Chastnaya_mikrobiologia

их во влажной камере на 16-18 часов в термостат. Учет реакции осуществляют по диаметру зоны гемолиза вокруг отверстий, заполненных сывороткой. В контроле гемолиз отсутствует.

Самостоятельная работа студентов

1. Выделение вирусов на культуре ткани. Изучение особенностей цитопатического действия(ЦЦД) вирусов при различных вирусных инфекциях:

синцитиальный тип (вирус кори, парагриппа) - образование гигантских многоядерных клеток и синцития в клетках культуры ткани с формированием цитоплазматических включений (демонстрация);

аденовирусный тип - образование внутриядерных включений, агрегация клеток (демонстрация);

деструктивный тип (пикорнавирусы) - дегенерация клеток с отторжением их от поверхности стекла (демонстрация);

герпетический тип - образование гигантских клеток с внутриядерными включениями (вирусы герпеса, цитомегаловирусы – демонстрация)).

2. Индикация вирусов в клетках культуры ткани:

гемадсорбция - адсорбция на клетках эритроцитов, добавленных к культуре ткани, инфицированной вирусом парагриппа (демонстрация);

подавление метаболизма клеток вирусом полиомиелита (цветная проба – демонстрация). Клетки культуры ткани в процессе их культивирования вырабатывают кислые продукты метаболизма, при этом цвет среды, в которую добавлен индикатор метиловый красный, изменяется с красного на желтый. Клетки, инфицированные вирусом, разрушаются и цвет среды не меняется, оставаясь красным;

интерференция вирусов - отсутствие репродукции вируса в культуре ткани, инфицированной другим вирусом, не обладающим цитопатическим эффектом (демонстрация).

3. Выделение и индикация вирусов на РКЭ.

обнаружение вирусов на хорион-аллантоисной оболочке РКЭ, зараженного вирусом герпеса (микроскопия мазков-отпечатков, окрашенных по Романовскому-Гимза – демонстрация));

выявление вируса гриппа в аллантоисной жидкости зараженного РКЭ с помощью реакции гемагглютинации (РГА) с эритроцитами кур. Куриные эмбрионы вскрывают, алланто-

исную жидкость отсасывают пастеровской пипеткой, титруя ее в лунках пластикового планшета в разведениях от 1:10 до 1:512 в объеме 0,5 мл. В каждую лунку добавляют 0,5 мл 1% взвеси эритроцитов кур, выдерживают при комнатной температуре в течение 40 минут, после чего производят учет. Контролями служат незараженная аллантоисная жидкость и физиологический раствор. Наличие гемагглютинации в опыте при отсутствии ее в контролях указывает на наличие вируса в исследуемой жидкости.

4. Идентификация вирусов:

выявление типа вируса гриппа в хорион-аллантоисной жидкости РКЭ с помощью РТГА. (нейтрализация гемагглютинирующей активности различных типов вируса гриппа А, В,

Ссоответствующими противогриппозными диагностическими сыворотками). Отсутствие гемагглютинации с одной из противогриппозных сывороток указывает на тип вируса гриппа;

выявление вирусов с помощью реакции преципитации в геле (демонстрация). В одну из лунок в агаровом геле вносят исследуемый материал от больного, а в другую – диагностическую сыворотку, содержащую соответствующие антитела. В месте встречи вируса и антитела формируется преципитат в виде белых линий;

реакция нейтрализации (демонстрация). Производят заражение РКЭ, культур клеток или экспериментальных животных (в зависимости от свойств вируса) смесью вируссодержащего материала (материал от больного, хорион-аллантоисная жидкость РКЭ, надосадочная жидкость зараженной культуры ткани) и соответствующих диагностических противовирусных сывороток. В качестве контроля используется биологический объект (РКЭ, культура ткани, экспериментальное животное), зараженный только вируссодержащим материалом. Контрольное

101

животное, в организме которого вирус не нейтрализуется антителами сыворотки, погибает. Опытное животное выживает, так как антитела сыворотки нейтрализуют вирус.

