Журнал неврологии и психиатрии / 2004 / NEV_2004_09_08

В современной психиатрии многими исследователями разделяется мнение, что в патогенезе эндогенных психозов, в том числе шизоаффективных и аффективных, значительное место принадлежит изменениям функции иммунной системы (иммунный компонент патогенеза). Но полученные в этом отношении данные крайне противоречивы. Отчасти это может быть объяснено неадекватностью условий постановки эксперимента. Так, при изучении функциональной активности лимфоцитов крови большинство исследователей, как правило, используют класси- ческий вариант эксперимента, при котором клетки выделяют путем градиентного центрифугирования в системе фиколл — верографин и культивируют в среде

© Коллектив авторов, 2004

с добавлением фетальной телячьей сыворотки. Однако при таком способе выделения из взвеси удаляются все клеточные элементы белой крови, кроме лимфоцитов, что приводит к нарушению связи между отдельными клеточными популяциями и как следствие к изменению функциональной активности лимфоцитов. Кроме того, лишая лимфоциты естественного окружения и культивируя их в среде с добавлением фетальной сыворотки, трудно учесть действие на их функциональную активность факторов сыворотки крови больного, которые, как известно, могут зна- чительно изменять многие биологические параметры [3—8]. Для более полного понимания мexaнизмoв изменения пролиферативной активности лимфоцитов больных важно подобрать такие условия эксперимента, при которых можно было бы оценить вклад

в эти механизмы как процессов взаимодействия всех клеточных элементов белой крови, так и влияния циркулирующих в сыворотке крови больного субстанций.

Целью настоящей работы было изучение пролиферативной активности лимфоцитов крови больных шизоаффективными и аффективными психозами с использованием 4 разных вариантов постановки эксперимента в отношении условий культивирования лимфоцитов: 1) культивирование лимфоцитов, выделенных путем градиентного центрифугирования в системе фиколл — верографин, в присутствии фетальной телячьей сыворотки, что позволяет оценить функциональную активность лимфоцитов по их способности отвечать на стимуляцию митогеном (ФФС); 2) культивирование лимфоцитов, выделенных путем градиентного центрифугирования, в присутствии аутологичной сыворотки, что дает возможность оценить вклад сывороточных факторов (антител, продуктов метаболизма лекарств, используемых для лечения больных, и т.д.) в функциональную активность лимфоцитов (ФАС); 3) культивирование лимфоцитов, выделенных из плазмы при ее механическом отстаивании, в присутствии фетальной сыворотки, что позволяет оценить функциональную активность всех клеточных элементов крови, участвующих в развитии пролиферативного ответа (ЛФС); 4) культивирование лимфоцитов, выделенных при отстаивании плазмы, в присутствии аутосыворотки, позволяющее оценить не только участие процессов взаимодействия всех иммунокомпетентных клеток, но и влияние сывороточных факторов на взаимодействие клеток в иммунном ответе (ЛАС).

Материал и методы

Обследовали 18 больных шизоаффективным и 24 больных аффективным психозом (по МКБ-10 F25 и F32.0 соответственно) в возрасте от 20 до 40 лет. Длительность заболевания колебалась от нескольких месяцев до 24 лет в обеих группах, длительность манифестного этапа варьировала от 2 мес до 17 лет.

Все больные обследовались в активной стадии болезни, т.е. во время психотического приступа.

Контрольную группу составили 35 психических и соматически здоровых мужчин и женщин в возрасте, соответствующем возрасту обследованных больных.

Лимфоциты из крови либо выделяли путем градиентного центрифугирования в системе фиколл — верографин [1], либо собирали из отстоявшейся плазмы [2]. И в том и в другом случае клетки отмывали и доводили их концентрацию до 106/мл. Далее в течение 3 сут их культивировали в 96-луночных платах в среде ¹199 с добавлением гентамицина (80 мкг/мл), Hepes (2 ммоль) и либо фетальной, либо аутологичной сыворотки (10%). Для стимуляции лимфоцитов в лунки добавляли фитогемагглютинин (ФГА) в концентрациях 1,25; 2,5 и 5,0 мкг/мл; в контрольные лунки вместо митогена вводили культуральную среду. Пролиферативную активность оценивали по включению 3Н-тимидина (удельная радиоактивность 2 мкКи/мл), который добавляли в культуру за 4 ч до окончания срока культивирования. Уровень пролиферации выражали в виде индекса стимуляции, рассчитываемого по формуле: I=A (имп/мин)/В (имп/ мин), где А и В— количество импульсов в минуту соответственно в культурах с добавлением митогена и в контроле.

