uchebnik

171

иммунной системой. Показано, что у этих больных цитотоксические Т-клетки не распознают инфицированные вирусом клетки организма.

Методы микробиологической диагностики кори.

Микробиологическая диагностика кори обычно не проводится, т.к. клиническая картина болезни столь очевидна, что не требует лабораторного подтверждения. Однако, при необходимости могут быть использованы вирусологическое, серологическое исследования и методы иммуноиндикации.

При вирусологическом исследовании возможно заражение культур тканей кровью больного или носоглоточными смывами. Идентификация вируса проводится по феномену ЦПД, гемагглютинации, а также в РТГА, РИФ и реакции вирусонейтрализации в культуре ткани.

Для целей иммуноиндикации используют РИФ по обнаружению антигенов вируса в пораженных клетках слизистой.

При серологическом исследовании выявляют инфекционные антитела у больного в РСК, РТГА и других реакциях.

172

Глава 24. Вирус краснухи.

Вирус краснухи относится к семейству Togaviridae роду Rubivirus. Краткая характеристика семейства тогавирусов представлена в таблице 2,

о роли арбовирусов этого семейства (род α-вирусы) в развитии энцефалитов с геморрагическим синдромом и выраженной лихорадкой, характеризующихся трансмиссивным путем передачи, уже указывалось ранее.

Геном вируса краснухи представлен нефрагментированной, однонитевой “плюс-нитью” РНК. Вирионы имеют сферическую форму с диаметром 60-70 нм. Нуклеокапсид построен по кубическому типу симметрии, окружен суперкапсидной оболочкой, включающей липиды. На поверхности суперкапсидной оболочки имеются шиповидные выросты гликопротеидной природы, которые обладают гемагглютинирующей, гемолитической и нейраминидазной активностью.

Известны три структурных белка вируса: белок капсидной оболочки С(cor) и два гликопротеида суперкапсидной оболочки E1 и Е2. Вирус представлен одним серотипом. Наличие на поверхности вирионов белков делает их чувствительными к температуре, а наличие липидов - к эфиру. При замораживании вирус сохраняет инфекционную активность годами.

Культивируют эти вирусы в развивающихся куриных эмбрионах, в первичной культуре клеток амниона человека, перевиваемых культурах клеток почек кролика и почек обезьян Vero, где вирус обладает цитопатическим действием. В других клеточных культурах вирус может размножаться без видимых изменений, но индуцирует развитие интерференции, защищающей клетки от цитопатического действия других вирусов (например, ЕСНО).

Эпидемиология и патогенез краснухи.

Источником инфекции является больной. Путь передачи - воздушнокапельный. После заражения вирус попадает в лимфатические клетки шейных лимфоузлов, в которых начинается его первичная репродукция. Оттуда вирус, примерно через неделю после заражения, поступает в кровь. Через две-три недели появляется сыпь. За 5-7 дней до появления сыпи вирус можно обнаружить в отделяемом носоглотки, при появлении сыпи - в моче и кале, в течение недели после появления сыпи - в крови.

Краснуха - это преимущественно детская инфекционная болезнь, но могут болеть и взрослые.

Краснуха высоко контагиозная инфекция. Пик заболеваемости наблюдается весной. Эпидемии регистрируются каждые 6-9 лет.

Увзрослых инфекция приобретает более тяжелое течение с развитием артритов, энцефалитов и тромбоцитопенией.

Уинфицированных беременных женщин вирус в период вирусемии проходит через плаценту и проникает в ткани плода, приводя к его гибели или тяжелым уродствам. Тератогенное действие вируса характеризуется триадой

173

симптомов: пороки сердца, поражение органов зрения, поражение органов слуха. Оно обусловлено подавлением митотической активности клеток плода, цитодеструктивным действием вируса, поражением сосудов плаценты.

Профилактика.

После перенесенной инфекции формируется стойкий пожизненный иммунитет.

Для профилактики краснухи применяют убитые и живые вакцины. Противопоказанием к прививке у женщин детородного возраста является беременность.