5. Серологический метод диагностики вирусных инфекций (выявление антител в сы-

воротке крови больных - ретроспективная диагностика)

РСК при аденовирусной инфекции. Ставится с целью определения антител и их титра в сыворотке крови больных на 2 и 8 день болезни.

Цветная проба при полиомиелите (демонстрация). Сущность реакции состоит в изменении цвета среды, на которой культивируется культура ткани, в результате выделения кислых продуктов метаболизма, что приводит к изменению исходного красного цвета индикатора среды (феноловый красный) на желтый. У зараженных вирусом клеток выделения метаболитов не происходит, поэтому изменения цвета среды не происходит. Схема опыта: к разным разведениям исследуемой сыворотки добавлено 0,1 мл вакцинного штамма вируса полиомиелита, смесь внесена в пробирки с культурой ткани. После 8-10-дневной инкубации в термостате проводят учет реакции по наибольшему разведению сыворотки, при котором наблюдается изменение цвета среды с красного на желтый.

РНГА (демонстрация) - определение антител к вирусу гепатита В.

PТГA (демонстрация) - определение антител в сыворотке крови больного клещевым энцефалитом. Реакция основана на способности некоторых вирусов склеивать эритроциты птиц, морских свинок, I (0) группы крови человека. К известному гемагглютинирующему вирусу добавляют исследуемую сыворотку крови. Если в исследуемой крови содержатся антитела, они нейтрализуют гемагглютинирующую активность вируса и агглютинации вирусов не наступает. Схема опыта: к разным разведениям сыворотки крови больного добавляют антиген вируса клещевого энцефалита и взвесь эритроцитов. После экспозиции в течение 40 мин проводят учет реакции по наибольшему разведению сыворотки крови больного, вызвавшему торможение агглютинации эритроцитов.

ИФА (демонстрация) – определение антител к ВИЧ.

После изучения темы студент должен знать: теоретические основы общей вирусологии

(репродукция, генетика вирусов, особенности вирусных инфекций и противовирусного иммунитета), методы культивирования, индикации и идентификации вирусов, серологический метод диагностики вирусных инфекций.

Изучив тему, студент должен уметь: выполнять основные методы индикации и идентификации вирусов, трактовать результаты серологических исследований при вирусных инфекциях.

Тема 14. ВИРУСЫ - ВОЗБУДИТЕЛИ ГРИППА И ОРВИ. ПАРАМИКСОВИРУСЫ - ВОЗБУДИТЕЛИ КОРИ И ЭПИДЕМИЧЕСКОГО ПАРОТИТА. ВИРУСЫ, ПОРАЖАЮЩИЕ КОЖУ И СЛИЗИСТЫЕ ОБОЛОЧКИ (ПОКСВИРУСЫ, ГЕРПЕСВИРУСЫ). КОРОНАВИРУСЫ

Цель занятия: разбор биологических свойств возбудителей гриппа, ОРВИ, кори и эпидемического паротита, покс- и герпесвирусов, освоение методов лабораторной диагностики, профилактики и лечения указанных инфекций.

Перечень конкретных учебно-целевых вопросов

1.Характеристика и классификация вирусов – возбудителей острых респираторных вирусных инфекций (ОРВИ).

2.Аденовирусы (семейство Adenoviridae). Общая характеристика и классификация. Структура вириона, антигены, методы культивирования. Резистентность к действию физических и химических факторов. Патогенез заболеваний. Персистенция аденовирусов. Онкогенные серотипы аденовирусов. Лабораторная диагностика.

3.Ортомиксовирусы (семейство Orthomyxoviridae). Общая характеристика и классификация. Вирусы гриппа человека, их классификация и биологические свойства (структура, химический состав вириона, особенности генома, характеристика антигенов, виды и механизмы антигенной изменчивости,, методы культивирования, чувствительность к физическим и химическим факторам; гемагглютинин, нейраминидаза, их локализация, строение, классификация, функ-

102

циональная активность). Роль персистенции вирусов гриппа в организме человека и животных в сохранении эпидемиологически значимых штаммов. Особенности иммунитета, лабораторная диагностика, специфическая профилактика и лечение гриппа. Вирус парагриппа.

