Chastnaya_mikrobiologia

биологическая диагностика. Неспецифическая профилактика, лечение. Биологические свойства возбудителя клещевого боррелиоза. Микробиологическая диагностика, профилактика и лечение заболевания.

Микробиологическая диагностика бруцеллеза

Возбудители бруцеллеза (Brucella melitensis, Brucella abortus, Brucella suis и Brucella canis) высоко контагиозны и работа с ними проводится в специализированных лабораториях особо опасных инфекций. Постановку серологических реакций и аллергических проб для диагностики бруцеллеза производят соответственно в обычных микробиологических лабораториях и больничных условиях.

Главным резервуаром бруцелл являются домашние сельскохозяйственные животные, а также другие виды животных, от которых человек заражается преимущественно контактным или контактно-бытовым, реже алиментарным путем. Клинические проявления бруцеллеза многообразны, поражаются лимфатическая, сосудистая, гепато-лиенальная системы и особенно

0,02 мл, добавляют по 0,03 мл бруцеллезного диагностикума, кроме последней дозы, в которую

31

вносят 0,03 мл ФР (контроль сыворотки). Контролем диагностикума является смесь из 0,03 мл антигена и 0,03 мл ФР. Все капли перемешивают стеклянной палочкой или бактериологической петлей и после легкого покачивания стекла наблюдают за появлением мелкозернистого окрашенного агглютината. Отсутствие агглютинации во всех пробах сыворотки оценивается как отрицательная реакция, наличие агглютинации в 1-й пробе (0,08 мл сыворотки) - сомнительная, во 2-й (0,04 мл) - слабоположительная, в 3-й или 4-й пробах (0,02-0,01 мл) - положительная, во всех пробах - резко положительная реакция. Поскольку реакция агглютинации Хеддльсона иногда бывает положительной у здоровых людей за счет нормальных антител, она обязательно подтверждается реакцией Райта.

РИФ, РНГА, РСК и особенно ИФА более чувствительны, чем реакция агглютинации. Для ранней диагностики бруцеллеза особую ценность имеет ИФА, позволяющий выявить в сыворотке больных антибруцеллезные антитела класса IgM, которые в отличие от IgG появляются в ранние сроки болезни, свидетельствуя о свежем инфицировании.

Аллергический метод – постановка внутрикожной аллергической пробы Бюрне с 15-20 дня заболевания. Учет реакции проводится через 24-48 часов, положительной считается реакция в случае появления на месте введения аллергена (бруцеллина) болезненности, гиперемии и инфильтрации кожи диаметром 3 см и более. Положительная аллергическая реакция на бруцеллин сохраняется в течение длительного времени после перенесенного бруцеллеза, а также после прививки.

Бактериологический метод - посев крови для выделения гемокультуры в 2 флакона с 50 мл печеночного или асцитического бульона (рН 7,1-7,2) или МПБ с добавлением 1 % глюкозы, 2 % глицерина и антифаговой сыворотки (для инактивации бруцеллезного бактериофага) в первые дни болезни при наличии лихорадки. При отрицательных результатах исследование повторяют, т.к. бактериемия наблюдается в течение 1 года и более.

Один флакон выращивают в обычных аэробных условиях, другой — в герметично закрытом сосуде с 10 % углекислого газа (или СО2-инкубаторе) при температуре 370 С до 1 месяца, делая пересевы на скошенный печеночный агар или эритрит-агар каждые 4-5 дней. На жидких средах бруцеллы растут с образованием легкого помутнения и небольшого слизистого осадка, на плотных средах в виде округлых, диаметром до 5 мм, серовато-белых, блестящих, прозрачных с янтарным оттенком в проходящем свете колоний. Типичные колонии пересевают на скошенный агар и идентифицируют выделенную культуру до уровня вида.

Выполняются также посевы исследуемого материала в желток свежего куриного яйца или в желточный мешок куриного эмбриона с последующей их инкубацией в течение 5 дней при 370 С и пересевом содержимого желточного мешка на плотные и жидкие питательные среды для выделения чистой культуры бруцелл.