Плановая иммунопрофилактика для создания активного иммунитета может проводиться с трех месячного возраста с использованием ассоциированных вакцин против кори, коревой краснухи и эпидемического паротита. Профилактика живыми или убитыми вакцинами Рубивакс может проводиться выборочно девочкам 12-14 лет и женщинам детородного возраста.

Методы микробиологической диагностики.

Обычно клинический диагноз коревой краснухи не требует лабораторного подтверждения. Если же в этом возникает необходимость, то используют вирусологическое и серологическое исследования.

Материалом для вирусологического исследования служит отделяемое носоглотки и кровь - до появления сыпи, кровь, моча, фекалии - после появления сыпи. Этим материалом заражают перевиваемые культуры клеток почек кролика, где легко выявляется цитопатическое действие вируса. Через 5-7 дней в культуре ткани образуются очаги дегенерации, а часто и многоядерные гигантские клетки с цитоплазматическими включениями.

Для идентификации выделенного в ходе вирусологического исследования вируса краснухи могут быть использованы методы иммунофлюоресценции, реакция торможения гемагглютинации, реакция вируснейтрализации. Используют тест интерференции. Для этого исследуемым материалом заражают клетки почек зеленой мартышки и через 7-10 дней в культуру вносят вирус ЕСНО типа 2 или вирус везикулярного стоматита. Если развиваются цитопатические изменения, вызываемые вирусом ЕСНО, материал не содержит вируса краснухи, и наоборот, отсутствие цитопатического действия вируса ЕСНО свидетельствует о присутствии вируса краснухи в исследуемом материале.

Серологическая диагностика краснухи заключается в обнаружении вирусспецифических антител. Используют реакцию торможения гемагглютинации, реакции нейтрализации, иммуноферментного и радиоиммунного анализа для выявления нарастания титра антител в парных сыворотках больного.

174

Глава 25. Пикорнавирусы: вирус полиомиелита.

Вирусы семейства пикорнавирусов - это РНК-содержащие вирусы. РНК однонитевая, линейная, “плюс-нить”, выполняющая функцию и-РНК. Вирион имеет простое строение и представляет собой нуклеокапсид, т.е. РНК покрыта капсидной оболочкой, в которой капсомеры уложены по кубическому типу симметрии. Суперкапсидной оболочки нет, вирусы устойчивы к эфиру. Вирионы имеют форму многогранника. Размеры 20-30 нм.

Семейство Picornaviridae включает 4 рода: Enterovirus, Rinovirus, Cardiovirus, Aphtovirus. Представители родов отличаются антигенным строением, различной чувствительностью к низким значениям pH, патогенностью для человека и клиникой вызываемых заболеваний. Кардио- и афтовирусы патогенны для животных, представители двух других родов ответственны за развитие инфекций у человека. Риновирусы вызывают острые респираторные вирусные инфекции с поражением носоглотки. Энтеровирусы передаются фекально-оральным путем. Местом их первичной локализации являются носоглотка и кишечник, но они могут проникать в кровь и попадать в другие органы, давая экстракишечные формы инфекции. К энтеровирусам относятся полеовирус, вирусы Коксаки А и В, вирусы ECHO (enteritic cytopathogenic human orphan), энтеровирусы серотипов 68-71 и вирус гепатита А (ранее называли энтеровирус серотип70).

25.1. Вирус полиомиелита.

Вирус полиомиелита (полеовирус) является типичным представителем рода энтеровирусов. Строение его РНК и нуклеокапсида соответствует общей характеристике семейства пикорнавирусов. Капсидная оболочка состоит из 4 белков: 3 на внешней поверхности (VP1, VP2, VP3) и 1 на внутренней (VP4). Вирион имеет сферическую форму. Как и все энтеровирусы, вирус полиомиелита не размножается в курином эмбрионе, хорошо размножается как в первичных, так и перевиваемых культурах тканей (Hela, фибробластов человека). Репродукция вирусов в культурах тканей сопровождается цитопатическим действием и образованием вирусных включений.