4.Вирус эпидемического паротита, его роль в патологии человека, особенности иммунитета; методы специфической профилактики эпидемического паротита.

5.Вирус кори и его биологические свойства. Патогенез заболевания. Иммунитет и специфическая профилактика кори. Респираторно-синцитиальный вирус. Биологические свойства, классификация. Патогенез заболевания. Иммунитет. Специфическая профилактика.

6.Герпесвирусы (семейство Herpesviridae). Общая характеристика и классификация, структура вириона, антигены, методы культивирования. Резистентность к физическим и химическим факторам. Вирусы герпеса, патогенные для человека, их биологические свойства. Механизмы персистенции герпесвирусов. Лабораторная диагностика, специфическая профилактика и лечение герпетических инфекций.

Вопросы для самостоятельного изучения

1.Поксвирусы (семейство Poxviridae). Общая характеристика и классификация. Вирус натуральной оспы, его структура, антигены, методы культивирования. Чувствительность к действию химических и физических факторов. Патогенетические особенности заболевания. Лабораторная диагностика. Внутриклеточные включения (тельца Гварниери). Специфическая профилактика оспы и ее роль в глобальной ликвидации инфекции. Вирус осповакцины, его происхождение и использование в генной инженерии.

2.Коронавирусы (семейство Coronaviridae). Общая характеристика. Роль в патологии человека. Лабораторная диагностика.

Вирусологическая диагностика острых респираторных вирусных инфекций и гриппа

Грипп – это острое инфекционное заболевание, протекающее с выраженной общей интоксикацией и поражением респираторного тракта, возбудителями которого являются РНКсодержащие вирусы семейства Ortho-myxoviridae (род Influenzavirus, типы А, В и С).

Возбудителями ОРВИ являются разнообразные многочисленные вирусы (более 200), вызывающие у людей катар верхних дыхательных путей с различной степенью интоксикации. Наиболее часто ОРВИ вызывают вирусы парагриппа, аденовирусы, реовирусы, коронавирусы, риновирусы, энтеровирусы,.

Лабораторная диагностика гриппа и ОРВИ состоит из экспресс-методов, выделения вируса, серологического исследования и метода генодиагностики (ПЦР) - схема 19.

Материалами для исследования при гриппе служат смывы из носоглотки, отделяемое слизистой оболочки носа, кровь, спинномозговая жидкость, трупный материал. При ОРВИ, вызванных вирусами парагриппа, РС вирусом, корона-, рео- и аденовирусами, исследуемым материалом являются носоглоточные смывы и отделяемое слизистой оболочки задней стенки глотки, взятое ватным тампоном. Адено-, энтеро- и реовирусы удается обнаружить в крови, моче, фекалиях, трупном материале, а энтеровирусы в спинномозговой жидкости.

Схема 19. Вирусологическая диагностика гриппа и ОРВИ

Материал для исследования: смывы из носоглотки, отделяемое слизистой оболочки носа, кровь, спинномозговая жидкость, трупный материал

Вирусологический метод: заражение РКЭ, культур клеток. Индикация вирусов: РГА, ЦПД, РИФ, Р.гемадсорбции. Идентификация: РТГА, РСК, РН, ИФА, РТГадс

Серологический метод: определение антител в парных сыворотках крови больных гриппом с помощью РСК, РТГА, ИФА, РРГ, РН.

Генодиагностика: ПЦР.

ЭкспрессЭкспресс-диагностика- : РИФнаправлена, РНОГАна, ИФАвыявление– выявлениеисследуемомвирусныхматериалеантигеновантигеновисследуемомвирусов материале

103

изучение цитопатического действия аденовирусов на культуру диплоидных клеток фибробластов эмбриона человека (демонстрация).

