uchebnik

221

Занятие 6. Тема: Неспецифические факторы противомикробной резистентности. Иммунный статус и методы его изучения.

Неспецифические механизмы противомикробной резистентности - это первый уровень защиты от микробных агентов. Они делятся на:

Тканевые,

Гуморальные,

Функциональные.

Все они функционируют в тесной взаимосвязи. Основные тканевые и гуморальные механизмы:

−Кожно-слизистые барьеры, включая функцию колонизационной резистентности нормальной микрофлоры;

−Фагоцитоз и воспаление;

−Барьерная функция лимфоузлов;

−Бактерицидная функция крови включая, комплементарную активность. Функциональные механизмы - кашель, чихание, выделительная функция

почек, кишечника, лихорадка.

Основной недостаток всех этих факторов неспечифичность и необучаемость.

Второй уровень защиты - специфический. Он обеспечивается иммунной системой, и реализуется через антитела (гуморальный иммунитет) и функцию клеток-эффекторов (Т-киллеров и макрофагов). Через макрофаги первый (неспецифический) и второй (специфический) уровни защиты тесно связаны между собой.

Функциональная активность иммунной системы определяется с помощью набора тестов первого (ориентировочные) и второго (аналитического) уровня.

Тесты первого уровня.

Абсолютное и относительное число лимфоцитов. Содержание Т и В лимфоцитов.

Фагоцитарная активность.

Уровень иммуноглобулинов разных классов.

Задание:

Определить бактерицидную функцию кожи. Определить содержание лизоцима в слюне. Определить фагоцитарную активность нейтрофилов.

Оценить функциональную активность иммунной системы по данным иммунограмм (тесты 1 уровня).

222

Занятие 7. Тема: Иммунодиагностика. Серодиагностика. Иммуноиндикация.

Иммунодиагностика - это использование иммунологических методов для диагностики заболеваний. В основе ее лежит использование реакций иммунитета. Реакции иммунитета - реакции между антигенами и антителами. Эти реакции специфичны, и позволяют по результату реакции выявлять либо антитело (серодиагностика), либо антиген (иммуноиндикация, в том числе серологическая идентификация культур бактерий или вирусов).

Реакции иммунитета бывают простые (двухкомпонентные) и сложные (многокомпонентные). К первым относятся реакции агглютинации и ее модификации (пассивной гемагглютинации, латекс-агглютинации) и преципитации, ко вторым - РСК, ИФА, РИА, реакции потребления (нейтрализации) антигенов, антител и др.

Серодиагностика - самостоятельный метод диагностики инфекционных заболеваний. Его цель - обнаружение антитела в сыворотке обследуемого и наростания их титра. Известный компонент реакции - диагностикум (микробный, эритроцитарный, латексный). Диагностическое значение имеет не столько сам факт обнаружения антитела, сколько наростание их количества (титра). Оно выявляется при исследовании парных (взятых в разные сроки болезни) сывороток.

Иммуноиндикация - метод диагностики, имеющий целью обнаружение микробных (или иных) антигенов в исследуемом материале.

Для серодиагностики и иммуноиндикации могут быть использованы различные реакции иммунитета.

Медицинская промышленность выпускает широкую номенклатуру тестсистем для реализации принципов серодиагностики и иммуноиндикации методами иммуноферментного анализа, пассивной гемагглютинации, латексагглютинации, ко-агглютинации, радиоиммунными и иммунофлюоресцентными методиками.

Задание:

Познакомиться с диагностическими тест-системами для проведения исследования методом иммуноферментного анализа.

Провести исследование крови донора на наличие антигена вируса гепатита В (HBsAг) методом иммуноферментного анализа.

Провести реакцию пассивной гемагглютинации для серодиагностики сыпного тифа.

224

б) крови больного с подозрением на сепсис, в) спинномозговой жидкости больного с гнойным менингитом.

225

Приложение.

Схема бак. исследования при гнойно–воспалительных заболеваниях.

(стафилококки)

2 день исследования Учет роста колоний на питательных средах, накопление чистой культуры на скошенном агаре ( колонии с кров агара, подозрительные на СТРЕПТОКОКК, пересевают в сахарный бульон для накопления).

3 день исследования Постановка биохимических тестов для родовой и видовой идентификации ( для СТРЕПТОКОККОВ ВОЗМОЖНА идентификация по морфолого–тинкториально–культуральным свойствам, определяется принадлежность к серогруппе в р. преципитации). Постановка пробы на чувствительность к антибиотикам методом стандартных дисков.

4 день исследования Окончательная идентификация культур при учете биохимических тестов. Учет чувствительности к антибиотикам. Фаготипирование S. aureus. Сероидентификация культур (Гр - палочек).

Занятие 9. Тема: Микробиологическая диагностика анаэробной инфекции.

Необходимо различать два вида анаэробной инфекции клостридиальную и неклостридиальную.

Возбудителями клостридиальной раневой инфекции являются: Cl.tetani - возбудитель столбняка, Cl.perfringens, Cl.novyi, Cl.hystoliticum, Cl.septicum - возбудители газовой гангрены.

Это крупные грамположительные спорообразующие палочки. Все они подвижны. Исключение составляет Cl.perfringens. Этот возбудитель образует капсулу, которая хорошо видна при микроскопии мазков из раневого отделяемого. Основной их характеристикой является продукция экзотоксина, который, в основном, и определяет клинические проявления заболевания. Поэтому средством специфического лечения столбняка и газовой гангрены является антитоксическая сыворотка, а специфической профилактики - анатоксин.

Возбудители газовой гангрены обладают выраженной сахаро- и протеолитической активностью, в результате чего в ране образуется большое количество газообразных продуктов (отсюда и название болезни).

