- •Глава 1 методы исследования
- •Осмотр (inspectio)
- •Пальпация (palpatio)
- •Перкуссия (percussio)
- •Аускультация (auscultatio)
- •Методика и техника аускультации
- •Термометрия
- •I. Предварительное ознакомление с больным животным
- •II. Собственное исследование (status praesens)
- •Типы конституции и их клиническое значение
- •Кожные сыпи
- •Термометрия
- •Нормальная температура тела животных
- •Лихорадка
- •Гипотермия
- •Глава III исследование сердечно-сосудистой системы
- •Исследование сердца
- •Аускультация сердца
- •Происхождение и характер тонов сердца
- •Шумы сердца
- •Графические методы, применяемые при исследовании сердечно-сосудистой системы
- •Клиническое исследование периферических вен
- •Флебография
- •Аритмии (arhythmiae)
- •Кровяное давление
- •Функциональные методы исследования сердечно-сосудистой системы
- •Глава IV исследование дыхательной системы
- •Осмотр носовых отверстий и слизистой оболочки носа
- •Исследование верхнечелюстной и лобной пазух
- •Исследование воздухоносных мешков у лошадей
- •Исследование гортани и трахеи
- •Исследование мокроты
- •Исследование щитовидной железы
- •Частота дыхания
- •Ритм дыхания
- •Типы дыхания
- •Сила и симметричность дыхательных движений
- •Форма грудной клетки
- •Пальпация грудной клетки
- •Перкуссия грудной клетки
- •Изменение границ легких
- •Аускультация грудной клетки
- •Основные физиологические дыхательные шумы
- •Патологические шумы дыхания
- •Трахеальная перкуссия — плегафония
- •Фонометрия
- •Графические методы исследования дыхания
- •Пневмография
- •Пробный прокол грудной клетки
- •Функциональные методы исследования дыхательной системы
- •Клинические показатели подготовленности лошади (по н. С. Черепанов)
- •Глава V исследование пищеварительной системы общие замечания
- •Аппетит
- •Прием корма и питья
- •Исследование преджелудков жвачных
- •Исследование желудка лошади
- •Исследование кишечника
- •Желудочный сок лошади
- •Патологическая секреция при заболеваниях желудка лошади
- •Исследование нативного содержимого желудка
- •Глава VI исследование мочевой системы общие замечания
- •Исследование мочевого пузыря
- •Свойства нормальной мочи некоторых животных
- •Определение физических свойств мочи
- •Определение количества белка в моче кольцевой пробой Роберте -Стольникова
- •Упрощенные методы исследования мочи (с помощью фильтровальной бумаги)
- •Микроскопическое исследование осадков мочи
- •Функциональные методы исследования почек
- •Выделение индигокармина у клинически здоровых лошадей и крупного рогатого скота
- •Глава VII исследование нервной системы
- •И. П. Павлова
- •Патологические изменения чувствительности
- •Мышечный тонус и пассивные движения
- •Расстройства координации движений (атаксии)
- •Механическая возбудимость мышц
- •Параличи
- •Судороги и гиперкинезы
- •Фармакологическая методика
- •Глава VIII исследование системы крови значение гемодиализа и история развития гематологии
- •Ретракция кровяного сгустка
- •Реакция оседания эритроцитов (роэ)
- •Определение билирубина в сыворотке крови
- •Определение кальция в крови
- •Определение фосфора в крови
- •Определение количества гемоглобина
- •Определение цветного показателя
- •Подсчет форменных элементов крови
- •Нормальное количество эритроцитов в крови здоровых животных
- •Техника подсчета лейкоцитов
- •Нормальное количество лейкоцитов в кропи здоровых животных
- •Техника подсчета кровяных пластинок
- •Техника подсчета форменных элементов крови у птиц
- •Техника приготовления мазков
- •Диаметр (в микронах) эритроцитов разных видов животных
- •Лейкоциты
- •Лейкоцитарная формула здоровых животных
- •Учение Шиллинга о лейкоцитозе в свете нейрогенной теории
- •Лейкоцитарный профиль
- •Сетка для гематологического профиля лошади (по Домрачеву)
- •Определение функциональной) способности кровотворных органов
- •Оглавление
- •Глава I. Методы исследования (в. И. Зайцев)............ 13
- •Глава II. Общее исследование животного (в. И. Зайцев)......... 25
- •Глава III. Исследование сердечно-сосудистой системы (и. Г. Шарабрин)67
- •Глава IV. Исследование дыхательной системы (в. И. Зайцев) . . .... 107
- •Глава V. Исследование пищеварительной системы (а. В. Синее) ..... 149
- •Глава VI. Исследование мочевой системы (п. С. Ионов).......... 215
- •Глава VII. Исследование нервной системы (а. Б. Синев)........ 268
- •Глава VIII. Исследование системы крови (а. В. Васильев) ....... 311
Определение билирубина в сыворотке крови
Билирубин в незначительных количествах может быть обнаружен в сыворотке крови здоровых животных, в больших же количествах он появляется только при патологических процессах.