По антигенному строению различают 3 серотипа вируса полиомиелита. Гемагглютинирующей активностью он не обладает. К этим вирусам чувствительны лабораторные животные.

Вирус полиомиелита инактивируется при температуре 500-550С, чувствителен к УФ, высушиванию, хлорпроизводным дезинфектантам, но устойчив к действию детергентов, эфира и низким рН.

Эпидемиология и патогенез полиомиелита

175

Источником инфекции являются больные и вирусоносители. Выделение вируса с фекалиями начинается уже в инкубационный период и активно продолжается в разгар болезни. Основной путь заражения - фекально-оральный, но в эпид.очагах возможен и воздушно-капельный (уже в инкубационный период вирус может выделяться из глотки больного). Наиболее патогенен 1 серотип вируса, с ним связаны эпидемии этого заболевания. Наиболее восприимчивы к полеовирусу дети. До периода введения обязательной плановой иммунопрофилактики заболевания высокая частота заболеваемости, тяжелых форм инфекции и тяжелые постинфекционные осложнения (вялые параличи) характеризовали именно этот контингент лиц.

Вирус проникает через рот. В лимфоидных узлах глоточного кольца происходит его частичная фиксация и первичная репродукция. Вирус свободно проходит кислый барьер желудка и размножается в энтероцитах и пееровых бляшках.

Адсорбция вируса происходит на липопротеиновых рецепторах чувствительных клеток. Путем виропексиса он проникает в клетку. В образовавшейся фагосоме идет депротеинизация вируса и освобождение репликативной формы РНК (и-РНК). Так как его геномная РНК является и и- РНК, то процессы репликации и транскрипции у этого вируса тождественны, и на матрице вирусной РНК идет синтез вирусных белков в вирусспецифических полисомах, образовавшихся в клетке. В ходе процессов трансляции сначала синтезируются ранние вирусные белки - ферменты, участвующие в синтезе РНК вируса, а затем белки капсидной оболочки, точнее пробелки в виде полипептидной цепи, которая нарезается специфическими протеазами на белки капсидной оболочки. После этого они автоматически укладываются в капсомеры вокруг нуклеиновой кислоты вируса. При выходе вновь образовавшихся вирионов происходит гибель пораженных энтероцитов, что клинически проявляется диарейным синдромом.

Полеовирус способен проникать через лимфатический барьер, что ведет к развитию вирусемии, сохраняющейся на протяжении нескольких часов или дней. С током крови вирус заносится во внутренние органы, в том числе в передние рога спинного мозга, где поражает α-мотонейроны. Это может быть связано с повышенной проницаемостью гематоэнцефалического барьера для вируса на фоне образования иммунных комплексов. Помимо передних рогов спинного мозга полеовирус может поражать двигательные клетки ретикулярной формации продолговатого мозга и варолиева моста, мозжечка, моторной и премоторной области коры головного мозга. Репродукция вируса в двигательных нейронах ведет к тяжелым дегенеративным изменениям нервных клеток с развитием клинической картины стойких параличей.

При полиомиелите различают 4 основные клинические формы:

1.инаппарантная (скрытая);

2.абортивная (кишечная форма с маловыраженной симптоматикой);

3.непаралитическая (менингеальная);

177

По способности вызывать вялые и спастические параличи у лабораторных животных различают вирус Коксаки А и вирус Коксаки В, причем у первого 24, а у второго 6 сероваров. Некоторые серовары обладают гемагглютинирующей активностью, в том числе и холодовой гемагглютинацией. Некоторые серовары вируса Коксаки А не культивируются в культурах тканей.

Клинические формы Коксаки-инфекции разнообразны. Вирусы Коксаки А обладают миотропностью, и для клинических проявлений вызываемой ими инфекций характерны лихорадка, менингеальные явления, “герпетические” ангины, перикардиты. Вирус Коксаки В в силу своей нейротропности вызывает энцефаломиелиты, менингиты, полиомиелитоподобные заболевания, обладая кардиотропизмом, вызывает миокардиты. Специфическим для него является поражение сердца с развитием некроза и аневризмы. Так же эти вирусы могут вызывать ОКВИ и ОРВИ у детей. Иммунитет напряженный вариантспецифический.