Бруцеллы идентифицируют на основании изучения морфологических (рис. 13 - грамотрицательные коккобактерии), культуральных, биохимических (они не ферментируют уг-

Рис. 13. Возбудитель бруцеллеза (Brucella melitensis). Окраска по Граму. Мелкие грамотрицательные коккобактерии.

леводы, не свертывают молоко и не разжижают желатину, выделяют сероводород), антигенных свойств (постановка РА с моноспецифическими сыворотками против антигенов А, М, R), чув-

32

ствительности к специфическому бактериофагу и бактериостатическому действию анилиновых красителей (табл. 8).

Таблица 8. Дифференциация основных видов бруцелл

. Обозначения: «-« - отрицательная; «+» - положительная; «±» - непостоянная реакции.

Самостоятельная работа студентов

2.Серологический метод.

Реакция Хеддльсона (РA на стекле) – самостоятельная работа. Ингредиенты: бруцеллёзный диагностикум, сыворотка больного, физиологический раствор. Реакция ставится на стекле по схеме.. Реакция считается положительной при появлении хлопьев в каплях, в которые внесено 0,02 или 0,01 мл сыворотки больного,

Реакция Pайта (развернутая РА) с сывороткой крови больного с подозрением на бруцеллез и бруцеллёзным диагностикумом (демонстрация). Диагностический титр I:100.

реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) с сывороткой крови больного с подозрением на бруцеллез и эритроцитарным бруцеллезным диагностикумом (демонстрация). Диагностический титр 1:100.

Реакция связывания комплемента (РСК) с сывороткой крови больного с подозрением на бруцеллез.

Иммуноферментный анализ (ИФА) с сывороткой крови больного с подозрением на бруцеллез

2.Специфическая профилактика и лечение бруцеллёза:

живая вакцина для профилактики,

убитая вакцина для лечения,

сыворотки бруцеллезные, агглютини рующие диагностические

диагностикум бруцеллезный для постановки реакций Райта и Хеддльсона с целью выявления антител в крови больных,

бруцеллин- аллерген для постановки внутрикожных аллергических проб

Микробиологическая диагностика лептоспироза

Возбудитель лептоспироза – Leptospira interrogans вызывает нетрасмиссивную природноочаговую зоонозную инфекцию, протекающую в виде почечной (безжелтушной) или почечнопеченочной (желтушной) формах. Описано более 200 сероваров патогенных лептоспир, объединенных в 23 серогруппы. Наиболее распространены серовары pomona, grippotyphosa, canicola, icterohaemorrhagiae, hebdomadis. Источниками инфекции являются грызуны, дикие и сельскохозяйственные животные. Заражение человека происходит при купании и использова-

33

нии воды из открытых водоемов, зараженных мочой больных животных, при контакте с инфицированным сырьем, употреблении зараженных лептоспирами продуктов. Методы микробиологической диагностики лептоспироза отражены в схеме 8.

Бактериоскопический метод. Обычно проводится микроскопическое исследование материала с целью обнаружения живых лептоспир с помощью темнопольной микроскопии в препаратах «раздавленной капли». При микроскопии с использованием большого увеличения лептоспиры выглядят в виде тонких спиралевидных микроорганизмов с концами, напоминающими буквы С или S. Лептоспиры обладают поступательным, вращательным, сгибательным движением.

Схема 8. Микробиологическая диагностика лептоспироза

Материал: кровь, моча, спинно-мозговая жидкость, секционный материал

Бактериологический метод. Для выделения лептоспир применяют жидкие питательные среды (Ферворта-Вольфа, Терских и др.), в состав которых входит инактивированная кроличья сыворотка. Лептоспиры растут медленно (до 10 дней и более), не изменяя внешнего вида среды. Наличие лептоспир в среде подтверждается с помощью метода темнопольной микроскопии.

Биопроба. Ставится на морских свинках или золотистых хомячках. При наличии в материале лептоспиры серовара icterohaemorrhagiae у морских свинок через 5-10 дней появляется желтушная окраска склер и слизистых оболочек и через 48 часов после этого животные погибают. В моче и крови при микроскопии обнаруживают лептоспиры. Хомячки погибают в течение первых дней или месяца. С целью обнаружения лептоспир у зараженных животных проводится темнопольная микроскопия, а также посевы крови и ткани почек для выделения культуры лептоспир.

