3. Расчет концентрации по величинам удельного или молярного коэффициентов поглощения.

Исходя из определения удельного (Е) и молярного (ε) коэффициентов поглощения, концентрация вещества представляет собой отношение оптической плотности к произведению удельного (молярного) коэффициента поглощения на толщину слоя:

С = (12) С =(13)

Расчет концентрации вещества в индивидуальном препарате (%) проводят по формуле:

% = % =

Г = Г =(14), где

М.м. – молекулярная масса исследуемого вещества.

Значения Еи ε можно найти в методиках НД, справочных руководствах, они также могут быть взяты из научной периодической литературы (журналы «Фармация», «Химико-фармацевтический журнал» и др.) или рассчитаны экспериментально.

Расчет концентрации вещества по удельному показателю поглощения используется в настоящее время крайне редко, только в тех случаях, когда недоступен стандартный образец. Этот способ дает большую погрешность определения, так как измерение оптической плотности испытуемого и стандартных образцов проводится в разное время и на разных приборах, что увеличивает погрешность.

Калибровочный график удобно использовать при проведении серийных анализов. Для каждого прибора строится свой калибровочный график, который необходимо периодически проверять и уточнять. Недостатком данного способа является достаточно большая погрешность, возникающая от приготовления и измерения оптической плотности серии растворов. Точность определения снижает также графическая погрешность от построения калибровочного графика и отсчета по нему. Для уменьшения погрешности рационально проводить расчет по уравнению калибровочного графика, который получают путем математической обработки экспериментальных данных методом наименьших квадратов.

Наиболее точным является расчет по оптической плотности раствора стандартного образца, так как измерение оптической плотности растворов рабочего и стандартного образцов осуществляют в одно и то же время, на одном приборе. Этот способ является в настоящее время наиболее перспективным и включается в НД. Ограничением данного способа является сложность с приобретением стандартных образцов и высокая стоимость некоторых из них.

Ниже приведены методики фотометрических определений в видимой области спектра в фармакопейном анализе некоторых лекарственных препаратов промышленного производства.

1. «Меновазин»

Состав: Ментола 2,5 г

Новокаина 1,0 г

Анестезина 1,0 г

Спирта этилового 70% до 100 мл

Количественное определение ментола и новокаина.

Ментол. 1 мл препарата помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят объем растовра спиртом 95% до метки. 5 мл полученного раствора переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 20 мл того же спирта и доводят объем раствора водой до метки.

В две пробирки помещают по 3 мл 1% раствора п-диметиламинобензальдегида. Затем осторожно по стенке пробирки прибавляют в одну 2 мл испытуемого раствора, в другую – 2 мл спиртового раствора РСО ментола и тщательно перемешивают. Через 20 минут измеряют оптическую плотность обоих растворов на спектрофотометре при длине волны 545 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. Раствором сравнения служит смесь из 3 мл 1% раствора п-диметиламинобензальдегида и 2 мл воды.

Содержание ментола в препарате (Х) в процентах, вычисляют по формуле:

Х = =, где

D₁ – оптическая потность испытуемого раствора;

D₀ – оптическая плотность раствора РСО ментола;

а₀ – количество ментола, взятое для приготовления раствора РСО ментола, г.

Содержание ментола в препарате должно быть от 2,25% до 2,75%.

Приготовление раствора РСО ментола. Около 0,05 г (точная масса навески) ментола рацемического или природного растворяют в спирте 95% в мерной колбе вместимостью 100 мл и доводят объем раствора тем же спиртом до метки (раствор А).

Срок годности раствора 3 мес.

5 мл раствора А переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 20 мл спирта 95% и доводят объем раствора водой до метки.

Срок годности раствора 1 мес.

Новокаин. 2,5 мл препарата переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора водой очищенной до метки.

1 мл полученного раствора переносят в делительную воронку, прибавляют 10 мл буферного раствора с рН 7,5, 1 мл раствора бромтимолового синего, 10 мл хлороформа и встряхивают в течение 2 мин; хлороформное извлечение фильтруют через фильтр с 2 г натрия сульфата безводного, смоченный хлороформом, в мерную колбу вместимостью 50 мл. Извлекают хлороформом еще 2 раза по 10 мл. Хлороформное извлечение собирают в ту же колбу. Затем в колбу прибавляют 10 мл раствора кислоты борной и доводят объем раствора спиртом 95% до метки. Оптическую плотность испытуемого раствора и 0,0005% раствора РСО новокаина измеряют на спектрофотометре при длине волны 425 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм, применяя в качестве раствора сравнения хлороформ.

Содержание С₁₂Н₂₀N₂О₂ · HCl (новокаина) в препарате (Х) в процентах вычисляют по формуле:

Х = =, где

D₁ – оптическая плотность испытуемого раствора;

D₀ – оптическая плотность раствора РСО новокаина;

а₀ – количество новокаина, взятое для приготовления раствора РСО новокаина, г.

Содержание новокаина в препарате должно быть от 0,95% до 1,05%.

Приготовление раствора РСО новокаина. Около 0,025 г (точная масса навески) новокаина растворяют в 2,5 мл спирта 70% и доводят объем раствора водой до метки в мерной колбе вместимостью 100 мл.

Срок годности раствора 6 мес.

1 мл полученного раствора переносят в делительную воронку и далее поступают так же как и при анализе препарата, начиная со слов: «…прибавляют 10 мл буферного раствора…».

2. Таблетки кислоты ацетилсалициловой 0,25 г или 0,5 г

Кислота салициловая свободная. Около 0,5 г (точная навеска) порошка растертых таблеток помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 10 мл спирта 95%, перемешивают 2 мин, прибавляют 2 мл квасцов железоаммониевых раствора кислого 0,2%, доводят водой до метки, перемешивают и фильтруют через бумажный фильтр, отбрасывая первые 10 мл фильтрата.

Полученный раствор фотометрируют на фотоэлектроколориметре типа КФК-2 при длине волны около 540 нм в кювете с толщиной слоя 50 мм, используя в качестве раствора сравнения раствор контрольного опыта. Параллельно определяют оптическую плотность раствора рабочего стандартного образца (РСО) кислоты салициловой.

Содержание кислоты салициловой свободной (Х) в граммах в препарате вычисляют по формуле:

Х = =, где

D – оптическая плотность испытуемого раствора;

D₀ – оптическая плотность раствора РСО кислоты салициловой;

а – масса навески препарата, г;

а₀ – масса навески кислоты салициловой, взятая для приготовления раствора РСО, г.

Р – средняя масса одной таблетки, г.

Содержание С₇Н₆О₃, (кислоты салициловой) свободной в препарате соответственно должно быть не более 0,00062 или 0,00125 г, считая на среднюю массу одной таблетки.

Приготовление раствора РСО кислоты салициловой. Около 0,01 г (точная масса навески) кислоты салициловой растворяют в 70 мл воды при нагревании в мерной колбе вместимостью 100 мл, охлаждают до комнатной температуры и доводят объем раствора водой до метки (раствор А).

Срок годности раствора – 2 суток.

2 мл раствора А переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 10 мл спирта 95%, 2 мл квасцов железоаммониевых раствора кислого 0,2% и доводят объем раствора водой до метки (раствор Б).

Раствор используют свежеприготовленный.

В таблицах 3-6 приведены примеры использования фотометрии в видимой области при анализе объектов различной природы на разных стадиях фармакопейного анализа.