследования чаще всего служит носоглоточный и бронхиальный смывы, иногда кровь, и могут быть использованы следующие методы:

вирусологический - из исследуемого материала вирус выделяют при заражении куриного эмбриона и культуры ткани почек эмбрионов человека с последующей идентификацией в РТГА сероваров и в РСК типов вируса гриппа; иммуноиндикация - антигены вируса обнаруживают в исследуемом материале - носоглоточном, бронхиальном смывах - с помощью РТГА и ИФА или РИФ в мазках-отпечатках из эпителиальных клеток слизистой оболочки носоглотки; серологический - методом РТГА, РСК, ИФА определяют наличие инфекционных антител в парных сыворотках больного по нарастанию их титра. С помощью ИФА определяют и титр секреторных иммуноглобулинов А в носоглоточных смывах;

165

методы генетического анализа - разработаны РНК-зонды, использование которых позволяет обнаружить нуклеотидные последовательности вируса в исследуемом материале.

Этиотропная терапия.

Втерапии гриппа используют противовирусные средства этиотропной химиотерапии, а также препараты интерферона и иммунотерапии. Антибиотики используют только для профилактики бактериальных осложнений, т.к. сами вирусы не являются мишенями для действия этих химиопрепаратов.

Среди химиотерапевтических средств с противовирусной активностью в лечении гриппа используют ремантадин и его аналоги, арбидол. Эти препараты препятствуют попаданию вируса гриппа в клетку и его депротеинизации.

Впервые дни болезни можно назначить противогриппозный гаммаглобулин, в более поздние сроки он не действует, т.к. все вирусы находятся внутри клеток.

Вначале заболевания и более поздние сроки можно назначать препараты интерферона, который действует и на внутриклеточный вирус, препятствуя синтезу нуклеиновых кислот и белков вирусов. На практике используют лейкоцитарный интерферон и интерфероногены, например неовир, а также препараты генноинженерных интерферонов, например реальдерон.

Иммунопрофилактика.

Разработаны средства активной и пассивной иммунопрофилактики гриппа.

Активная иммунопрофилактика проводится живыми, убитыми и химическими гриппозными вакцинами. Предпочтение отдают живым вакцинам, т.к. они активируют не только гуморальный, но и клеточный иммунный ответ, синтез интерферона, а также обеспечивают развитие механизма вирусной интерференции. В настоящее время в России используются живая аттенуированная вакцина, убитая цельновирионная и химические (субвирионные и субъединичные), приготовленные из H- и N- антигенов вируса гриппа. Последние обладают наименьшей реактогенностью и рекомендуются для вакцинации по эпидпоказаниям детей в возрасте от 6 месяцев до 12 лет; Пассивная иммунопрофилактика гриппа возможна в очагах инфекции. Для ее целей могут использовать противогриппозный гамма-глобулин, противогриппозную сыворотку типа А1, А2, В с сульфаниламидами (вводят в носовые ходы, чтобы местно создать высокий титр антител). Пассивная иммунопрофилактика донорским иммуноглобулином назначается контактным лицам не позднее 7 дня.

Глава 23. Парамиксовирусы: вирусы парагриппа, кори, эпидемического паротита, РСвирусы.

166

Парамиксовирусы - это семейство РНК-овых вирусов. РНК однонитчатая (“минус-нить”), линейная, нефрагментированная. Тип симметрии нуклеокапсида спиральный. Нуклеокапсид покрыт суперкапсидной оболочкой, содержащей липиды. Чувствительны к эфиру. Размеры вириона 120-300 нм. Семейство объединяет вирусы-возбудители острых респираторных вирусных инфекций: вирус парагриппа, эпидемического паротита - род Paramyxavirus, РС-вирус (респираторно-синтициальный) - род Pneumovirus, вирус кори - род Morbilivirus.

Парагрипп протекает с поражением верхних дыхательных путей, а РСинфекция - с поражением бронхиол и альвеол (чаще у детей). Корь - острая детская инфекция, при которой вирус из носоглотки проникает в кровь и разносится по организму, что сопровождается появлением сыпи на теле. В условиях обязательной иммунопрофилактики в детском возрасте заболевание в

нейраминидазы, размножением в курином эмбрионе. Все они размножаются в культуре ткани с цитопатическим действием /ЦПД/: очень характерно для РСвирусов - образование многоядерных клеток-синтиций.

23.1. Вирус парагриппа.

Вирус парагриппа имеет сферическую форму вириона с размерами 150200 нм. Геном вируса представлен минус-нитью РНК, включающей 6 генов, и геномными белками-ферментами: РНК-зависимой РНК-полимеразой и полимеразами P и L. Капсидная оболочка содержит матриксный М-белок, а суперкапсидная - N-, H- и F- белки и липиды клеточного происхождения. N- белок - это нейрамидаза, а H- белок - гемагглютинин. F- белок - белок слияния - отвечает за гемолиз, образование синтиций, слияние вирусной суперкапсидной оболочки с мембраной клетки и лизис клетки.