Результаты

Было установлено, что для больных шизоаффективным и аффективным психозом характерно снижение функциональной активности лимфоцитов по сравнению с контрольной группой обследованных. При этом изменение пролиферативной активности лимфоцитов больных находится в зависимости как от клинических особенностей болезни, так и от метода выделения клеток и используемой для культивирования сыворотки крови.

Âгруппе больных с шизоаффективным психозом уровень пролиферативной активности лимфоцитов, выделенных на градиенте и культивируемых с фетальной сывороткой, был снижен по сравнению с контролем, однако это снижение не достигало степени достоверности и можно говорить лишь о тенденции к снижению этого показателя у больных в данных условиях. Применение вместо фетальной аутологичной сыворотки не вызывало дальнейшего изменения пролиферативной активности лимфоидных клеток больных. Как видно из табл. 1, уровень пролиферации лимфоцитов в экспериментах с фетальной и с аутологичной сывороткой практически не различается. Использование в культуре лимфоцитов, полученных при отстаивании плазмы, дало несколько иные результаты. При культивировании клеток с фетальной сывороткой наблюдалось резкое снижение уровня пролиферации. При этом снижение функциональной активности лимфоцитов отмечалось по отношению не только к соответствующему контролю, но и к уровню пролиферации клеток, выделенных с помощью градиента и помещенных в аналогичные условия. Добавление аутологичной сыворотки вместо фетальной приводило к повышению ответа лимфоцитов на введение в культуру ФГА — функциональная активность лимфоцитов при этом достигала значений, характерных для клеток, выделенных путем градиентного центрифугирования.

Âсвязи с полученными данными возникает вопрос и о возможной связи выявленных изменений с природой заболевания. С целью его выяснения были проведены сопоставления лабораторных данных с клиническими параметрами болезни. Результаты этих исследований представлены в табл. 2 и 3.

При анализе зависимости иммунологических показателей от клинических особенностей использовали подход, предусматривающий деление больных по длительности заболевания и длительности манифестного этапа более или менее определенного срока. Поскольку анализ проводили при разных заболеваниях, которые по продолжительности указанных периодов различались, то в основу деления больных аффективным и шизоаффективным психозом были положены разные сроки изучаемых этапов.

Âгруппе больных шизоаффективным психозом пролиферативная активность лимфоцитов находилась

âобратной зависимости от продолжительности заболевания, т.е. бульшим срокам болезни соответствовала, как правило, меньшая функциональная активность Т-клеток. Аналогичная, хотя и не столь четкая, зависимость была выявлена между функциональной активностью лимфоцитов и длительностью манифестного этапа.

Анализ результатов, полученных при обследовании больных с аффективным психозом, показал, что пролиферативная активность лимфоцитов в данной группе была снижена при всех экспериментальных условиях, но достоверным снижение оказалось только при использовании клеток, полученных из плазмы крови путем седиментации и культивируемых фетальной сывороткой. При этом необходимо подчеркнуть, что в противоположность данным, полученным при изучении лимфоцитов больных шизоаффективным психозом, использование вместо фетальной аутологичной сыворотки при культивировании лимфоцитов, выделенных на градиенте, приводило к даль-

нейшему снижению ответа лимфоцитов на стимуляцию ФГА (р<0,05). Этот факт, несомненно, говорит о наличии в сыворотке крови больных с аффективным психозом фактора, ингибирующего пролиферативную активность лимфоцитов. Анализ данных с учетом клинических параметров болезни показал, что в отличие от группы шизоаффективного психоза самые низкие показатели пролиферативной активности имели место у больных с наименьшей длительностью заболевания — менее 5 лет (см. табл. 3). Еще более выраженной эта тенденция оказалась у больных с продолжительностью аффективного психоза не более 2 лет. В этой подгруппе практически при всех эксперимен-

тальных условиях и при всех дозах митогена ответ Т- лимфоцитов на стимуляцию ФГА был достоверно ниже контроля. С увеличением продолжительности заболевания пролиферативная активность клеток постепенно возрастала, но все же не достигала контроля.

