1. Теоретическая часть:

0. 1.1.Повторение теоретического материала по теме: «Водно-минеральный обмен».

1. 1.2.Вводное слово преподавателя.

1. Указания к занятию. Методические рекомендации:

   0. 2.1.Внимательно изучите инструкцию.

   1. 2.2.Приготовьте всё необходимое оборудование, реактивы для проведения анализа.

   2. 2.3.Соблюдайте меры предосторожности при работе с биологическим материалом.

   3. 2.4. По окончании работы провести дезинфекцию использованного биологического материала, посуды.

3.Практическая часть.

А. 3.1. Лабораторная работа №1. Определение концентрации кальция в биологических жидкостях колориметрическим методом (арсеназо ΙΙΙ).

Принцип: При взаимодействии ионов кальция в нейтральной среде с хромогеном Арсеназо ΙΙΙ образуется окрашенный комплекс, имеющий максимумы поглощения при длинах волны 613 или 650 нм.

Исследуемый материал:

Сыворотка или гепаринизированная плазма крови натощак. Кровь брать при минимальном пережатии вены, без мышечной нагрузки. Не использовать в качестве антикоагулянтов оксалат, цитрат или ЭДТА.

Моча суточная, Собирать в емкость содержащую 10 мл 6 моль/л НСΙ, или подкислить после сбора до рН 3-4 для растворения солей кальция. Образец перед анализом развести бидистиллированной водой в отношении 1:.

Оборудование и реактивы:

Штатив с пробирками, микропипетки объёмом 0,1 мл, пипетка на 1 мл, набор реактивов «Абрис +» (кальций арсеназо ΙΙΙ), дез р-р, спектрофотометр.

Проведение анализа. Калибровочная

проба

Моча суточная. Перед анализом развести дистиллированной водой в 3 раза.

Внести в пробирки мл.	Опытная проба	Калибровочная проба	Холостая проба
Монореагент	1 мл	1 мл	1 мл
Сыворотка крови	0,01 мл
Бидистиллированная вода.			0,01 мл
Калибровочный р-р 2,5 ммоль/л		0,01 мл

Инкубировать 5 мин. При температуре 18-25⁰С.

По окончании инкубации измерить оптическую плотность Е_пр и Е_кал. против холостой пробы при длине волны 613 нм или 650 нм; d = 1 см.

Окраска стабильна не менее 60 мин.

Расчёт:

1. Сыворотка ( плазма) крови

С = 2,5 х Е _пробы (ммоль/л)

Е_{калибр.}

Сыворотка, плазма крови – 2,02-2,60 ммоль/л;

Б. Определение концентрации кальция в сыворотке и плазме крови унифицированным колориметрическим методом с О – крезолфталеин комплексоном.

Принцип метода:

Кальций в щелочной среде образует окрашенный комплекс с О – крезолфталеин комплексоном. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации кальция в пробе.

Оборудование и реактивы.

1.Штатив с пробирками, микропипетки объёмом 0,1 мл, пипетка на 1 мл.

2.Набор реактивов «Ольвекс диагностикум»-Кальций.

3.Спектрофотометр.

4.Дез. р-р 0,5% полидеза.

Исследуемый материал:

Сыворотка или гепаринизированная плазма крови.

ВНИМАНИЕ! Не использовать в качестве антикоагулянтов оксалат, цитрат и ЭДТА.

Процедура анализа:

Подготовьте пробы следующего состава мл.	Опытная проба.	Калибровочная проба	Контрольная проба
Буфер (реагент №1)	1,0	1,0	1,0
Хромоген (реагент №2)	1.0	1,0	1,0
Сыворотка крови	0,05
Калибратор		0,05
Вода бидистиллир.			0,05

Пробы тщательно перемешайте и инкубируйте 5 мин, при комнатной температуре. Измерьте оптические плотности Е_оп. и Е_кал. проб против контрольной пробы при длине волны 570 нм (540-590 нм).

Окраска стабильна не более 30 мин.

Обратите внимание:

1. Тест очень чувствительный, поэтому рекомендуется пользоваться одноразовой посудой и наконечниками.

2. При длительном контакте с воздухом комплексообразующая способность О – крезолфталеин комплексона снижается. Плотно закрывайте флаконы с реагентами сразу после использования.

Расчёт:

С _(Са) = Е_прбы х 2,5 ммоль/л.

Е_{калибр.}

Если концентрация кальция превышает 3,75 ммоль/л разведите образец бидистиллированной водой и повторите анализ; результат умножить на величину разведения.

Нормальные значения: 2,15-2,50 ммоль/л.

ПРИЛОЖЕНИЕ № 4

Закрепление знаний, умений и навыков.