У вируса парагриппа различают глубокий (S) антиген, связанный с нуклеопротеидом, и поверхностный Y- антиген, состоящий из двух компонентов : Н- и N- белков. По строению поверхностного антигена суперкапсидной оболочки различают 5 серотипов вируса парагриппа.

Вирус парагриппа не размножается в курином эмбрионе. Для его репродукции используют первичные и перевиваемые культуры тканей человека и обезьян.

Вирус парагриппа высоко чувствителен к детергентам и дезинфектантам, разрушается при температуре 500 С, под действием эфира.

Эпидемиология и патогенез парагриппа.

Источником инфекции является больной и вирусоноситель, заражение происходит воздушно-капельным путем. За счет NH- и F-белков происходит

167

адсорбция вируса на гликопротеидных рецепторах чувствительных эпителицитов дыхательного тракта и проникновение в клетки путем эндоцитоза. Не нуждаясь в затравочной м-РНК для синтеза вирусных нуклеиновых кислот, вирус после стадии фагосомы не проникает в ядро клетки, и его репродукция идет в цитоплазме. Характерно образование ацидофильных цитоплазматических включений. Выход вируса из клетки осуществляется почкованием с образованием синтиций. Возможна вирусемия и развитие тяжелых форм инфекций, особенно у детей.

Вирусы парагриппа нередко являются причиной внутрибольничных инфекций в педиатрических стационарах.

Иммунитет типоспецифический. Искусственная иммунопрофилактика не проводится.

Методы микробиологической диагностики парагриппа.

В микробиологической диагностике парагриппа могут быть использованы вирусологическое, серологическое исследования, метод иммунноиндикации. Материалом для вирусологического исследования и иммуноиндикации являются носоглоточный и бронхиальный смывы, а при серологическом исследовании материалом от больного служат парные сыворотки.

При вирусологическом исследовании производят заражение исследуемым материалом первичных и перевиваемых культур тканей человека с идентификацией вируса по ЦПД, гемадсорбции эритроцитов морских свинок ( для разных серотипов гемагглютинирующая активность и ЦПД варьирует, но все обладает гемолитической активностью и способностью образовывать симпласты) и в РТГА.

Для иммуноиндикации используют постановку реакций вирусонейтрализации, РТГА, РСК, РИФ , ИФА для обнаружения антигенов вирусов в носоглоточном смыве и соскобе эпителия слизистой дыхательного тракта.

При серологическом исследовании обнаружение инфекционных антител в разведениях парных сывороток больного проводят в РТГА, РСК, ИФА.

парамиксовирусов по строению вириона и свойствам. Его однонитевая нефрагментированная “минус” РНК кодирует 8 белков, в том числе H, N и F- белки суперкапсидной оболочки. Вирус обладает гемолитической, гемагглютинирующей и нейраминидазной активностью, способностью образовывать синтиции, имеет поверхностный и глубокий антигены, но в отличии от вируса парагриппа у вируса эпидемического паротита нет сероваров.

168

Он может размножаться в курином эмбрионе, но при этом теряет свою инфекционность, что используют для приготовления живых вакцин.

Вирус разрушается под действием эфира, 2% фенола, 1% лизола и детергентов.

Эпидемиология и патогенез эпидемического паротита.

Источником инфекции является больной человек, путь заражения - воздушно-капельный. Заболеваемость высока в детском возрасте, особенно среди мальчиков от 5 до 15 лет. Наиболее заразен инкубационный период и первая неделя клинических проявлений болезни.

Первичная репродукция вируса происходит в эпителиальных клетках носоглотки, откуда по стенонову протоку вирус попадает в клетки околоушных желез, где и происходит его репродукция. С током крови вирус заносится во внутренние органы и фиксируется в яичках или яичниках, поджелудочной и щитовидной железах, в головном мозге. Наиболее опасными осложнениями при тяжелых формах инфекции являются орхиты и менингиты.

Иммунитет стойкий, пожизненный. Дети первых трех месяцев жизни не восприимчивы к инфекции из-за циркуляции в крови материнских иммуноглобулинов класса G, передающихся плоду через плаценту в период внутриутробного развития и обеспечивающих врожденный пассивный иммунитет. Он может сохраняться в течении 6 месяцев.

В 3-х месячном возрасте предусмотрена плановая активная иммунизация живой вакциной.

Методы микробиологической диагностики.

Для микробиологической диагностики используют вирусологический,

серологический ( РТГА, РСК и др.) методы и иммуноиндикацию.

23.3. Респираторно-синтициальный вирус (РСвирус).

РС-вирусы отличаются полиморфизмом вирионов с размерами 120-200 нм. Геном представлен “минус-нитью” нефрагментированной РНК, связанной с геномными белками-ферментами.

Геном включает 10 генов, кодирующих 10 белков, в том числе 7 структурных. Среди них - G- и F-белки суперкапсидной оболочки, N-, P-, L- полимеразный комплекс, содержащий транскриптазу, M-, K- белки внутренней поверхности суперкапсидной оболочки. F-белок обеспечивает слияние вирусной оболочки с мембраной клетки, образование синтиций, а белок G - фиксацию вируса на мембране клетки. Нейраминидазы и гемагглютинина у вируса нет. По антигенному строению различают 2 серовара. У РС-вирусов есть общий комплементсвязывающий антиген.