идентификация аденовируса в реакции нейтрализации на культуре ткани (демонстра-

ция).

Индикация и идентификация вируса парагриппа по ЦПД при культивировании его на на культуре диплоидных клеток.

2.Экспресс-диагностика - электронная микроскопия, РИФ, ИФА для обнаружения вируса с характерной морфологией или его антигенов в исследуемом материале.

3.Серологический метод:

выявление антител в парных сыворотках крови больного аденовирусной инфекцией на 5 день и на 15 день заболевания с помощи РСК (демонстрация).

Ретроспективная серодиагностика парагриппозной инфекции: РТГА с парными сыворотками больного парагриппом (демонстрация).

4.Изучить биопрепараты для диагностики, профилактики и лечения респираторных вирусных инфекций:

противогриппозные вакцины (табл. 21) – цельновирионные (живые, убитые), сплит (расщепленные – из разрушенных вирусов), субъединичные (обычно из поверхностных антигенов – гемагглютинина и нейраминидазы).

диагностические типоспецифические противогриппозные сыворотка для определения типа выделенного вируса с помощью РТГА и РСК.

донорский противогриппозный гамма-глобулин - готовится из сыворотки многократно имунизированых доноров. Применяется с лечебной и с профилактической целью.

человеческий лейкоцитарный интерферон - белок, полученный из лейкоцитов человека. Предназначен для лечения и профилактики ОРЗ. Применяется интраназально.

оксолин - химиопрепарат, с выраженной противовирусной активностью в отношении вируса гриппа и ряда других вирусов. Применяется интраназально с лечебно-профилактической целью.

ремантадин - химиопрепарат с противовирусной активностью в отношении вируса гриппа А.

Таблица 21. Противогриппозные вакцины, рекомендованные для применения в РФ

диагностика натуральной оспы

Вирус натуральной оспы (Variola virus) относится к семейству Poxviridae, роду Orthopoxvirus, который включает вирусы натуральной оспы, осповакцины, а также вирусы оспы животных (коров, буйволов, верблюдов, овец, обезьян, кроликов и мышей). Этот антропонозный вирус вызывает у человека острую инфекцию с явлениями тяжелой общей интоксикации, лихорадкой и появлением характерной папулезно-пустулезной сыпи на коже и слизистых оболочках. Натуральная оспа является особо-опасной, карантинной инфекцией. В 20 веке оспа была ликвидирована, однако существует угроза применения этого вируса как средства биологического терроризма. Человек может

105

также заразиться вирусом оспы обезьян, при этом клинические проявления сходны с таковыми при натуральной оспе, однако человек, зараженный вирусом оспы обезьян, неопасен для окружающих

Материалом для исследования при натуральной оспе - соскоб с элементов сыпи - макул и папул, содержимое везикул и пустул, корочки оспенных пустул, слюна, носоглоточные смывы, трупный материал, кровь. Исследование на вирус натуральной оспы проводят в специальных лабораториях. Применяются следующие методы лабораторной диагностики.

Экспресс-диагностика - прямое исследование материала от больного с помощью электронной микроскопии, РИФ, РОПГА, РПГ, ИФА.

Сущность РОПГА состоит во взаимодействии антигена, находящегося в исследуемом материале, с бараньими эритроцитами, на поверхности которых фиксированы противооспенные антитела (антительный диагностикум), что приводит к агглютинации эритроцитов.

Вирусологический метод заключается в заражении на ХАО 10-12-дневных РКЭ с последующей их инкубацией в течение 3-5 дней при температуре 350 С. Вирус натуральной оспы образует на ХАО мелкие белые бляшки. Для выделения вируса используют также первичнотрипсинизированные и перевиваемые культуры ткани.

Индикацию и идентификацию оспенных вирусов в РКЭ обычно проводят с помощью РН, а в зараженных клеточных культурах - с помощью РИФ, РОПГА, РПГадс. Дифференциация оспенных вирусов от сходных с ними герпесвирусов основывается на обнаружении в клетках, пораженных герпесвирусами, внутриядерных включений, характерного цитопатического действия при отсутствии феномена гемадсорбции.

