Определение кальция в крови

Кальций в сыворотке крови просто и удобно определяется методом де-Ваарда, для которого необходимы реактивы: 1) насыщенный водный раствор щавелевокислого аммония; 2) N /100 раствор марганцовокислого калия и 3) серная кислота.

В центрифужную пробирку наливают 2 мл прозрачной, хорошо отцен-трифугированной сыворотки и для осаждения кальция добавляют в нее 1 мл насыщенного раствора щавелевокислого аммония. Через 30 минут жидкость центрифугируют 10 минут на быстроходной центрифуге. Жидкость над осад­ком осторожно отсасывают, заменяют ее 5 мл дистиллированной воды и вновь центрифугируют. Промывание и центрифугирование повторяют 2—3 раза. Удалив последнюю воду, белый осадок смешивают с 5 мл серной кислоты, нагревают в водяной бане до 70—75° и титруют в горячем виде N/100 раство­ром марганцовокислого калия из микробюретки до появления розового окра­шивания.

1 мл титрованного раствора марганцовокислого калия соответствует 0,2 мг кальция. Если при титровании было израсходовано 1,1 мл раствора перманганата калия, то количество кальция в 2 мл сыворотки крови соот­ветствует 1,1x0,2=0,22 мг, а в 100 мл: 0,22 мгх50=11 мг%.

Используемая вода, несмотря на двойную перегонку, содержит некоторое количество кальция. Для исключения этого кальция в центрифужную про­бирку отмеривают 2 мл дважды дистиллированной воды и прибавляют 1 мл щавелевокислого аммония. Дальше повторяют те же манипуляции, что и при определении кальция в сыворотке крови. Количество марганцовокислого калия, израсходованного на титрование воды (без сыворотки), вычитают иа его же количества, потраченного при титровании исследуемой сыворотки. 44

Кальций сыворотки состоит из двух физиологически различных частей: диализирующей и недиализирующей. Последняя связана с белками сыво­ротки крови. Диализирующая часть составляет 45—55% общего кальция сыворотки; она, по всей вероятности, и является физиологически активной.

Введение кальция внутрь заметно не повышает количества его в сыворотке; однако при подкожном впрыскивании наступает резкое, но крат­ковременное повышение кальция в сыворотке крови.

Количество кальция в сыворотке крови повышается при деструктивных процессах в костной ткани, при гиперавитаминозе D; оно понижается при тетании, иногда при рахите, некоторых формах нефритов, родильном парезе, эксудативном плеврите, гангрене легких, кровопятнистой болезни, первичных и вторичных анемиях и некоторых других остро протекающих заболе­ваниях.

Колебания кальция зависят больше от тяжести патологического процесса и не подчинены этиологической природе заболевания.

У большинства здоровых животных количество кальция в сыворотке крови колеблется: у лошади от 9,0 до 21,0 мг% (в среднем 15,0 мг%), у козы от 23,0 до 26,0 мг% (в среднем 24,6 мг%).

Определение фосфора в крови

Фосфор содержится в липоидных и неорганических соединениях крови. В свежевзятой крови в течение первых трех часов хранения отмечается нарастание органической кислоторастворимой фракции фосфора за счет неорганической. Позднее органический кислоторастворимый фосфор подвер­гается гидролизу с образованием неорганической фракции. В гемолизирован-ной крови гидролиз совершается сразу и в значительном объеме.

Содержание фосфора определяют непосредственно после взятия крови, при котором принимают все меры предосторожности, предупреждающие ее гемолиз (сухая игла, сухая пробирка).

Метод Белл — Дойзи — Бриггса. В основу метода положен принцип превращения фосфора с помощью молибденовой кислоты в фосфорно-молибденовую кислоту, которая восстанавливается гидрохиноном и серно­кислым натрием в молибденовую синь. По степени окраски, устанавливаемой колориметрически, вычисляют количество неорганического фосфора. Для реакции используют: 1) 20% раствор трихлоруксусной кислоты.