Серологический метод - постановка реакции микроагглютинации и лизиса лептоспир (РМАЛ - диагностический титр 1:10), РИФ, ИФА, РНГА с целью выявления специфических антител в крови больных.

Генодиагностика – разработана ПЦР для определения специфических фрагментов ДНК лептоспир.

Самостоятельная работа студентов 1. Микроскопическое исследование морфологии возбудителя лептоспироза -

Leptospira interrogans методом темнопольной микроскопии. Обратить внимание на характер-

34

ную морфологию (тонкие спиралевидные микроорганизмы с концами в виде букв С или S, обладающие поступательным, вращательным, сгибательным движением).

2.Знакомство с питательными средами для выращивания лептоспир (среды Фервор-

та-Вольфа, Терских)

3.Учет РНГА и ИФА, поставленных с сыворотками крови больных с подозрением на лептоспироз.

4.Знакомоство с биопрепаратами для профилактики и лечения лептоспироза.

лептоспирозная вакцина - для профилактики заболевания, содержит культуры убитых нагреванием лептоспир.

Лептоспирозный иммуноглобулин, полученный из сыворотки крови животных, иммунизированных убитыми лептоспирами.

Микробиологическая диагностика боррелиозов (возвратные тифы, болезнь Лайма)

Возбудителями боррелиозов являются Borrelia recurrentis (возбудитель эпидемического вшивого возвратного тифа, в настоящее время в России не регистрируется), Borrelia dutton, Borrelia persica, Borrelia sogdianum и др. (возбудители африканского и среднеазиатского эн-

демических клещевых возвратных тифов), а также Borrelia burgdorferi, Borrelia garini, Borrelia afzellii – возбудители клещевого боррелиоза (болезни Лайма). Возвратные тифы характеризуются развитием возвратной лихорадки, болезнь Лайма в начальной стадии – поражением кожи в виде мигрирующей эритемы, позднее – поражением сердца, опорно-двигательного аппарата, нервной системы и кожи. Исследуемым материалом является кровь. Для диагностики боррелиозов применяются следующие методы.

Микроскопический метод – исследование мазков крови и толстой кровяной капли, окрашенных по Романовскому-Гимза. Боррелии – извитые лилового цвета микроорганизмы, образующие до 9 крупных неравномерных завитков. При болезни Лайма микроскопический метод не применяется, т.к. в периферической крови возбудитель не обнаруживается.

Бактериологический метод. Боррелии удается культивировать на специальной среде (BSK-11), однако в реальной практике метод не используется.

Серологическое исследование. Является основным методом лабораторной диагностики при болезни Лайма. Для определения антител к Borrelia burgdoferi применяется метод иммунофлюоресценции, ИФА.

Самостоятельная работа студентов

1.Морфология боррелий – возбудителей возвратного тифа (Borrelia recurrentis). Ма-

зок из крови больного возвратным тифом (демонстрация). Окраска по Романовскому - Гимза. Среди эритроцитов заметны тонкие лиловые удлиненные спирохеты, образующие до 9 крупных неравномерных завитков.

2.Учет ИФА, поставленного с сывороткой крови больного с подозрением на болезнь Лайма для выявления специфических антител.

Микробиологическая диагностика листериоза

Источником инфекции являются различные виды диких и домашних животных. Человек заражается алиментарным, аэрогенным путями, при контакте с больными животными, а также половым путем при листерийных уретритах. Листериоз протекает в виде глазо-железистой или ангинозно-железистой, нервной (менингит, менингоэнцефалит, энцефалит) и смешанной форм. Листериоз у беременных женщин сопровождается инфицированием плода, приводя либо к его гибели, либо к развитию у него различных уродств.

Материалом для исследования является кровь, смывы из зева, спинномозговая жидкость, околоплодные воды, плацента. Применяются следующие методы диагностики.

