Задача № 33

В инструкции к набору реактивов для определения лактатдегидрогеназы (ЛДГ) кинетическим методом указано, что калибровочный коэффициент для длины волны 340 нм равен 16030. При фотометрировании получены показатели экстинции:

Е начальная - 0,278

Е на 1-й минуте - 0,253

Е на 2-й минуте - 0,228

Е на 3-й минуте - 0,203

Задания

1. Рассчитайте активность ЛДГ.

2. Оцените результат исследования, применяя терминологию.

3. Поясните, какой принцип положен в основу определения многих ферментов кинетическим методом и объясните его.

4. Расскажите принцип метода определения ЛДГ кинетически.

Эталон ответа к задаче № 33

1. ∆Е/мин =[ (Енач - Е1) + (Е1 – Е2) + (Е2 – Е3)] : 3 = 0,025

∆Е/мин х16030 = 0,025х16030 = 400,75 U/л

2. Нормоферментемия, так как норма ЛДГ в сыворотке при 37ºC равна

225 - 450 U/л.

3. В основу кинетического метода определения активности ферментов положен тест Варбурга, который основан на том, что при длине волны 340 нм окисленная форма НАД имеет максимум поглощения, в то время как восстановленная форма НАДН не поглощает при этой длине волны. НАД является коферментом многих ферментов, что позволяет его использовать для определения ферментов.

4. Пируват превращается в лактат при каталитическом действии лактатдегидрогеназы. Скорость окисления НАДН в НАД пропорциональна активности ЛДГ.

Задача № 34

В лаборатории был синтезирован тетрапептид, содержащий в своём составе аминокислоты Цис, Про, Три, Сер. Известно, что N- концевой конец представлен аминокислотой Цис. Тетрапептид подвергли ферментативному гидролизу химотрипсином, который разрушает пептидные связи, образованные карбоксильной группой ароматических аминокислот. В результате образовался трипептид, содержащий Три, Цис, Про.

Задания

1. Назовите ароматическую аминокислоту, входящую в состав тетрапептида.

2. Расскажите как образуется пептидная связь.

3. Назовите реакцию обнаружения пептидной связи и расскажите её принцип.

4. Определите аминокислотную последовательность, синтезированного тетрапептида.

Эталон ответа к задаче № 34

1. В состав тетрапептида входит ароматическая аминокислота триптофан.

2. Пептидная связь образуется между азотом аминогруппы одной аминокислоты и углеродом карбоксильной группы другой аминокислоты. Первичная структура белка стабилизирована пептидными связями.

3. Пептидную связь обнаруживают биуретовой реакцией. Пептидная связь с сульфатом меди в щелочной среде образует комплекс сине-фиолетового цвета. Интенсивность окраски пропорциональна количеству пептидных связей.

4. Цис-Про-Три-Сер.

Задача № 35

В лабораторию был доставлен биоматериал. Необходимо было доказать, что он содержит аминокислоты фенилаланин, тирозин, триптофан.

Задания

1. Дайте общую характеристику этим аминокислотам.

2. Назовите единую реакцию, с помощью которой обнаруживаются эти аминокислоты.

3. Расскажите химизм реакции обнаружения перечисленных выше аминокислот.

4. Назовите реакции, с помощью которых можно идентифицировать триптофан и тирозин.

Эталон ответа к задаче № 35

1. Циклические, незаменимые аминокислоты. Фенилаланин и тирозин образуют взаимосвязанную пару, так как участвуют в образовании биологически активных веществ адреналина и тироксина. Триптофан участвует в синтезе витамина РР, серотонина, гормонов эпифиза.

2. Ксантопротеиновая реакция открывает фенилаланин, тирозин, триптофан.

3. В результате нитрования бензольного кольца циклических аминокислот возникают нитросоединения жёлтого цвета, которые в щелочной среде приобретают структуру оранжевого цвета.

4. Триптофан обнаруживают реакцией Адамкевича, а тирозин реакцией Миллона.

Задача № 36

С целью изучения аминокислотного состав белка лаборант проводил его кислотный гидролиз. Для этого он кипятил раствор белка в присутствии сильной кислоты. Чтобы установить окончание гидролиза он периодически отбирал гидролизат и проводил качественные реакции на аминокислоты.

Задания

1. Перечислите основные реакции, которые проводил лаборант с целью идентификации аминокислот.

2. Назовите процессы, происходящие с белком в результате кислотного гидролиза.

3. Назовите реакцию и расскажите химизм реакции обнаружения аминокислот.

4. Назовите реакцию, с помощью которой лаборант установил окончание гидролиза.

Эталон ответа к задаче № 36

1. Нингидриновая, ксантопротеиновая, реакция Адамкевича, реакция Миллона, реакция Фоля.

2. Дегидратация, денатурация, т.е. разрушение всех связей, стабилизирующих белковую молекулу, распад пептида на отдельные аминокислоты

3. Нингидриновая реакция. При нагревании альфа- аминокислот с нингидирином образуется продукт конденсации аминокислот, который даёт фиолетовое окрашивание

4. Биуретовая реакция. По окончании гидролиза биуретовая реакция должна быть отрицательной, т. к. пептидные связи разрушились и в растворе остались отдельные аминокислоты.

Задача № 37

У новорождённого ребёнка после кормления грудным молоком наблюдались понос и рвота. После перевода ребёнка на искусственное вскармливание без молока эти явления исчезли. Возможной причиной заболевания является недостаточность одного из ферментов, участвующих в переваривании углеводов.

Задания

1. Назовите углевод, входящий в состав молока, мономеры и связи, с помощью которых он образован.

2. Дайте краткую характеристику мономерам молочного сахара.

3. Назовите реакцию и расскажите принцип обнаружения молочного сахара.

4. Назовите фермент, расщепляющий молочный сахар.

Эталон ответа к задаче № 37

1. Лактоза. (+), D-глюкоза и (+), D- галактоза, альфа-гликозидные связи.

2. Глюкоза («виноградный сахар») - альдегидоспирт, хорошо растворяется в воде, сладкий на вкус, углеродный скелет состоит из 6 атомов углерода, обладает восстанавливающими свойствами, является основным энергетическим субстратом. Галактоза - альдегидоспирт, хорошо растворяется в воде, сладкий на вкус, углеродный скелет состоит из 6 атомов углерода, обладает восстанавливающими свойствами.

3. Проба Велька. Лактоза в щелочной среде при нагревании с аммиаком даёт окрашенное соединение красно-коричневого цвета.

4. Лактаза.