Микробиологическая диагностика столбняка обычно не проводится. Если в этом возникает необходимость, то материалом для исследования является кровь, в которой постановкой биопробы на мышах или с использованием антительного эритроцитарного диагностикума, обнаруживают столбнячный токсин.

Микробиологическая диагностика газовой гангрены проводится для уточнения диагноза и перехода к терапии с поливалентной противогангренозной сыворотки на видоспецифическую.

Материал для исследования - раневое отделяемое. Среда для первичного посева - среда Китта-Тароци, высокий столбик сахарного агара, лакмусового молока. Выделенную чистую культуру идентифицируют по морфологическим и биохимическим признакам.

Неклостридиальные (не образующие спор) анаэробы - обширная группа микроорганизмов. Многие из них являются представителями нормальной микрофлоры кишечника, полости рта, верхних дыхательных и мочеполовых путей. При нарушении равновесия в экосистеме человек-нормальная микрофлора они могут покидать ареал обитания и вызывать гнойновоспалительные поражения практически любых тканей и органов.

Различают четыре группы неклостридиальных анаэробов:

1.Грамположительные кокки - пептококки и пептострептококки,

2.Грамотрицательные кокки - вейлонеллы,

3.Грамположительные палочки - бифидо, лакто, пропионобактерии,

4.Грамотрицательные палочки - бактероиды, фузобактерии.

227

ГВЗ, вызванные неклостридиальными анаэробами склонны к длительному течению и не поддаются традиционной антибактериальной терапии.

Методы микробиологической диагностики.

Бактериологическое исследование гноя.

Важнейшим этапом, предопределяющим успешный результат исследования, является взятие материала и его доставка в лабораторию. Материал забирается при пункции закрытых гнойных очагов, из глубины свищевых ходов, глубины ран. Он помещается в стерильные транспортные флаконы, в которых создается бескислородная среда.

В лаборатории материал без промедления засевается на специальные среды для анаэробов (гемагар для анаэробов) и выращивается в анаэростате. Первичная идентификация проводится по морфо-тинкториальным, окончательная - по биохимическим признакам.

Задание.

1.Промикроскопировать мазки из раневого отделяемого больного с подозрением на газовую гангрену.

2.Поставить РПГА со столбнячным антительным эритроцитарным диагностикумом.

3.Промикроскопировать препараты из культур неклостридиальных анаэробов.

Приложение.

СХЕМА БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ ГНОЙНОГО МАТЕРИАЛА

БИОХИМИЧЕСКАЯ ИДЕНТИФИКАЦИЯ чистых культур

(посев на длинный “пестрый ряд” и дополнительные биохимические тесты для Гр-бактерий или спец. биохимические тесты для стрептококков и стафилококков) – см. методичку“Лабораторная диагностика гнойно-воспалительных

заболеваний” (1-ая часть).

IY этап ОКОНЧАТЕЛЬНАЯ ИДЕНТИФИКАЦИЯ КУЛЬТУР НА ОСНОВАНИИ МОРФОЛОГИЧЕСКИХ, ТИНКТОРИАЛЬНЫХ, КУЛЬТУРАЛЬНЫХ И БИОХИМИЧЕСКИХ СВОЙСТВ.

229

Занятие 10. Тема: Микробиологическая диагностика острых кишечных инфекций (ОКИ).

ОКИ продолжают оставаться одной из широко распространенных форм инфекционной патологии. Главные из них: дизентерия, сальмонеллезы, в том числе брюшной тиф и паратифы, пищевые токсикоинфекции несальмонеллезной природы, эшерихиозы. Особое место среди ОКИ занимают заболевания, вызванные условно-патогенными энтеробактериями.

Микробиологическое исследование на возбудителей ОКИ проводят с диагностической целью, при обследовании декретированнных контингентов, а также по эпидпоказаниям для выявления носителей - источников инфекции.

Принципы микробиологической диагностики ОКИ едины.

Основным методом диагностики является бактериологическое исследование. В качестве дополняющего и для ретроспективной диагностики используют серологические методики.

Бактериологическое исследование. Материал - фекалии, рвотные массы, при пищевых токсикоинфекциях промывные воды желудка, остатки пищи. Первичная микроскопия не проводится. Среды для первичного посева - дифференциально-диагностические среды (ДДС) - Эндо, Левина, Плоскирева или среды обогащения - селенитовый бульон. Выросшие на ДДС бесцветные колонии отбираются для накопления и дальнейшей биохимической и серологической идентификации. Отбор патогенных эшерихий проводят по результатам первичной агглютинации материала из окрашенных колоний на чашках с ДДС с комплексными ОКА, ОКВ, ОКС сыворотками.

Биохимическую идентификацию проводят с использованием набора соответствующих сред (ПБИ, энтеротесты, АРИ-системы и т.д.). Серологическую - с использованием соответствующих видо- и вариантспецифических сывороток.

При бактериологической диагностике брюшного тифа и паратифов выбор материала для исследования диктуется фазой течения заболевания.

В начале болезни, и в дальнейшем на высоте лихорадки, это кровь для выделения гемокультуры. Со второй, третьей недели и в период реконвалесценции - фекалии.

Кровь засевается в желчный бульон или желчный бульон с глюкозой и поплавком с последующем высевом на ДДС, биохимической и серологической идентификацией выделенной культуры.

Фекалии исследуют как и при других ОКИ.

Серологическая диагностика ОКИ.

После 6-7 дня болезни в сыворотке крови больных накапливаются антитела, которые можно обнаружить в реакциях агглютинации, РПГА, латексагглютинации.