Желчные пигменты образуются из гемоглобина распавшихся эритроцитов. В клетках ретикуло-эндотелиальной системы из пигментов расщепленного гемоглобина синтезируется билирубин, связанный с глобулинами. Этот билирубин выделяется в кровь, окрашивая ее сыворотку в желтоватый цвет. Из крови билирубин улавливается купферовскими клетками печени и затем передается печеночным эпителиальным клеткам, которые видоизменяют его, освобождая от глобулинов. Измененный билирубин через желчные пути поступает в кишечник и здесь превращается в уробилиноген. Часть этого пигмента всасывается из кишечника в кровь, а часть выводится в виде стеркобилина с фекальными массами.
Билирубин, связанный с глобулинами, называется билирубином, не проведенным через печень. Повышенное содержание такого билирубина в крови отмечается при гемолитических желтухах. Чем значительнее распад эритроцитов, тем больше в сыворотке крови билирубина, не проведенного через печень (гемоспоридиозы, отравление гемолитическими ядами).
Билирубин, не связанный с глобулинами, называется проведенным через печень. Повышенное количество такого билирубина в сыворотке крови обнаруживается при различного рода препятствиях к оттоку его из желчных путей в кишечник. Билирубин в этом случае начинает поступать в кровь (закупорка желчных ходов, болезни печени).
Установление разновидностей билирубина имеет практическое значение при дифференциации желтух.
Для определения билирубина в сыворотке крови существует несколько способов.
Способ Ван-ден Берга — наиболее точный. Для постановки реакции необходимы колориметр Аутенрита или Дюбоска, диазореактивы Эрлиха, 96° спирт и стандартный раствор.
Рабочую смесь готовят из разных диазореактивов. Первый реактив — сульфаниловой кислоты 1,0, соляной кислоты 15 мл (удельный вес 1,125) и дистиллированной воды 1 л; второй реактив — азотистокислого натрия 0,5 и дистиллированной воды 100 мл. Рабочий реактив получают, смешивая 8 мл первого реактива и 0,25 мл второго.
Наилучшим и наиболее употребительным является кобальтовый стандартный раствор. В 100 мл дистиллированной воды растворяют 2,161 г сернокислого кобальта, предварительно освобожденного нагреванием от кристаллизационной воды, или 3,92 г кристаллического CoSO4-7H2O. Этот раствор соответствует раствору билирубина 1: 200 000 (0,5 мг%).
Стандартом такой же окраски, но менее стойким, является смесь двух растворов, получаемых следующим образом.
1. В колбочке емкостью 100 мл в небольшом количестве воды растворяют 0,1508 железоаммиачных квасцов и прибавляют затем 50 мл соляной кислоты (удельный вес 1,19). После этого уровень жидкости доводят водой до метки 100. Из этого основного раствора, имеющего 1/320 нормальности, приготовляют рабочий реактив (1/8000 нормальности): в колбу емкостью 250 мл помещают 10 мл основного раствора, смешивают его с 25 мл соляной кислоты и доливают водой до 250 мл. Рабочий реактив годен для работы в течение нескольких месяцев.
2. 10% раствор роданистого калия (или роданистого аммония). К 3 мл рабочего реактива прибавляют в делительной воронке 3 мл 10% раствора роданистого калия и 12 мл серного эфира. При постоянном охлаждении делительной воронки под краном жидкость смешивают до тех пор, пока роданистое железо не будет экстрагировано эфиром. Этим розовым эфиром — раствором роданистого железа и пользуются в качестве стандарта. По своей окраске стандарт соответствует 0,5 мг билирубина на 100 мл сыворотки крови. Стандарт необходимо предохранять от испарения.
При исследовании к 2 мл испытуемой сыворотки добавляют 4 мл спирта и смесь центрифугируют 20 минут; 1 мл прозрачного раствора переносят в клин колориметра Аутенрита или в стаканчик колориметра Дюбоска и, прибавив 0,5 мл спирта для растворения жирных кислот, обрабатывают 0,25 мл рабочего реактива. Наполнив затем второй стаканчик колориметра кобальтовым стандартом или раствором роданистого железа, сравнивают окраску обоих растворов и устанавливают, на каких делениях шкалы получается идентичное окрашивание в обоих стаканчиках. Расчет производится по формуле:
При расчетах необходимо учитывать степень разведения сыворотки.
Способ основан на том, что при воздействии диазореактива на сыворотку крови, содержащую билирубин, образуется азобилирубин (диазосоль), придающий сыворотке розовое окрашивание. Следует, однако, иметь в виду, что окраска зависит от реакции среды: в нейтральной среде окрашивание получается розовое, в слабокислой среде эта окраска имеет слабо-фиолетовый оттенок. Такая же окраска получается при медленном выполнении исследования.
Количество билирубина (в миллиграммах на 100 мл) в сыворотке крови здоровой лошади колеблется в пределах 0,37—3,0, среднее 1,1.
Методом Ван-деы Берга можно установить и разновидность билирубина.