2) 5% молибденовый раствор. 25,0 молибденовокислого аммония раство­ряют в 300 мл дистиллированной воды и вносят в мерную колбу емкостью 500 мл. Если нужно, раствор фильтруют. В другой колбе к 125 мл дистилли­рованной воды приливают 75 мл концентрированной серной кислоты. Второй раствор переливают в колбу с первым раствором, которую после охлаждения доливают водой до метки. Чтобы убедиться в отсутствии в реактивах фосфора, перед работой необходимо поставить пустой опыт (использование всех реак­тивов, но без крови).

3) 1 % раствор гидрохинона. На 100 мл раствора добавляют одну каплю концентрированной серной кислоты, чтобы замедлить окисление. Раствор должен быть почти прозрачным. При стоянии реактив становится коричневым и непригодным к употреблению.

4) Содово-сернистый раствор 25 мл 15% раствора сернокислого натрия смешивают со 100 мл 20% раствора углекислого натрия. Жидкость филь­труют. Раствор не стоек, а потому его готовят в небольших количествах (несколько определений).

5) Основной стандартный раствор. На аналитических весах отвешивают 4,394 г химически чистого фосфорнокислого калия, который предварительно высушивается в эксикаторе над сорной кислотой до постоянного веса. Навеску фосфорнокислого калия растворяют затем в 1 л воды. К готовому раствору прибавляют 5 мл хлороформа. Перед употреблением жидкость разводят в 100 раз. 1 мл рабочего стандартного раствора содержит 0,01 мг фосфора.

6) Беззольные фильтры.

Техника определения. 1 мл только что взятой, еще не свернувшейся крови вносят в пробирку с 3 мл воды, ополаскивают пипетку той же водой и добав­ляют к смеси 1 мл 20% раствора трихлоруксусной кислоты. Содержимое взбалтывают и, дав ему постоять 10 минут, фильтруют через беззольный фильтр. Фильтрат должен быть совершенно прозрачен и бесцветен. Затем в одну из двух одинаковых градуированных пробирок отмеривают 1,5 мл фильтрата, а в другую такое же количество стандартного раствора и 0,5 мл трихлоруксусной кислоты. По возможности одновременно в обе пробирки добавляют 0,5 мл 5% раствора молибденовокислого аммония и 0,5 мл 1% раствора гидрохинона. Жидкость темнеет. Спустя 5 минут в пробирки приливают 1 мл содово-сернистого раствора (приливают медленно, так как обра­зуется пена) и воду до 6 мл. Через 10 минут приступают к колориметриро-ванию.

При колориметрировании в колориметре Дюбоска расчет ведут по сле­дующей формуле:

где К — концентрация; В — высота столба жидкости при измерении (следует учесть, что 1,5 мл фильтрата равны 0,3 мл крови).

В качестве редуцирующего вещества можно использовать 1 % раствор аскорбиновой кислоты, приготовленный на N/10 HC1.

Реакцию ставят следующим образом. После внесения молибденового реактива добавляют 1 мл раствора аскорбиновой кислоты. Одновременно обрабатывают и стандарт. Появляющееся синее окрашивание достигает мак­симальной интенсивности через 10 минут. В завершение производят колори-метрирование и вычисляют содержание фосфора по обычным правилам.

Определение фосфора в крови или сыворотке имеет большое клиническое значение. На содержание его в крови значительное влияние оказывает каче­ство корма (установлено, что летом количество фосфора в крови несколько больше, чем зимой).

Уменьшение количества фосфора против нормы наблюдается при рахите и родственной последнему остеомаляции. При лечении рахита рыбьим жиром или препаратами витамина D содержание фосфора в крови возрастает, что можно использовать для контроля терапии.

Увеличение количества фосфора отмечается при почечной недостаточ­ности, а также в период заживления костных переломов.

Содержание фосфора в липоидах сыворотки увеличивается при диабете, патологической беременности и при нарушении функции печени.

У здоровых животных количество неорганического фосфора колеблется от 5,0 до 9,0 мг% (в среднем равно 7,0 мг%).