Бактериоскопический метод. В мазках из исследуемого материала, окрашенных по методу Грама, листерии выглядят в виде мелких коротких (0,5-2x0,4-0,5 мкм) грамположительных палочек. Метод имеет ориентировочное значение. В качестве экспресс-диагностики используют прямой метод иммунофлюоресценции.

35

Бактериологический метод – посев на специальные питательные среды (кровяной агар, сердечно-мозговой бульон и др.) и на среды, содержащие селективные добавки (NaCl в высокой концентрации, антибиотики полимиксин и цефтазидим, другие селективные добавки). Посевы культивируют при температуре 350 С в течение 5-7 дней. На кровяном агаре листерии вызывают β-гемолиз. Идентификацию культуры до уровня вида осуществляют на основании изучения морфологических, тинкториальных, культуральных, биохимических и антигенных свойств (по Н- и О- антигену). Выполняется также фаготипирование.

Г ен од и а гн о ст ик а . Д ля постановки предварительного диагноза применяют ПЦР с целью обнаружения ДНК возбудителя.

Серологические методы диагностики листериоза в реальной практике не применяется, т.к. они мало информативны.

Педиатрические аспекты темы

1. При рассмотрении вопросов по бруцеллёзу обратить внимание на следующее:

дети заражаются бруцеллёзом в 60,8% случаев алиментарным путем при употреблении сырого молока и молочных продуктов, реже (в 30,5%), отмечается контактный путь заражения. Внутриутробная передача бруцеллеза и заражение грудных детей через молоко больной матери бывают крайне редко;

заболеваемость бруцеллёзом появляется в весенние месяцы (март, апрель, май) в период массового окота скота;

при серодиагностике бруцеллеза у детей диагностический титр в реакциях Райта и Хеддльсона ниже, чем у взрослых -1:100;

профилактика бруцеллёза заключается в том, что дети и подростки не допускаются ко всем видам работ с инфицированными животными, а также с сырьем, получаемым от них. Дети, больные бруцеллёзом и дети из очагов инфекции берутся под непрерывное диспансерное наблюдение;

в очагах бруцеллёза беременные женщины обязательно обследуются на бруцеллез. Больные бруцеллезом беременные женщины находятся под диспансерным наблюдением;

специфическая профилактика бруцеллёза у детей проводится с 7- летнего возраста живой бруцеллёзной вакциной.

После изучения темы студент должен знать: таксономию, морфологические и биологические свойства возбудителей бактериальных зоонозных инфекций (бруцеллеза, лептоспироза, боррелиозов, листериоза), а также патогенез, эпидемиологию, основные клинические проявления и иммунитет; основные методы диагностики, специфической профилактики и лечения этих инфекций.

Изучив тему, студент должен уметь: уметь ставить серологические реакции Райта и Хеддльсона при бруцеллезе, оценивать результаты микробиологических анализов при бруцеллезе, лептоспирозе, боррелиозе, листериозе.

Тема 5. МИКРОБИОЛОГИЯ БАКТЕРИАЛЬНЫХ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ: САЛЬМОНЕЛЛЫ - ВОЗБУДИТЕЛИ БРЮШНОГО ТИФА, ПАРАТИФОВ И ПИЩЕВЫХ ТОКСИКОИНФЕКЦИЙ

Цель занятия: изучение биологических свойств основных возбудителей бактериальных кишечных инфекций – брюшного тифа, паратифов, пищевых токсикоинфекций, методов их лабораторной диагностики, профилактики и лечения.

Перечень конкретных учебно-целевых вопросов

1.Семейство Enterobacteriaceae. Таксономия. Общая характеристика, их эволюция. Морфологические, культуральные, биохимические свойства. Антигенная структура. Ферменты. Токсины. Бактерионосительство.

2.С аль мон еллы . Классификация по Кауфману-Уайту. Патогенность для человека и животных.

3.Сальмонеллы – возбудители брюшного тифа и паратифов А, В. Биологические свойства. Антигенная структура. Патогенез заболеваний. Патогенетические основы микробиологи-

36

ческой диагностики. Особенности иммунитета. Бактерионосительство. Специфическая профилактика и этиотропная терапия.

