Подсчет эритроцитов производят

Подсчет эритроцитов производят спустя 1-2 мин после заполнения каме­ры (когда эритроциты осядут на дно камеры) при малом увеличении микроско­па (объектив 8х, окуляр 10х или 15х) и при затемненном поле зрения (при опу­щенном конденсоре или прикрытой диафрагме). Считать эритроциты необхо­димо в 5-ти больших квадратах, т. е. в 80 маленьких, расположенных по диаго­нали. Подсчету подлежат все эритроциты, лежащие внутри малого квадрата, и те, которые находятся на левой и верхней линиях. Эритроциты, находящиеся на правой и нижней линиях не считают, т. к. они будут сосчитаны в следующем квадрате.

Количество эритроцитов в 1 мкл (мм³) крови высчитывают по следующей формуле:

X = (А х 4000 х В)/Б,

где X — количество форменных элементов в 1 мкл крови; А — количество форменных элементов, сосчитанных в определенном количестве малых квадра­тов (для эритроцитов — в 80); Б — количество сосчитанных малых квадратов (80); В — степень разведения крови (для подсчета эритроцитов — 100 или 200); 4000 — величина, умножая на которую мы получаем количество клеток в 1 мкл (1 мм³), т. к. объем 1 маленького квадрата равен 1/4000 мм.

Для перевода в систему СИ (пересчет на 1 л крови) полученную цифру умножают на 10⁶ или количество целых единиц умножают на 10¹².

Принцип метода подсчета лейкоцитов аналогичен принципу подсчета эритроцитов, суть его состоит в точном отмеривании крови и разведении ее в определенном объеме жидкости с последующим подсчетом клеточных элемен­тов в счетной камере и пересчете полученного результата на 1 мл крови.

Оборудование и реактивы:

1. Смесители или пробирки для подсчета лейкоцитов.

2. 3 %-ный раствор уксусной кислоты, к которому прибавлено несколько капель метил-виолета или метиленовой синьки.

3. Счетная камера.

4. Микроскоп.

Смеситель для лейкоцитов отличается от смесителя для эритроцитов тем, что имеет более широкий просвет капилляра и меньший по величине резервуар. На смесителе нанесены 3 метки: 0,5, 1,0 и 11. Это позволяет развести кровь в 10 либо в 20 раз (чаще разводят в 20 раз).

Ход исследования. При взятии крови для подсчета лейкоцитов предва­рительно удаляют ватным тампоном остатки крови с кожи и, слегка сдавливая палец, выпускают свежую каплю крови. При работе со смесителями кровь на­бирают до метки 0,5, затем разводят 3 %-ным раствором уксусной кислоты до метки 11. Энергично встряхивают в течение 3 мин, после чего сливают 1-2 ка­пли и заполняют счетную камеру. При работе с пробирками для подсчета лей­коцитов наливают 0,4 мл 3 %-ного раствора уксусной кислоты и в нее выпус­кают 0,02 мл крови, отмеренной пипеткой от гемометра Сали. Тщательно встряхивают пробирки, затем в жидкость опускают пипетку и, набрав содер­жимое, заполняют счетную камеру. Так как лейкоцитов гораздо меньше, чем эритроцитов, то для большей точности подсчет производят в 100 больших (не­разграфленных) квадратах. Обычно в одном большом квадрате находится 1-2лейкоцита. Число лейкоцитов в 1 мкл крови рассчитывается аналогично расче­ту числа эритроцитов по формуле:

X = (А х 4000 х В)/Б,

где X — количество лейкоцитов в 1 мкл крови; А — количество лейкоцитов, сосчитанных в 1600 малых квадратах; Б — количество сосчитанных малых квадратов (1600); 4000 — величина, умножая на которую мы получаем количе­ство клеток в 1 мкл.