3.4. Антитоксические сыворотки для постановки реакции нейтрализации

Антитела сыворотки способны нейтрализовать повреждающее действие микроорганизмов или их токсинов на чувствительные клетки и ткани, что связано с блокадой микробных антигенов антителами.

Для выявления токсинов микроорганизмов реакцию нейтрализации (РН) проводят путем введения животным смеси «антиген-антитело» (токсин-антитоксические антитела).

Отсутствие у животных клинических признаков повреждающего действия токсинов свидетельствует о нейтрализующем действии антитоксической сыворотки и, следовательно, о специфичности взаимодействия комплекса антиген – антитело (положительная реакция). Если животные погибли или у них проявились признаки интоксикации, значит антитела сыворотки крови не оказали нейтрализующего действия на токсины (отрицательная реакция).

Введение смеси токсина и антитоксической сыворотки в организм мыши. Гибель мыши - отрицательный результат реакции нейтрализации.

Рис. 12. Отрицательный результат реакции нейтрализации

Чаще всего антитоксические сыворотки готовят с целью диагностики клостридиозов: злокачественного отека, инфекционной энтеротоксемии, ботулизма, эмкара, столбняка и других заболеваний, возбудители кото­рых образуют экзотоксины.

В качестве антигенов при получении таких сывороток используют анатоксины – обезвреженные токсины клостридий.

Технологическим примером получения сывороток является изготов­ление антитоксических сывороток C.perfringens типов А, С, D, Е и F.

В качестве продуцентов таких диагностических сывороток чаще ис­пользуют валухов тонкорунных пород в возрасте двух лет. Антигенами являются очищенные и концентрированные анатоксины, полученные с помощью соответствующих типов C.perfringens. Для каждого типа ука­занного микроба используют отдельных продуцентов. Антигены овцам вводят подкожно с интервалом 4-6 суток между инъекциями.

Гипериммунизацию животных прекращают после получения сыворо­ток с активностью, предусмотренной инструкцией по её изготовлению. Поэтому в процессе эксплуатации у продуцентов берут кровь и в ее сы­воротке определяют титры антитоксинов.

Активность каждого типа анти­токсических сывороток устанавливают в реакции нейтрализации специ­фических токсинов при введении их смесей белым мышам или крысам и выражают ее количеством антитоксических единиц.

В схеме гипериммунизации животных в каждом случае имеются свои особенности.

3.5. Приготовление и применение флуоресцирующих сывороток

Метод обнаружения антигена при помощи люминесцирующих анти­тел был впервые предложен Кунсом А. в 1942 г. Это позволило увидеть под люминесцентным микроскопом комплекс «антиген-антитело».

Сущность метода заключается в том, что по известному антителу, меченому флюорохромом, определяют неизвестный антиген.

Некоторые флуоресцирующие красители (флуоресцеин изотиоцианат (ФИТЦ), диметиламин-нафталин-сульфанил-хлорид, ау­рамин, корифосфин, порфирины, берберин и др.), не нарушая специ­фичности антител, обладают способностью вступать с ними в химиче­скую связь. Такое меченое антитело соединяется со специфическим ан­тигеном, образуя при этом конгломераты, светящиеся ярко-зелёным или зелено-жёлтым светом при люминесцентной микроскопии.

Рис. 13. Свечение комплекса «антиген-антитело»