4.Сальмонеллы – возбудители сальмонеллезов. Патогенез. Роль энтеро- и эндотоксинов в возникновении диарейного синдрома. Микробиологическая диагностика. Этиотропная терапия.

5.Сальмонеллы – возбудители госпитальных инфекций.

Микробиологическая диагностика брюшного тифа и паратифов Ознакомиться со схемой лабораторной диагностики брюшного тифа и паратифов

Возбудителями брюшного тифа и паратифов (А, В) являются бактерии рода Salmonella, в состав которого входят два вида: Salmonella enterica с 6 подвидами (включая возбудители брюшного тифа, паратифов, сальмонеллезов – всего более 2400 сероваров) и Salmonella bongori (редко встречающиеся сальмонеллы). Возбудитель брюшного тифа обозначается как Salmonella серовара Typhi

(Salmonella enterica spp. enterica ser. typhi, прежнее название Salmonella typhi), паратифа А — Salmonella серовара Paratyphi A, паратифа В — Salmonella серовара Paratyphi В.

Методы микробиологической диагностики брюшного тифа и паратифов представлены в схеме 9.

Выбор материала и метода микробиологической диагностики этих заболеваний зависит от стадии патогенеза. На первой неделе заболевания и в течение всего лихорадочного периода возбудитель можно выделить из крови (гемокультура), с конца второй и на третьей неделе — из мочи (уринокультура) и испражнений (копрокультура). Высокий процент высеваемости возбудителя отмечается при исследовании костного мозга (выделение миелокультуры). Удается обнаружить сальмонеллы в скарификате розеол (розеоло-культура), ликворе, содержимом двенадцатиперстной кишки, секционном материале. У реконвалесцентов исследуют испражнения и желчь (выделение биликультуры). Начиная со второй недели заболевания проводят серологическое исследование. Микроскопическое исследование материала от больного не проводится, т.к. все энтеробактерии (как патогенные, так и непатогенные, например, E.coli) по морфологическим свойствам идентичны (рис. 14).

Бактериологическое исследование является основным лабораторным методом диагностики брюшного тифа и паратифов.

Ранним и надежным методом бактериологической диагностики является выделение возбудителей из крови (гемокультура). Взятую в асептических условиях кровь (15-20 мл) засевают на 10% желчный бульон или среду Рапопорт (10% желчный бульон, 1 % маннита или 2 % глюкозы, 1 % индикатора Андреде; в среду помещен поплавок для улавливания газа) в соотношении крови и среды 1:10 для накопления сальмонелл. Посевы инкубируют при 370 С 18 —24 ч. При наличии сальмонелл маннит или глюкоза расщепляется с образованием кислоты и среда приобретает красный цвет; появление в поплавке газа свидетельствует о газообразовании - характерном признаке паратифозных бактерий.

Схема 9. Микробиологическая диагностика брюшного тифа и паратифов.

37

Материал для исследования: кровь, моча, испражнения, пунктат костного мозга, скарификат розеол, ликвор, желчь, секционный материал и др.

Бактериологический метод

1 день. Посев крови на среду Раппопорт, испражнений, мочи и др. на среду Плоскирева, Эндо, висмут-сульфит агар ВСА) и среды накопления (селенитовую, магниевую, тетратионатную, Кауфмана, Мюллера). Культивирование сутки при 370 С.

2 день. Учет характера роста на среде Раппопорт (при наличии сальмонелл среда окрашивается в красный цвет в результате расщепления маннита или глюкозы; паратифозные бактерии вызывают газообразование). На средах Плоскирева, МакКонки или Эндо - бесцветные (лактозоотрицательные) колонии, на ВСА – черные (колонии сальмонелл паратифа А на ВСА окрашены в зеленый цвет, так как не образуют сероводород). Из типичных колоний готовят мазок, окрашивают по Граму и после микроскопии остаток колонии пересевают на среду Ресселя или Олькеницкого. Пересев на те же среды материал со сред обогащения при отсутствии на них типичных колоний.