169

Вирус не размножается в курином эмбрионе. Его культивируют в культурах тканей почек обезьян, Hela и др., где проявляется ЦПД в виде образования симпластов и синтиций.

РС-вирус разрушается под действием детергентов и эфира, при нагревании (550 С), при замораживании и последующем оттаивании.

Эпидемиология и патогенез РС-вирусной инфекции.

Источник инфекции - больной, путь передачи - воздушно-капельный.

При заражении вирусом поражаются эпителиальные клетки верхних и нижних отделов дыхательных путей, в том числе бронхиол и альвеол, что приводит к развитию очень тяжелых пневмоний у новорожденных и детей 1-2 года жизни. Нередко этот вирус является возбудителем внутрибольничных инфекций в педиатрических стационарах. Развитие РС-инфекции сопровождается присоединением бактериальных осложнений, т.к. вирус способствует развитию вторичных иммунодефицитов и иммунопатологических реакций, связанных с формированием иммунных комплексов.

Иммунитет сохраняется в течение года, часты повторные заболевания. Искусственная иммунопрофилактика не проводится.

Методы микробиологической диагностики.

Вмикробиологической диагностике РС-вирусной инфекции используют различные методы, а материалом чаще служат носоглоточный, бронхиальный смывы, мокрота.

При вирусоскопическом исследовании обнаруживают симпласты и синтиции в соскобах слизи, взятой при бронхоскопии.

Входе вирусологического исследования вирус культивируют в культурах тканей и идентифицируют по ЦПД, а также в РСК и реакции вирусонейтрализации в культуре ткани.

Для иммуноиндикации используют РИФ по обнаружению антигена вируса в бронхиальных смывах.

При серологическом исследовании обычно ставят РСК по обнаружению антител в разведениях парных сывороток больного.

23.4.Вирус кори.

Размеры вириона - 150-250 нм. Геном представлен “минус-нитью” однонитевой, нефрагментированной РНК, связанной с геномными белками P и L (полимеразный комплекс, содержащий РНК-зависимую РНК -полимеразу). Тип симметрии нуклеокапсида спиральный. С нуклеокапсидом связаны белок NP и M-белок. В суперкапсидной оболочке содержатся H- и F- белки. Первый обеспечивает гемагглютинирующую активность вируса в отношении эритроцитов макак-резус, а второй - образование симпластов и гемолитическую активность вируса. У вируса нет нейраминидазы. Различают несколько

170

сероваров, но вирус кори обладает и общими антигенами с вирусом чумы собак и рогатого скота.

Лабораторные животные маловосприимчивы к этому вирусу, и он плохо размножается в курином эмбрионе, теряя вирулентность, что использовано при создании живой вакцины. Культивируют вирус кори в культуре ткани почек обезьян, эмбриона человека, Hela, KB, Vero, где он обладает ЦПД. При этом образуются симпласты, и появляются зернистые включения в цитоплазме и ядре пораженных клеток.

Вирус нестоек в кислой среде, погибает при температуре 560С и снижает свою активность при 370С. Разрушается под действием эфира, детергентов, солнечного света, но устойчив при низких температурах -700С.

Эпидемиология и патогенез кори.

Источник инфекции - больной с последнего дня инкубационного периода и до 4-5 дня с момента появления сыпи. Инкубационный период - 10 дней, путь заражения - воздушно-капельный.

Первичная репродукция вируса идет в эпителии носоглотки, трахеи, бронхов, после чего развивается вирусемия с поражением эндотелия сосудов и появлением характерной сыпи на теле, в том числе на слизистой оболочке щек отмечаются пятна Коплика-Филатова. У детей старше 8-10 лет нередко встречаются тяжелые формы заболеваний. Осложнениями при кори могут быть пневмонии, отек гортани с развитием крупа, острый коревой энцефалит.

Постинфекционный иммунитет при кори пожизненный. В первые три месяца жизни ребенок защищен материнскими иммуноглобулинами класса G, перешедшими к плоду через плаценту в процессе внутриутробного развития.

Искусственный противокоревой иммунитет может быть создан как активный, так и пассивный. Для целей активной обязательной плановой иммунопрофилактики используют живую коревую вакцину. Первичная вакцинация проводится в 9 месячном возрасте. Контактным лицам не позднее 7 дня инкубационного периода может быть введен противокоревой донорский иммуноглобулин как средство экстренной пассивной иммунопрофилактики.

* Считают, что вирус кори может вызывать и развитие медленной вирусной инфекции с клиникой подострого склерозирующего панэнцефалита, что может быть связано с длительной персистенцией вируса в клетках головного мозга с последующим их разрушением, что приводит к летальным исходам. Длительная персистенция вируса обусловлена неблагоприятными условиями для его репродукции в клетках головного мозга, куда он заносится током крови, и появлением дефектных вирионов, не имеющих суперкапсидной оболочки и белка М. В то же время ряд ученых рассматривают возбудителя этой формы инфекции как самостоятельный вирус, который имеет сходство с вирусом чумы