Полученные результаты свидетельствуют о том, что пролиферативная активность лимфоцитов в группе больных шизоаффективным психозом отражает, по всей видимости, тяжесть болезненного процесса, а в группе аффективного психоза — его остроту. Аналогичная зависимость выявлена и при анализе функциональной активности лимфоцитов с учетом длительности манифестного этапа.

Обсуждение

Таким образом, использование нескольких вариантов постановки эксперимента дало нам возможность выявить особенности функционирования иммунной системы в разных группах больных. На основании полученных данных можно высказать предположение, что в основе нарушений иммунной системы при шизоаффективных и аффективных психозах лежат раз-

ные механизмы. Если при шизоаффективном психозе определяющим является нарушение кооперативного взаимодействия клеток в иммунном ответе, то при аффективном можно говорить как о снижении способности самих лимфоцитов в полной мере отвечать на митогенную стимуляцию, так и о нарушении влияния других клеточных элементов крови на развитие иммунного ответа. Особо необходимо отметить действие сыворотки крови на функциональную активность лимфоцитов. Как было показано, сыворотка крови больных шизоаффективным и больных аффективным психозом оказывает прямо противоположное влияние на уровень пролиферации T-клеток. Если при аффективном психозе сыворотка содержит факторы, способные редуцировать реакцию лимфоцитов на стимуляцию ФГА, то при шизоаффективном психозе в сыворотке, по-видимому, имеются вещества, способные защитить клетки от ингибирующего действия окружающей среды. К сожалению, проведенные эксперименты не позволяют сделать определенного заключения относительно природы указанных факторов. Для этого требуется проведение дополнительных исследований.

ЛИТЕРАТУРА

1.Андросова Л.В., Секирина Т.П. Изменение функциональной активности Т-лимфоцитов под влиянием стеллазина. Журн невропатол и психиат 1991; 91: 8: 87—89.

2.Коляскина Г.И., Лосева Т.М., Пивоварова А.И. Особенности Т-

лимфоцитов при шизофрении. Иммунология 1980; 5: 71—75.

3.Пивоварова А.И. Изучение влияния сыворотки крови больных шизофренией на синтез ДНК в культурах лимфоцитов, стимулированных ФГА. Журн невропатол и психиат 1977; 77: 9: 1357— 1360.

4.Kowalski J., Blada P., Kucia K. et al. In vitro immunomodulatory effects of holoperidol and perazine in schizophrenia. Wrld J Biol Psychiat 2000; 1: 190—196.

52

5.Leykin I., Mayer R., Shinitzky M. Short and long-term immunosupressive effects of clozapine and haloperidol. Immunopharmacology 1977; 37: 1: 75—86.

6.Lin A., Kenis G., Bignotti S. et al.The inflamatory response system in treatment-resistant schizophrenia: increased serum interleukin-6. Schizophren Res 1998; 32: 9—15.

7.Muller N., Riedel M., Schwarz M. et al. Immunomodulatory effects of neuroleptics to the cytokine system and the cellular immune system in schizophrenia. In: Current Update in Psychoimmunology. G. Wieselman (ed.). Wien 1997; 57—67.

8.Yovel G., Sirota P., Mazeh D. et al. Higher natural killer cell activity in schizophrenic patients: the impact of serum factors, medication, and smoking. Brain Behav Immun 2000; 14: 3: 153—169.

Поступила 18.02.04

ЖУРНАЛ НЕВРОЛОГИИ И ПСИХИАТРИИ, 9, 2004