Серологический метод - постановка РТГА, РСК, РН на куриных эмбрионах и в культурах клеток с парными сыворотками крови больных с целью констатации нарастания титра антител. Учет РН в культуре ткани проводится по ЦПД и РГадс, а на куриных эмбрионах - по образованию бляшек на ХАО и накоплению гемагглютининов, выявляемых с помощью РГА.

Вирусологическая диагностика герпеса

Герпес относится к распространенным рецидивирующим инфекциям с характерными пузырьковыми высыпаниями на коже и слизистых оболочках. Представители семейства Herpesviridae (табл. 22) способны также вызывать врожденные уродства, поражения различных органов и систем (нервной системы, органов дыхания, печени, слизистой оболочки полости рта и половых органов, глазного яблока), онкологические заболевания. Рецидивы герпеса возникают на фоне снижения антиинфекционной резистентности при простуде, гриппе, ОРВИ, других острых инфекционных заболеваниях и т.д..

Материалом для исследования являются содержимое элементов сыпи, корочки, слюна, спинномозговая жидкость, трупный материал (кусочки головного и спинного мозга, печени, лимфатические узлы), кровь и др. Лабораторная диагностика герпетической инфекции включает экс- пресс-методы, вирусологическое и серологическое исследование (схема 20).

Вирусологический метод – заражение РКЭ на ХАО, культур ткани (почек кролика, фибробластов эмбриона человека или кур, HeLa и др.). При наличии цитомегаловируса в клеточных культурах через 4-7 дней появляются многоядерные гигантские клетки с признаками дегенерации и внутриядерными включениями, на ХАО РКЭ герпесвирусы вызывают появление характерных бляшек. Вирус ветряной оспы или опоясывающего лишая вызывает на 6-13 сутки очаговое ЦПД с появлением в клетках цитоплазматических и внутриядерных включений.

Таблица 22. Герпесвирусы и вызываемые ими заболевания

106

Материал для исследования: содержимое элементов сыпи, корочки, слюна, спинномозговая жидкость, трупный материал (кусочки головного и спинного мозга, печени, лимфатические узлы), кровь и др.

Экспресс-диагностика - электронная микроскопия, РИФ, ИФА - обнаружение вируса герпеса или его антигенов в исследуемом материале

Вирусологический метод – заражение РКЭ на ХАО, культур ткани. Индикация вируса по ЦПД, идентификация с помощью РН на мышах, куриных эмбрионах, в культуре клеток

Биопроба: заражение лабораторных животных. Индикация вируса в мазках-отпечатках с помощью РИФ, выделение - на культуре ткани или на ХАО куриного эмбриона

Серологический метод - выявление нарастания титров антител в парных сыворотках боль-

ных с помощью РН, РСК, ИФА, РНГА, РТГадс

Генодиагностика: ПЦР

Идентификацию ВПГ проводят с помощью РН на мышах, куриных эмбрионах, в культуре клеток.

Серологический метод - выявление нарастания титров антител в парных сыворотках больных с помощью РН, РСК, ИФА (реже РНГА, РТГадс) с дифференциацией антител по классам иммуноглобулинов. Первичная герпетическая инфекция характеризуется появлением антител класса IgM.

Биопроба. С целью выделения вируса герпеса производится заражение лабораторных животных (новорожденных грызунов, белых мышей, кроликов, морских свинок, хомяков, хлопковых крыс - обычно в мозг), которые через несколько дней погибают. Вирус от павших животных можно обнаружить в мазках-отпечатках с помощью РИФ, а также выделить на культуре ткани или на ХАО куриного эмбриона.

Генодиагностика. Разработана и широко применяется ПЦР, позволяющая в течение от 4 до 48 часов определить несколько вирусов герпеса.