3-й день. Учет характера роста на средах Ресселя или Олькеницкого, проверка чистоты выделенной культуры, пересев в среды «пестрого» ряда для изучения биохимических свойств, постановка ОРА со смесью сальмонеллезных О-сывороток, а затем с монорецепторными О- и Н-сыворотками с целью антигенной идентификации сальмонелл брюшного тифа и паратифов. Постановка развернутой РА, посев для определения фаголизабильности и фаговара.

4-й день. Учет изменений в средах «пестрого» ряда, результатов развернутой РА, фаголизабельности и фаговара. Формулировка ответа.

Серологический метод

Постановка реакции Видаля (развернутая РА) с ОН, О- брюшнотифозным, паратифозным А и паратифозным В диагностикумами, РНГА с эритроцитарными групповыми (А, В, С, Д, Е) и монорецепторными диагностикумами, ИФА с парными сыворотками крови больного в динамике заболевания с целью определения соответствующих антител и нарастания их титра в крови больного. Определение антител к Vi-антигену S.typhi в сыворотке крови брюшнотифозных бактерионосителей с помощью РНГА

Рис. 14. а - кишечная палочка (E.coli ув. Х1350), б - возбудитель брюшного тифа (S.typhi, ув. Х630) в мазках из чистой культуры. Окраска по Граму. Грамотрицательные беспорядочно расположенные палочки средних размеров.

38

Копрокультуру выделяют путем посева фекалий на среду Плоскирева, Эндо, висмут-сульфит агар и среды накопления (селенитовую, магниевую, тетратионатную, Кауфмана, Мюллера) с последующей 18 —24-часовой инкубацией при 37 °С.

На 2-й день на средах Плоскирева, МакКонки или Эндо вырастают бесцветные (лактозоотрицательные) колонии, а на висмут-сульфит-агаре – черные. Колонии сальмонелл паратифа А окрашены в зеленый цвет, так как не образуют сероводород. Из типичных колоний готовят мазок, окрашивают по Граму и после микроскопии остаток колонии пересевают на среду Ресселя или Олькеницкого. При отсутствии типичных колоний на те же среды засевают материал со среды обогащения.

На 3-й день исследования учитывают характер роста на среде Ресселя или Олькеницкого (окрашивание столбика среды Ресселя в синий цвет, среды Олькеницкого в желтый в результате ферментации глюкозы в анаэробных условиях; скошенная часть среды не изменена – отсутствие ферментации лактозы), готовят мазок для проверки чистоты выделенной культуры, выполняют пересев в среды «пестрого» ряда для изучения биохимических свойств (см. табл. 10), после чего ставят ориентировочную, а потом развернутую РА. Ориентировочную РА ставят со смесью О- сывороток, включающей агглютинины к О-антигенам 2, 4, 7, 8, 9, 3-10. При отсутствии РА с этой смесью используют смесь монорецепторных О-сывороток к редким группам сальмонелл (антитела к антигенам 11, 13, 15, 19, 23 и т.д.) При получении положительных результатов культуру испытывают отдельно с каждой из О-сывороток, входящих в состав смеси. После этого культуру агглютинируют с Н-сыворотками 1 фазы (a, b, i, c, d, g, m) а потом 2 фазы (1,2; 1,5), устанавливая антигенную формулу выделенной сальмонеллы в соответствии со схемой Кауфмана-Уайта (таблица 9). Эта схема разработана на основании изучения у сальмонелл О и Н антигенов и применяется с целью антигенной идентификации патогенных сальмонелл.

Таблица 9. Антигенная структура сальмонелл (сокращенная схема Кауфмана-Уайта)

На 4-й день от начала исследования учитывают изменения сред «пестрого» ряда (см. табл. 10), результаты развернутой РА и выдают ответ. Выделенные культуры подвергают фаготипированию, что позволяет установить источник и пути заражения.

Мочу, дуоденальное содержимое, соскоб розеол, секционный материал с целью выделения тифо-паратифозных бактерий засевают на плотные среды (Эндо, Мак-Конки и т.п. в чашке Петри), а также в среды накопления. При наличии характерного роста идентификация проводится по вышеописанной схеме.

