И Н С Т Р У К Ц И Я

по выполнению практической работы № 73 по теме

«Химия крови. Определение естественного (спонтанного) лизиса и ретракции фибринового сгустка».

Цели занятия:

1. Закрепить и углубить знания по теме «Химия крови. Система гемостаза».

2. Изучить метод определения естественного (спонтанного) лизиса и ретракции фибринового сгустка.

Исходный уровень знаний и умений.

Учащийся должен знать:

1. Основные компоненты крови, их биологическую роль.

2. О крови как о единой биохимической системе в организме человека.

3. О роли лабораторной диагностики в исследовании крови как важнейшего источника сведений о состоянии здоровья человека.

4. Технику приготовления растворов для исследования; плазмы крови.

5. Технику дозирования, пипетирования, инкубации проб.

6. Меры предосторожности в работе с биологическим материалом, приборами.

Учащийся должен уметь:

1. Работать с градуированной пипеткой, дозатором, набором реактивов.

2. Приготовить необходимые пробы для биохимического исследования.

3. Провести биохимическое исследование по предложенной методике.

4. Давать начальную интерпретацию полученному результату.

5. Решать ситуационные задачи.

Структура занятия.

1. Теоретическая часть:

1. Повторение теоретического материала по теме «Химия крови. Система гемостаза».

2. Вводное слово преподавателя.

Полноценность остановки кровотечения во многом определяют не только скорость образования, но и качество кровяного сгустка (тромба) – его плотность, объём, способность к ретракции и спонтанному лизису.

После появления фибрина следуют ретракция и фибринолиз, которые существенным образом меняют физические свойства сгустка. Поэтому лишь по окончательному определению степени ретракции сгустка, количества в нём фибрина и оставшихся форменных элементов, а также по их сравнению с исходными показателями гематокрита можно получить представление о свойствах сформировавшегося сгустка. Степень ретракции кровяного сгустка является показателем количества и функционального состояния тромбоцитов.

Фибринолитическая система организма направлена на естественный лизис фибрина, образующегося в процессе локального гемостаза на разных этапах формирования фибринового остова: от фибрин-мономера, РФМК (растворимые фибрин-мономерные комплексы) и до фибрина I.

Она состоит из плазминового звена – основного звена фибринолиза, и неплазминового звена – фибринолитических компонентов лейкоцитов, тромбоцитов и эритроцитов, непосредственно расщепляющих фибрин.

плазминовое звено

неплазминовое звено

фибрин

лизис фибрина

Схема фибринолитической системы.

В плазминовое звено фибринолиза включается: плазминоген, тканевый активатор плазминогена, проактиватор плазминогена, киназы – тканевые и бактериальные (стрептокиназа, стафилокиназа и др.), антиплазмины, антиактиваторы плазминогена (ингибиторы активаторов).

Плазминоген синтезируется в печени, костном мозге, почках. Под действием некоторых активаторов он превращается в плазмин – сериновую протеиназу, расщепляющую лизил-аргининовые и лизил-лизиновые связи в белковых субстратах, главным образом, в фибрине и фибриногене. Плазмин способен расщеплять некоторые факторы свёртывания крови (XII, VIII), гормон роста, γ-глобулин.

Функции активаторов плазминогена: регуляция жидкого состояния крови (фибринолиза), регенерации тканей, активации роста и метастазирования опухолей и др.

Активаторы плазминогена классифицируются в зависимости от источника получения: тканевый, сосудистый, плазменный, активатор из мочи – урокиназа, а также активаторы плазминогена, выделяемые культурами нормальных раковых клеток.

Неотъемлемый компонент фибринолитической системы – ингибиторы. Антиплазминовым свойством обладают α₂-антиплазмин, антитромбин III, α₂-антитрипсин и др.

α₂-антиплазмин взаимодействует с фибрином. В результате образования комплекса α₂-антиплазмина с фибрином фибриновые сгустки становятся менее чувствительными к фибринолизу плазмином. Фибринолиз осуществляется в присутствии фибринстабилизирующего фактора, тромбина и Ca²⁺. У α₂-антиплазмина совершенно не меняется активность после связывания с фибрином, так как индуцируемый плазмином фибринолиз почти полностью подавляется им. При свёртывании плазмы, полученной из крови больных с дефицитом α₂-антиплазмина, сгусток подвергается спонтанному лизису через несколько часов инкубации. Такой сгусток в нормальной плазме с α₂-антиплазмином лизируется через 8-24 часа.

Спонтанный фибринолиз вызывается активацией связанного фибрином плазминогена и эффективно ингибируется α₂-антиплазмином, также связанным с фибрином. Кровоточивость, как правило, обусловлена генным дефицитом α₂-антиплазмина: кровотечение возникает от малейшей травмы и даже спонтанно.

Фибринолитическая система находится в динамическом равновесии со свёртывающей системой крови, тем самым, обеспечивая целостность сосудистого русла человека. Система свёртывания постоянно «латает» фибрином мельчайшие повреждения эндотелия, а фибринолитическая система удаляет остатки фибрина после выполнения им гемостатической функции.

Мнение, что система фибринолиза in vivo постоянно находится в активном состоянии, подтверждается присутствием активатора плазминогена в крови в норме и снижением его уровня у больных венозными тромбозами и ИБС. Ещё одним доказательством важной роли фибринолитической системы в обеспечении динамического равновесия in vivo служит тот факт, что путём фармакологического ингибирования фибринолиза можно уменьшить кровопотерю после простатэктомии, а также у больных с первичной меноррагией и что высокий уровень ингибиторов характерен для больных тромбозами.

Фибринолитическая система не только обеспечивает удаление фибрина из сосудистого русла, но и участвует в других биологических процессах, таких как репарация тканей, злокачественная трансформация, овуляция, имплантация эмбриона.