Вирусологическая диагностика кори

Вирус кори относится к роду Morbillivirus семейства Paramyxoviridae. Вызывает острую инфекцию с высокой общей интоксикацией, характерной сыпью, типичным поражением слизистых оболочек (пятна Филатова-Коплика) и конъюнктивитом. Вирус от больного можно выделить в течение очень короткого промежутка времени (последние дни инкубационного периода и 1-2 дня после появления сыпи). В современных условиях лабораторное подтверждение кори является обязательным диагностическим мероприятием, особенно в случаях атипичного или

107

осложненного течения кори, при вспышках кори в организованных коллективах и при расследовании причин смерти от кори.

Экспресс-метод (прямая РИФ) направлен на выявление антигена в клетках соскоба кожи или в клетках слизистой оболочки носоглотки.

Вирусологический метод – выделение вируса кори на культуре клеток (L-41, Vero, культуре лимфобластов обезьян мармазетов В-95ф, трансформированных вирусом Эпштейн-Барра), вызывающего образование гигантских многоядерных клеток и синцития с включениями в цитоплазме. При развитии осложнения при кори в виде подострого склерозирующего энцефалита (ПСПЭ), вызывамого дефектным вирусом кори, обычные методы выделения вируса на культуре клеток оказываются неэффективными. Поэтому при ПСПЭ разработан метод совместного культивирования клеток мозга больного, полученных путем прижизненной биопсии, или лимфоцитов пациента с чувстительной культурой клеток. Идентификацию вируса проводят с помощью РН, РИФ, РТГА.

Серологический метод применяется наиболее часто с целью определения нарастания титра антител в парных сыворотках больных с помощью ИФА (с дифференциацией антител по классам иммуноглобулинов M –маркера текущей инфекции и G) или РТГА. Реже применяются РН, РСК, РНГА.

Генодиагностика. Разработаны методы молекулярной гибридизации и ПЦР для выявления специфических фрагментов РНК вируса кори.

Вирусологическая диагностика краснухи.

Вирус краснухи относится к роду Rubivirus семейства Rubiviridae и вызывает у детей инфекцию с пятнисто-папулезной сыпью, катаральным воспалением верхних дыхательных путей, увеличением шейных и затылочных лимфатических узлов. В некоторых случаях возникают тяжелые осложнения (серозный менингит, энцефалит, полиневрит, тромбоцитопения). У взрослых краснуха протекает более тяжело; вирус обладает тератогенным действием и у беременных женщин (особенно в первом триместре) вызывает врожденную краснуху с развитием пороков сердца, органов зрения (катаракта, глаукома и т.д.), органов слуха (глухонемота и т.д.). Лабораторная диагностика проводится только при осложнениях краснухи, при подозрении на инфекцию у беременных женщин и при расследовании причин гибели плода или новорожденного ребенка. Исследованию подвергают слизь из носоглотки, кровь, мочу, кал, органы трупа (селезенка, лимфатических узлы, костный мозг, головной мозг). Применяются следующие методы.

Вирусологический метод - заражение культур клеток (Vero, PK-13 и др.) с последующей идентификацией вируса с помощью РТГА или реакции интерференции (сначала культуру клеток заражают вирусом краснухи, не вызывающим цитопатогенного действия, а затем цитопатогенным вирусом везикулярного стоматита (ВВС); при наличии искомого вируса краснухи возникает интерференция обоих вирусов и цитопатическое действие ВВС не проявляется).

Серологический метод – обнаружение антител класса IgM к вирусу краснухи (показатель свежего инфицирования) в парных сыворотках больных с помощью метода ИФА; применяется также РТГА.

Генодиагностика. Разработана ПЦР для выявления специфических фрагментов РНК вируса краснухи, оправданный для применения при диагностике краснухи у женщин.

Вирусологическая диагностика эпидемического паротита.

