1.2.3.5 Применение фотометрии в видимой области в фармацевтическом анализе

Благодаря простоте аналитических операций, достаточной чувствительности метод нашел широкое применение в фармацевтическом анализе. Фотометрия используется для определения подлинности, доброкачественности и количественной оценки индивидуальных лекарственных веществ, компонентов смесей, а также в анализе лекарственного растительного сырья. Метод применяется для определения биодоступности, фармакокинетики, изучения стабильности и установления сроков годности лекарственных веществ и лекарственных форм на стадии их изучения.

1.2.3.5.1 Фармакопейный анализ

Испытание на подлинность лекарственных веществ осуществляется различными способами:

- определение оптической плотности исследуемого вещества при определенной длине волны (например, оптическая плотность 0,01% раствора тетрациклина в 0,01 М растворе кислоты хлористоводородной должна быть 0,36-0,38 при λ = 380 нм);

- по величине удельного показателя поглощения, рассчитанного по оптической плотности при определенной длине волны (например, для 0,01% раствора цианокобаламина при λ = 550 нм, Е= 61,5-66,5);

- по отношению величины оптических плотностей исследуемого раствора при разных длинах волн (например, для 0,002% раствора цианокобаламина)

= 3,0-3,4

Испытание на доброкачественность. Используются те же характеристики, что и при определении подлинности:

- по величине оптической плотности (например, при анализе таблеток тетрациклина определяют чистоту 0,175% раствора в 0,01 М растворе кислоты хлористоводородной при λ = 430 нм, которая должна быть не более 0,3).

Количественное определение. Принцип количественного определения методом фотометрии сводится к следующему: навеску анализируемого образца растворяют в подходящем растворителе, при необходимости переводят с помощью реагента в окрашенное соединение и измеряют его оптическую плотность при условиях, указанных в методике. Концентрацию анализируемого вещества рассчитывают одним из приведенных способов.

1. Расчет концентраций с помощью калибровочного графика. Готовят серию растворов (5-10) стандартного образца исследуемого вещества с постоянно возрастающей концентрацией, добавляя (по необходимости) реагент для получения окрашенного соединения. У каждого полученного раствора измеряют оптическую плотность при определенном светофильтре или длине волны в указанной кювете относительно раствора сравнения. По полученным данным строят калибровочный график, откладывая на оси абсцисс концентрацию (С г/мл или С %), на оси ординат – значение оптической плотности (D).

Рис. 6. Калибровочный график

Затем измеряют оптическую плотность исследуемого раствора (D_x), откладывают ее значение на оси ординат, проводят горизонтальную линию до пересечения с калибровочным графиком, из точки пересечения опускают перпендикуляр на ось абсцисс. Полученная точка (С_х) соответствует концентрации исследуемого вещества в фотометрируемом объеме. Далее по формуле проводят расчет концентрации вещества в препарате или в лекарственной форме:

Х = (8), где

С_х – количество г вещества, соответствующее по калибровочному графику найденному значению оптической плотности;

Р – вес лекарственной формы, г;

V – объем лекарственной формы, мл;

а – навеска вещества или лекарственной формы, г (мл).

Калибровочный график позволяет также определять диапазон концентраций анализируемого вещества, при котором соблюдается прямопропорциональная зависимость оптической плотности от концентрации (подчинение основному закону светопоглощения Бугера-Ламберта-Бера).

2. Расчет концентрации по оптической плотности раствора стандартного образца. В этом случае готовят один раствор стандартного образца анализируемого вещества (ГСО или РСО) с концентрацией, близкой к концентрации этого вещества в анализируемой пробе. Навески для его приготовления берут на аналитических весах.

Из закона Бугера-Ламберта-Бера следует, что отношения оптических плотностей для одного и того же вещества к соответствующей концентрации равны между собой:

= , отсюда С_х = (9)