Специфической профилактики нет.

Вирусы ЕСНО антигенно отличны от вирусов полиомиелита и Коксаки. Различают 31 серовар этих вирусов. Большинство из них обладают гемагглютинирующей активностью, непатогенны для белых мышей, а в культуре ткани дают выраженное цитопатическое действие.

Вирусы ЕСНО в основном вызывают кишечные инфекции у детей, но может быть клиника и более тяжелых полимиелитоподобных заболеваний. Принципы микробиологической диагностики инфекций Коксаки и ЕСНО те же, что и при полиомиелите.

Специфическая профилактика не разработана.

178

Глава 26. Ротавирусы.

Род ротавирусов относят к семейству Reoviridae, куда также включены патогенные для человека рода реовирусов и орбивирусов. Все эти вирусы могут вызывать у человека респираторные и кишечные инфекции и объединены в одно семейство по сходству организации вириона. В центре их вириона находится двунитевая фрагментированная РНК, связанная с вирусспецифической транскриптазой. Капсидная оболочка двуслойная, истинной суперкапсидной оболочки нет.

Для ротавирусов очень характерен внешний вид вириона в виде колеса со спицами при электронной микроскопии. Их капсидная оболочка состоит из двух слоев. В наружном слое капсомеры уложены плотно, а во внутреннем рыхло: капсомер - пустотакапсомер. Это и придает им своеобразный внешний вид. Наружный слой капсидной оболочки ротавирусов разрушается под действием α-галактазидазы, а не протеазы, как у реовирусов.

Ротавирусы не размножаются в куриных эмбрионах, плохо размножаются в культурах тканей и организме лабораторных животных. Удается культивировать их в культурах первичных и перевиваемых почечных клеток зеленых мартышек, где можно наблюдать ЦПД в виде уплотнений и округления клеток. Могут появляться конгломераты клеток, соединенные между собой тяжами. Но не все штаммы ротавирусов удается адаптировать к культурам тканей. Большинство ротавирусов не обладают гемагглютинином, но некоторые серовары могут агглютинировать эритроциты человека группы 0.

По антигенному строению ротавирусы отличаются от рео- и орбивирусов. У ротавирусов человека различают 4 серотипа. За типовые антигены и гемагглютинирующую активность отвечает гликопротеид наружного слоя капсидной оболочки.

Эпидемиология и патогенез ротавирусных инфекций человека.

Ротавирусы - одни из наиболее частых возбудителей кишечных инфекций у детей первых лет жизни. Обычно ротавирусные инфекции протекают с клиникой гастроэнтеритов, но могут иметь более тяжелое течение, особенно у новорожденных. Источник инфекции - больной. Путь предачи - фекальнооральный. Вирус поражает эпителий кишечника. Адсорбируясь на мембранах энтероцитов за счет гликопротеидов наружного слоя капсидной оболочки, вирус проникает в клетку путем эндоцитоза, и в фагосоме идет его частичная депротеинизация с потерей наружного слоя. С освобождением сердцевины вируса начинает действовать его геномный белок - РНК-транскриптаза. На одной нити каждого фрагмента РНК вируса синтезируется “плюс-нить” и-РНК. Она же является матрицей и для синтеза РНК “минуснитей”. Таким образом образуется вирусная РНК, состоящая из “плюс” и “минус”- нитей. Вирусная и- РНК собирает рибосомы в вирусспецифические полисомы, где происходит синтез вирусных белков, после чего становится возможной сборка вирионов.

179

Выход до 1000 вирусных частиц из одной клетки сопровождается ее лизисом. При ротавирусной инфекции микроворсинки щеточной каймы энтероцитов укорачиваются или полностью исчезают, нарушается процесс всасывания, развивается диарейный синдром.