Возбудитель эпидемического паротита относится к роду Paramyxoviruses семейства Paramyxoviridae и вызывает преимущественно у детей в возрасте 5-15 лет поражение околоушных слюнных желез, иногда орхит, тиреоидит, панкреатит. Диагностика эпидемического паротита основывается на данных характерной клинической картины, поэтому лабораторная диагностика проводится при наличии осложнений и в сложных диагностических ситуациях для дифференциации эпидемического паротита с другими заболеваниями слюнных желез и других железистых органов. Материалом для исследования являются слюна, спинно-мозговая жидкость или моча. Применяются вирусологический и серологический методы исследования.

108

Вирусологический метод - заражение куриных эмбрионов или культур клеток (почек эмбриона человека, He-La и др.) с последующей идентификацией вируса на основании характерного ЦПД (образование гигантских многоядерных клеток и синцития с включениями в цитоплазме), а также с помощью РТГА, РИФ, РСК.

Серологический метод применяется с целью определения нарастания титра антител в парных сыворотках больных с помощью ИФА (с дифференциацией антител по классам иммуноглобулинов M и G), РСК, РТГА; реже применяется РН.

Генодиагностика. Разработана ПЦР для выявления специфических фрагментов РНК вируса эпидемического паротита.

Самостоятельная работа студентов

1.Индикация и идентификация вируса кори по характеру ЦПД при культивировании вируса на культуре опухолевых клеток.

2.Серологическая диагностика кори. Выявление антител в сыворотке крови больного с помощью РНГА.

3.Изучить биопрепараты для диагностики, профилактики и лечения кори, краснухи, эпидемического паротита:

вакцина коревая культуральная живая сухая отечественная;

живая коревая культуральная сухая вакцина фирмы Пастер Мерье Коннот (Франция);

MMR – живая тривакцина против кори, эпидемического паротита, краснухи фирмы Мерк Шарп Доум (США);

Рудивакс – моновакцина против краснухи фирмы Пастер Мерье Коннот (Франция);

SII - – моновакцина против краснухи института сывороток Индии

Отечественная паротитная культуральная живая сухая вакцина

Педиатрические аспекты темы.

1.Вирус гриппа вызывает у детей, особенно первого года жизни, тяжелую инфекцию со склонностью к осложнению в виде пневмонии.

2.Вследствие слабого иммунного ответа у детей с выраженной клинической картиной гриппа диагностическое значение имеет нарастание титра антител в 2 раза.

После изучения темы студент должен знать: характеристику возбудителей гриппа,

ОРВИ, герпеса, натуральной оспы, кори, эпидемического паротита, а также принципы лабораторной диагностики, профилактики и лечения упомянутых инфекций.

Изучив тему, студент должен уметь: трактовать результаты лабораторных исследований при гриппе, ОРВИ, герпесе, натуральной оспе, кори, эпидемическом паротите.

Тема 15. ПИКОРНАВИРУСЫ. ВИРУСЫ ГЕПАТИТОВ. РОТАВИРУСЫ Цель занятия: разбор биологических свойств пикорнавирусов, вирусов гепатитов,

ротавирусов, освоение методов лабораторной диагностики, профилактики и лечения указанных инфекций.

Перечень конкретных учебно-целевых вопросов

1.Пикорнавирусы (семейство Picornaviridae). Общая характеристика и классификация. Род Enterovirus. Классификация: вирусы полиомиелита, Коксаки, ЕСНО, энтеровирусы 68-71. Характеристика вирионов. Антигены. Культивирование. Патогенность для животных. Резистентность к действию физических и химических факторов. Механизм и пути передачи. Роль энтеровирусов в патологии человека. Патогенез полиомиелита и других энтеровирусных инфекций. Иммунитет. Лабораторная диагностика. Специфическая профилактика и терапия.

2.Род Hepatovirus. Вирус гепатита А – возбудитель инфекционного гепатита. Биологические свойства, классификация. Патогенез заболевания. Подходы к специфической профилактике.