Таблица 10. Биохимические свойства возбудителей брюшного тифа и паратифов

39

Обозначения: (+) - наличие свойства, (-) - отсутствие свойства, К – образование кислоты, КГ – образование кислоты и газа.

Аналогично проводится исследование испражнений у переболевших брюшным тифом и паратифом лиц, а также у работников детских учреждений, питания и водоснабжения с целью выявления бактерионосителей.

Серологическое исследование. Для серологической диагностики брюшного тифа и паратифов ставят реакцию Видаля (развернутая РА) с целью определения соответствующих антител в крови больного. Антитела к возбудителям брюшного тифа, паратифов А и В обнаруживаются в сыворотке крови больных с 8— 10-го дня заболевания. Исследуемую сыворотку крови разводят двукратно в 6 параллельных рядах пробирок от 1:100 до 1: 1600 в объеме 1 мл, куда вносят по 2 капли ОН- и О- брюшнотифозного, паратифозного А и паратифозного В диагностикумов. О- диагностикумы получают кипячением или обработкой спиртом взвеси соответствующих культур, ОН-диагностикумы - обработкой формалином. Для контроля антигена диагностикумы вносятся в той же дозе в 1 мл физиологического раствора, а для контроля сыворотки используют сыворотку в разведении 1:100 без добавления диагностикумов.

О-антитела имеют диагностическое значение, они появляются в крови на второй неделе заболевания и исчезают к его концу, а Н-агглютинины нарастают к концу заболевания. и диагностической ценности не имеют. Н-антитела могут обнаруживаться также у переболевших и вакцинированных. Ряд брюшнотифозных вакцин вызывает также выработку Vi – и О антител. Диагностический титр О-антител в реакции Видаля у неиммунизированных лиц 1 :100, а при отсутствии типичной клинической картины - 1 :200. Однако титр антител у больных может быть ниже диагностического в связи с ранним назначением антибиотиков или наличием у больного вторичного иммунодефицита. Таким образом, отрицательная реакция Видаля не исключает тифопаратифозное заболевание. С другой стороны, повышенные титры О-антител могут быть обусловлены прививками. Поэтому при подозрении на брюшной тиф или паратифы целесообразно исследовать сыворотку крови как можно раньше (до появления антител), а затем в динамике (с интервалом 7-12 дней) для выявления нарастания титра антител более чем в 4 раза. Если сыворотка крови больного агглютинирует одновременно два или три вида диагностикумов, учитывают титр агглютинации: специфическая агглютинация происходит обычно с более высокими, а групповая — с более низкими разведениями сыворотки.

Более чувствительны РНГА с эритроцитарными групповыми (А, В, С, Д, Е) и монорецепторными диагностикумами, а также ИФА, которые ставят с парными сыворотками в динамике заболевания.

Vi-антитела чаще обнаруживаются у бактерионосителей сальмонелл брюшного тифа, т.к. Viантиген способствует длительной персистенции возбудителя в организме. При обследовании лиц, подозрительных на носительство брюшнотифозных палочек, применяется РНГА с эритроцитарным Vi-диагностикумом для определения соответствующих антител и их принадлежности к классу IgG.

Самостоятельная работа студентов Изучить основные этапы бактериологического метода диагностики брюшного тифа. 1. Бактериологический метод – выделение гемокультуры:

Учесть характер роста бактерий на среде Раппопорт (желчный МПБ с глюкозой, индикатором Андреде и поплавком для улавливания газа), висмут-сульфит агаре, среде Левина (МПА с лактозой, с эозином и метиленовым синим), среде Олькеницкого (МПА с глюкозой, лактозой, сахарозой, мочевиной и индикатором феноловым красным). Разложение глюкозы сопровождается пожелтением столбика, скошенная часть остается без изменений в случае отсутствия разложения лактозы. При разложении лактозы наблюдается пожелтение скошенной части среды. При образовании сероводорода на границе скошенной части и столбика наблюдается почернение. Среда позволяет также учесть газообразование. При разложении мочевины среда окрашивается в красный цвет. Используется также накопительная селенитовая среда;

40