Прямая реакция. Появление окрашивания после добавления одного рабочего реактива носит название прямой реакции. Окрашивание жидкости и притом различной интенсивности может наступить в неодинаковые сроки. Различают реакции: прямую быструю, когда жидкость окрашивается сейчас же после добавления реактива и окраска достигает максимума через 20—30 секунд, прямую двухфазную, если после добавления реактива жидкость окрашивается очень слабо, а затем окраска становится все более и более интенсивной, и прямую замедленную, когда окрашивание появляется спустя 10—15 минут.
Прямая реакция получается при наличии в крови билирубина, проведенного через печень, и всегда свидетельствует о патологии.
Прямая быстрая реакция указывает на механическую желтуху, связанную с препятствием к оттоку желчи (камни, паразиты, опухоль, стеноз желчных протоков, новообразования).
Прямая замедленная реакция отмечается при нарушении функции печеночных клеток (катаральная желтуха).
Прямая двухфазная реакция — признак желтухи смешанного характера.
Непрямая реакция. Если после добавления диазореактивов цвет жидкости в течение 15 минут не изменяется, в пробирки добавляют спирт. Появление вслед за этим розово-малинового окрашивания оценивается как непрямая реакция. Спирт разрушает связь билирубина с глобулинами крови. Чтобы отчетливее видеть окрашивание, в пробирки можно налить 0,5-мл эфира. Разница между бесцветным слоем эфира и окрашенной испытуемой сывороткой выступает более отчетливо.
Непрямая реакция указывает на гемолитическую желтуху и получается при наличии билирубина, не проведенного через печень.
Способ Бокальчука. Для постановки пробы готовят два раствора по прописи: первый — сульфаниловой кислоты 1,0, соляной кислоты (удельный вес 1,19) 10 мл и дистиллированной воды 200 мл; второй — азотистокислого натрия 0,5 и дистиллированной воды 100 мл. Перед исследованием растворы смешивают в пропорции: 10 мл первого и 0,3 — второго.
Для определения билирубина в каждую из пяти пробирок наливают 0,5 физиологического раствора, а затем вносят 0,5 мл испытуемой сыворотки. Перемешав жидкость, отсасывают пипеткой 0,5 мл смеси из первой пробирки и переносят ее во вторую пробирку. Из второй после перемешивания смеси переносят 0,5 мл в третью и т. д. Излишек в пятой пробирке удаляют, выливая в чашку. В результате получают разведения, кратные двум: 2, 4, 8, 16, 32, Затем в пробирки вносят по 0,5 мл рабочего реактива и осторожно смешивают. При наличии билирубина получается розовое окрашивание. Концом реакции считается разведение, в котором едва различимо это розовое окрашивание.
Если окрашивание не наступило в течение 15 минут, в пробирки доба-нляют спирт. Помутневшая вследствие осаждения белка я идкость ври наличии билирубина окрашивается в розово-малиновый цвет. Чтобы лучше заметить в мутной жидкости изменение цвета, в пробирки наливают по 0,5 мл эфира и жидкость в них рассматривают на белом фоне. Разница между бесцветным слоем эфира и окрашенной испытуемой жидкостью выступает очень отчетливо.
Незначительная модификация техники выполнения реакции позволяет установить количество и качество билирубина.
Появление окрашивания без добавления спирта рассматривается как прямая реакция, указывающая на билирубин, проведенный через печень. Положительная реакция после добавления спирта является непрямой и свидетельствует о наличии билирубина, не проведенного через печень. Умножением показателя разведения, в котором окрашивание едва намечается, на 0,016 устанавливают количество билирубина в 1 мл сыворотки, а последующим умножением на 100 — количество билирубина в миллиграмм-процентах.
Способ Казакова. В качестве реактива используется 20% раствор трихлоруксусной кислоты.
В чистых сухих вробЕрках (5—8 штук) разведение испытуемой сыворотки физиологическим раствором выполняется так же, как и по способу Бокальчука. В каждую пробирку вносят по 1 мл 20% раствора трихлоруксусной кислоты. После перемешивания встряхиванием содержимое каждой ьробврки выливают в заранее приготовленные стеклянные воронки с фильтровальной бумагой. Воронки нумеруют, вставляют в штатив для пробирок и высушивают при комнатной температуре. Результат реакции учитывается на следующий день. Заметно различимое зеленое окрашивание считается концом реакции (табл. на стр. 328).
У крупного рогатого скота, овец, коз и свиней способами Бокальчука и Казакова билирубин выявляется только во второй половине беременности и не превышает 3,2 мг%. У лошадей содержание его достигает 6,4 мг%, л у жеребых кобыл — 12,8 мг% (Н. Н. Комарицын).
Для расчета можно воспользоваться следующей таблицей.
Количество билирубина в сыворотке значительно повышается при инфлюэнце, крупозной и гриппозной пневмонии, мыте. Наиболее высокие цифры (до 4 мг%) отмечаются при кровопятнистой болезни, отравлении SO2 и хвощом. Максимальные изменения обнаружены при энцефаломиелите лошадей—8—12 мг%.
Значительные билирубинемии присущи небольшому числу заболеваний, имеющих совершенно различную клиническую картину; таким образом, этот показатель может быть с успехом использован при дифференциации процессов и для прогноза.