3.Гепаднавирусы (семейство Hepadnaviridae) – HBV. HBV – возбудитель гепатита В. История открытия. Структура вириона. Антигены: HBs, HBc, HBe, HBх, их характеристика. Резистентность к физическим и химическим факторам. Культивирование, механизм и пути передачи возбудителя. Особенности патогенеза заболевания. Персистенция. Иммунитет. Лабораторная

109

диагностика. Проблемы вакцинопрофилактики, лечения и неспецифической профилактики гепатита В.

4.Вирусы гепатитов C, D, G. Общая характеристика, структура вирионов, роль в патологии человека. Механизм передачи. Лабораторная диагностика. Лечение (этиотропное, иммуномодулирующее). Неспецифическая профилактика.

5.Ротавирусы. Классификация, общая характеристика. Морфология. Роль в патологии человека. Лабораторная диагностика.

Вопросы для самостоятельного изучения

1.Калицивирусы (семейство Caliciviridae). Общая характеристика. Вирус гепатита Е.

2.Род Rhinovirus. Общая характеристика. Антигены и классификация. Патогенез риновирусной инфекции. Лабораторная диагностика, специфическая профилактика и лечение.

3.Род Aphtovirus. Вирусы ящура. Биологические свойства.

4.Реовирусы (семейство Reoviridae). Общая характеристика. Классификация. Роль в патологии человека.

Вирусологическая диагностика пикорнавирусных инфекций Энтеровирусные инфекции

К энтеровирусам человека (род Enterovirus, семейство Picornaviridae) относятся вирусы полиомиелита (3 серотипа), Коксаки А (23 серотипа), Коксаки В (6 серотипов), ECHO (31 серотип) и энтеровирусы человека 68-—71-го серотипов. Род Hepatovirus семейства Picornaviridae представлен вирусом гепатита А.

Энтеровирусы вызывают у человека разнообразные поражения, в том числе центральной нервной системы (энцефалит, менингоэнцефалит, полиомиелит, менингит), желудочнокишечного тракта (диарея, гепатит, панкреатит), дыхательных путей (ринит, фарингит, пневмония новорожденных и др.), сердечно-сосудистой системы (миокардит, перикардит). В ряде случаев развиваются герпетическая ангина, экзантема, везикулярный стоматит.

Материалом для исследования при энтеровирусных инфекциях являются фекалии, носоглоточные смывы, кровь, спинно-мозговая жидкость, моча, органы трупа. Применяются следующие методы лабораторной диагностики (схема 21).

Схема 21. Вирусологическая диагностика энтеровирусных инфекций

Материал для исследования: фекалии, носоглоточные смывы, кровь, спинно-мозговая жидкость, моча, органы трупа.

Вирусологический метод: заражение культур клеток, мышей-сосунков. Индикация энтеровирусов по ЦПД и бляшкообразованию под слоем агара или бентонита в культуре клеток, характеру развитию параличей у мышей-сосунков. Идентификация энтеровирусов с помощью РН (в культуре клеток или на мышах-сосунках), РТГА (при наличии у вируса гемагглютинина), РСК, РПГ, РИФ с типоспецифическими сыворотками против соответствующих энтеровирусов.

Серологический метод - РН на культуре ткани или на мышах-сосунках, РСК, РТГА с парными сыворотками больных.

Вирусологический метод. Для выделения энтеровирусов, обладающих ЦПД (вирусы полиомиелита, ЕСНО, Коксаки В, некоторые вирусы Коксаки А), применяются культуры клеток почек обезьян, почек эмбриона человека, амниона человека и др. Вирусы Коксаки А удается выделить только при подкожном, внутрибрюшинном или внутримозговом заражении однодневных мышей-сосунков. Вирусы Коксаки А после инкубационного периода в 2-3 дня вызывают вялые параличи конечностей в результате поражения скелетной мускулатуры с развитием общей миопатии. Вирусы Коксаки В вызывают через 6-8 дней после заражения спастические параличи за счет поражения центральной нервной системы. Характер параличей должен быть подтвержден гистологическими методами.

110