Журнал неврологии и психиатрии / 2007 / NEV_2007_01_08

ных данных. Возраст их составлял от 1 года до 89 лет, длительность заболевания была разной. Все больные принимали препараты вальпроевой кислоты и топирамат в режиме монотерапии. В исследование вклю- чали больных с адекватным ответом на лечение, т.е. при урежении приступов минимум на 50%.

Препараты вальпроевой кислоты принимали 127 пациентов, топирамат — 41. В исследовании были использованы только оригинальные препараты вальпроевой кислоты в лекарственных формах депакин («Sanofi-Aventis») и конвулекс («Gerot Pharmazeutika») в суточных дозах от 250 до 2000 мг/сут, топирамат — топамакс («Янсен-Силлаг») в дозах от 25 до 500 мг/сут. Образцы крови больных эпилепсией были предоставлены окружными неврологическими отделениями больниц Москвы, отделом психоневрологии и эпилептологии Московского НИИ педиатрии и детской хирургии и областной городской больницей г. Люберец.

Для получения ДНК необходимой степени чистоты использовали фенол/хлороформный метод выделения ее из крови (Grimberg, 1989). Полимеразную цепную реакцию проводили на амплификаторе Терцик («ДНК-технология», Россия) с использованием следующих праймеров: прямой — CTA CCG AGT TTT CTT CCC ACC и обратный — AAT TAA ACC ATC CAA TGA AAT AGA GC. Реакционная смесь для амплификации объемом 25 мкл содержала 0,67 М трисHCl рН 8,8; 16,7 мМ (NH4)2SO4; 0,01% твин-20; 0,2 мМ каждого dNTP; 0,1 мкг геномной ДНК; 20 пмоль каждого праймера; 2 ед Taq полимеразы; MgCl2 в концентрации 1,5 мМ. Амплификация состояла из предварительной денатурации при 95°С — 4 мин, 36 циклов, состоящих из денатурации при 94°С — 20 c, отжига праймеров при 62°С — 20 с, синтеза продукта при 72°С — 10 с; затем следовала стадия заключи- тельного синтеза при 72°С — 5 мин. Получившийся фрагмент длиной 375 пар оснований (п.о.) расщепляли ферментом BstHH I при температуре 50°С. В слу- чае аллеля G (Ala) образовывались фрагменты 200 и 175 п.о. Препараты ДНК разделяли посредством электрофореза в 4% агарозном геле. В качестве маркера использовали ДНК плазмиды pBR322, расщепленную рестриктазами Mva I или Alu I, а также ДНК плазмиды pUC19, расщепленную рестриктазой Msp I. Гели красили бромистым этидием и визуализировали в ультрафиолете.

Скорость метаболизма вальпроата оценивали по пиковой концентрации свободного вальпроата в крови, измеренной методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, а также косвенно по дозе препарата, которая оказывает эффективное действие на пациента.

Для статистического анализа результатов использовали следующие критерии и компьютерные программы: R (A Language and Environment for Statistical Computing), критерии Стьюдента, критерий Манна— Уитни, χ2.

Результаты

×àñòóты аллелей полиморфного маркера Ala54Thr гена FABP2 составили Ala(G) — 0,66, Thr(A) — 0,34, частóты генотипов: Ala/Ala — 0,42, Thr/Thr — 0,9,

Ala/Thr — 0,49. Распределение частот генотипов под- чинялось закону Харди—Вайнберга (χ2=1,94<3,84).

По результатам исследования в выборке из 127 пациентов было установлено, что средние эффективные дозы вальпроевой кислоты для носителей гомозиготных генотипов AA и GG составляют 846±144 и 1131±56 мг соответственно (среднее значение ± стандартная ошибка). Для носителей гетерозиготного генотипа AG средняя эффективная доза составила 924±61 мг/сут. Статистически достоверного различия средних между гомозиготным генотипом AA и гетерозиготным AG не выявлено.С учетом редкой встре- чаемости генотипа AA при статистической обработке данных генотипы AA и AG были объединены в одну группу (A+), средняя доза при этом составила 910±56 мг/сут (рис. 1).

Средние эффективные дозы вальпроевой кислоты для носителей генотипов (A+) и гомозиготного GG (A–) статистически достоверно различались (p=0,007).

Âгруппе сравнения средние эффективные дозы топирамата составили 142±35, 204±34 и 177±27 мг для носителей генотипов AA, AG и GG соответственно. Между каждой из групп статистически достоверных различий в средних значениях выявлено не было.

Для части обследованных пациентов — 77 была определена пиковая концентрация несвязанной (сво-

бодной) вальпроевой кислоты в крови (Cmax). При исследовании связи Cmax с генотипами достоверных различий не установлено.

Концентрации вальпроатов в крови были соотнесены с индивидуальными суточными дозами (doz).

У 41 пациента (группа I) выявлена линейная зависимость концентрации от дозы препарата (рис. 2).

Ко второй группе были отнесены 36 пациентов,

óкоторых концентрация препарата не зависела от дозы. В группе I средние дозы препарата для разных генотипов достоверно различались (рис. 3). Зависимость

средней Cmax от генотипа была близка к достоверной: р=0,056 (рис. 4).

