Структура занятия.

1. Теоретическая часть:

1. Повторение теоретического материала по теме «Химия и обмен углеводов».

2. Вводное слово преподавателя.

Для диагностики целого ряда заболеваний: сахарный диабет, патологические состояния, связанные с недостаточностью функции печени и почек, некоторые эндокринные заболевания и другие, важно иметь объективное представление о состоянии углеводного обмена, кардинальным показателем которого служит содержание глюкозы в крови.

На занятии будет использован ортотолуидиновый метод, состоящий в определении интенсивности окрашивания раствора, возникающего при взаимодействии ортотолуидина с глюкозой. Этот метод специфичен, точен, дает возможность определять только «истинную» глюкозу. Он является унифицированным.

2. Указания к занятию:

1. Подготовьте рабочее место.

2. Внимательно изучите инструкцию.

3. Осмыслите ход выполнения лабораторной работы.

4. Соблюдайте меры предосторожности в работе с реактивами, с кровью и мочой, с приборами.

5. При работе с пипетками используйте резиновую грушу с переходником.

6. Работайте в перчатках.

7. Используйте дезсредство: 3% раствор хлорамина.

3. Практическая часть.

1. Приготовление 3% раствора ТХУ их 30% раствора ТХУ массой 200 г.

(10 мл 30% раствора ТХУ на 100 мл раствора).

2. Лабораторная работа № 1. Определение концентрации глюкозы в биологических жидкостях ортотолуидиновым методом.

ПРИНЦИП: глюкоза при нагревании с ортотолуидином в растворе уксусной кислоты дает зеленое окрашивание, интенсивность которого пропорциональна концентрации глюкозы.

Реактивы: 1) ортотолуидиновый реактив; 2) ТХУ, 3% раствор; 3) стандартный раствор глюкозы, 5,55 ммоль/л.

Ход определения.

Отмерить, мл	Опытная проба (в центрифужную пробирку)	Контрольная проба	Стандартная проба
1. ТХУ, 3% раствор 2. Сыворотка крови или кровь из пальца 3. Стандартный раствор глюкозы, 5,55 ммоль/л	0,9 0,1 -	0,5 - -	0,9 - 0,1
Перемешивают. Опытную пробу центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 минут.
Центрифугат Ортотолуидиновый реак-тив	0,5 4,5	- 4,5	0,5 4,5

Пробирку с опытной пробой помещают в кипящую водяную баню на 8 минут.затем пробирку охлаждают под водопроводной водой до комнатной температуры. Экстинцию измеряют на спектрофотометре при длине волны 595 нм. Стандартную пробу фотометрируют также как и опытную.

Примечание: вместо контрольной пробы можно использовать дистиллированную воду.

РАСЧЕТ:

Соп – концентрация глюкозы в крови.

Сст – концентрация глюкозы в стандарте.

Еоп – экстинция пробы.

Ест – экстинция стандарта.

Коэффициент пересчета мг% в единицах СИ (ммоль/л) равен 0,0555.

4. Определение глюкозы в моче производят так же, как и в крови.