В процессе заболевания развивается иммунный ответ. Сначала появляются иммуноглобулины М, а затем G, обладающие вируснейтрализующей активностью. В процессе заболевания важное место в локализации процесса, снижении тяжести заболевания играют секреторные иммуноглобулины класса А.

Иммуноглобулины G могут сохраняться десятилетиями, обеспечивая постинфекционный иммунитет. Он передается от матери плоду и обеспечивает относительную устойчивость новорожденных к ротавирусной инфекции.

Специфическая профилактика ротавирусной инфекции в нашей стране не проводится, в некоторых странах для создания искусственного активного иммунитета используют убитые вакцины.

Методы микробиологической диагностики ротавирусной инфекции.

Основным методом микробиологической диагностики является метод иммуноиндикации ротавирусных антигенов в фекалиях больных. Для этого могут быть использованы ИФА, коагглютинация, РПГА и др.

Типичная морфология вирионов (“колесо со спицами”) послужила основанием для внедрения в диагностику инфекции метода прямой электронной микроскопии фильтрата фекалий.

В качестве ресроспективного метода диагностики возможно проведение серологического исследования с использованием РСК, ИФА и дпругих реакций иммунитета.

На современном этапе в практику внедряются методы генетического анализа для диагностики ротавирусной инфекции.

180

Глава 27. Возбудитель геморрагической лихорадки с почечным синдромом /ГЛПС/

Вирус - возбудитель ГЛПС раньше относили к семейству Bunyaviridae, не рассматривая как арбовирус. В настоящее время систематическое положение данного вируса пересматривается.

Вирион вируса имеет сферическую форму, размеры до 50 нм. Вирус содержит “минус-нить” РНК, связанную с геномным белком - РНКполимеразой. Нуклеокапсид построен по спиральному типу симметрии. Сверху он покрыт суперкапсидной оболочкой, содержащей липиды, и поэтому вирус ГЛПС чувствителен к эфиру. Гликопротеиды суперкапсидной оболочки являются вариантспецифическими антигенами (различают 2 серовара вируса ГЛПС) и обладают гемагглютинирующей активностью. Вирус хорошо размножается в культуре ткани Vero африканских зеленых мартышек, патогенен для лабораторных животных, не размножается в курином эмбрионе. Сохраняется при температуре 600С, но разушается при нагревании, действии УФ и солнечного света, детергентов. В воздухе его инактивация происходит быстрее при повышенной влажности.

Эпидемиология и патогенез ГЛПС.

ГЛПС - это зоо-антропонозная острая тяжелая инфекция, характеризующаяся лихорадкой, явлениями общей интоксикации, поражением мелких сосудов и капилляров (геморагический синдром), особенно в почках, что обуславливает развитие почечной недостаточности.

Источник инфекции и резервуар вируса в природе - грызуны, особенно рыжие полевки. Поэтому инфекция широко распространена в степных и лесостепных зонах на территории Европы и Азии, в том числе и нашей страны. Распространению вируса среди животных способствуют гамазовые клещи, но для человека трансмиссивный путь заражения не установлен. Основной путь заражения человека алиментарный (употребление в пищу продуктов, инфицированных экскрементами грызунов) и возможен пылевой. От больного заражения не происходит.

Первичная репродукция вируса, по-видимому, происходит в клетках слизистых оболочек кишечника, конъюнктивы глаз и в регионарных лимфоузлах. Адсорбируясь на клетках-мишенях, вирус проникает в них путем эндоцитоза и репродуцируется в цитоплазме клетки. В процессе репродукции вируса идет синтез и-РНК на матрице геномной РНК вируса, после чего синтезируются вирусные белки, но клеточный синтез не подавляется. Выход вирионов осуществляется почкованием. Видимо такой щадящий для клеткихозяина репродуктивный цикл вируса позволяет клеткам восстанавливать свои функции после перенесенной инфекции.

Из лимфоузлов вирус поступает в кровь. Развивается вирусемия, которая сопровождается лихорадкой и поражением капилляров с развитием