Âгруппе II взаимосвязи генотипов и средних doz или средних Cmax выявленно не было (рис. 5 и 6).

При анализе зависимости средних doz и средних Cmax от генотипа основной вклад вносят пациенты группы I. В ней средняя суточная доза вальпроевой кислоты для генотипов A+ и A– составила 855±100 и 1263±108 мг соответственно. Для подгруппы A+ эффективны меньшие дозы вальпроата и соответственно меньшие концентрации его в крови. Для носителей генотипа A– эффективны бóльшие дозы препарата и бóльшие его концентрации в крови (см. таблицу).

В качестве условной разделительной границы доз вальпроевой кислоты было выбрано значение 850 мг/сут, так как именно при этом эмпирически подобранном

значении N(GG)/N(AG) по левую и по правую сторону границы наглядно различаются 10 и 0,6 в данном случае. Из таблицы видно, что генотип А– в группе I концентрируется в области средних и высоких суточ- ных доз вальпроевой кислоты и только однажды встре- чается в области низких доз.

Обсуждение

Среди всех известных полиморфизмов гена FABP2 только точечная замена 163 G>A во втором экзоне связана с изменением первичной структуры белка (Ala54Thr), что дает основание считать этот полиморфизм связанным с функциональными свойствами белка FABP2 [16]. Частота аллеля Thr54 варьирует от 0,14 у американских индейцев (Oji-Cree) до 0,43 у

ЛИТЕРАТУРА

1.Гусев Е.И., Авакян Г.Н., Бадалян О.Л. и др. Тактика ведения и дополнительные возможности терапии больных эпилепсией: пособие для врачей. М 2005.

2. Середенин С. Б. Лекции по фармакогенетике. М: Медицинское информационное агентство 2004.

3. Agren J.,Valve R.,Vidgren H. et al. Postprandial lipemic response is modified by the polymorphism at codon 54 of the fatty acid-binding protein 2. Gene Arterioscler Thromb Vasc Biol 1998; 18: 1606— 1610.

4. Agren J., Vidgren H.M., Valve R.S. et al. Postprandial responses of individual fatty acids in subjects homozygous for the threonineor alanine-encoding allele in codon 54 of the intestinal fatty acid binding protein 2 gene. Am J Clin Nutr 2001; 73: 31—35.

5.Albala C., Santos J.L., Cifuentes M. et al. Intestinal FABP2 A54T polymorphism: association with insulin resistance and obesity in women. Obesity Research 2004; 12: 2: 340—345.

6.Baier L.J., Sacchettini J.C., Knowler W.C. et al. An amino acid substitution in the human intestinal fatty acid binding protein is associated with increased fatty acid binding, increased fat oxidation, and insulin resistance. J Clin Invest 1995; 95: 1281—1287.

7. Baier L.J., Sacchettinit J.C., William C. An amino acid substitution in the human intestinal fatty acid binding protein is associated with increased fatty acid binding, increased fat oxidation, and insulin resistance. J Clin Investigation 1995; 95: 1281—1287.

8. Berthier M.-T., Couillard C., Prudhomme D. et al. Effects of the FABP2 A54T mutation on triglyceride metabolism of viscerally obese men. Obesity Research 2001; 9: 11: 668—675.

9. Chiu K.C., Chuang L.M., Yoon C. The A54T polymorphism at the intestinal fatty acid binding protein 2 is associated with insulin resistance in glucose tolerant Caucasians. BMC Genet 2001; 2: 7—13.

10. Dworatzek P.D.N.,Hegele R.A.,Wolever T.M.S. Postprandial lipemia in subjects with the threonine 54 variant of the fatty acid-binding protein 2 gene is dependent on the type of fat. Am J Clin Nutr 2004;

79: 1110—1117.

11.Kim C.H., Yun S.K., Byun D.W. et al. Codon 54 polymorphism of the fatty acid binding protein 2 gene is associated with increased fat oxidation and hyperinsulinemia but not with intestinal fatty acid absorption in Korean. Men Metabolism 2001; 50: 473—476.

12. Mitchell B.D., Kammerer C.M., O’Connell P. et al. Evidence for linkage of postchallenge insulin levels with intestinal fatty acid-binding protein (FABP-2) in Mexican. Am Diabetes 1995; 44: 1046—1053.

13. Sipilainen R.,Uusitupa M.,Heikkinen S. et al. Variants of the human intestinal fatty acid binding protein 2 gene in obese subjects. J Clin Endocrinol Metab 1997; 82: 2629—2632.

14. Velkov T.,Chuang S.,Wielens J. et al. The interaction of lipophilic drugs with intestinal fatty acid-binding protein. J Biol Chem 2005; 6: 280: 18: 17769—17776.

15. Weiss E.P., Brown M.D., Shuldiner A.R., Hagberg J.M. Fatty acid binding protein 2 gene variants and insulin resistance: gene and geneenvironmental interaction effects. Physiol Genomics 2002; 10: 145— 157.

16.Weiss E.P., Brown M.D., Shuldiner A.R. et al. Fatty acid binding pro- tein-2 gene variants and insulin resistance: gene and gene-environ- ment interaction effects. Physiol Genomics 2002; 10: 145—157.