Методика определения количества гемоглобина в крови

Первую каплю крови снимают стерильной ваткой, а вторую набирают (насасывают) в капилляр Саля с резиновой трубкой до метки. Это следует делать осторожно, чтобы не насосать» крови больше необходимого количества и не набрать пузырьков воздуха.

Как только уровень взятой крови достигнет метки, резиновую трубку зажимают пальцами, вытирают кончик капилляра ваткой, еще раз проверяют уровень крови и опускают капилляр в пробирку Сали, наполненную децинормальным раствором хлористоводородной кислоты до 10-го деления, но только так, чтобы кончик слегка погрузился в кислоту, и начинают осторожно выдувать кровь в пробирку. Последнюю каплю крови выдувают не в хлористоводородную кислоту, а на стенку выше уровня кислоты, последующим наклоном пробирки каплю крови смывают.

Красная жидкость быстро, на глазах, приобретает коричневую окраску различной интенсивности в зависимости от содержания гемоглобина. Капилляр Сали еще раз наполняют путем насасывания жидкости из пробирки, чем достигается полное смывание крови с его стенок, а затем, заметив время, ставят пробирку в штатив.

Гемоглобин определяют колориметрическим методом, т. е. путем сравнения цвета стандартного раствора гемоглобина с цветом образовавшегося в хлористоводородной кислоте хлорида гематина (рис. 10).

Прибор для определения гемоглобина - так называемый гемометр - представляет собой деревянный штатив с тремя гнездами; два боковых гнезда заняты пробирками со стандартными растворами, а в среднее гнездо вставляют градуированную пробирку с исследуемым раствором солянокислого гематина и сравнивают цвета. Если цвет в исследуемой пробирке сразу же окажется светлее, чем в стандартной, набирают еще раз такое же количество крови из пальца, а при подсчете полученный результат делят пополам. Если же исследуемая жидкость темнее стандартной, то через 10 мин приступают к колори-метрированию.

Для этого гемометр берут в левую руку и держат на уровне глаз, а правой в исследуемую жидкость пипеткой добавляют по каплям дистиллированую воду и размешивают стекляной палочкой. Воду прибавляют до тех пор, пока цвет содержимого исследуемой пробирки и боковых стандартов не станет одинаковым. Деления на градуированной пробирке обозначают содержание гемоглобина в исследуемой крови. Уровень жидкости в градуированной пробирке (одинаковой с цветом стандарта) укажет процентное содержание гемоглобина в определяемой крови.

Методика определения соэ

Существуют несколько методов определения СОЭ. Причём, норма СОЭ в этих методах различная и не взаимозаменяема.

Метод Вестергрена: 2 мл венозной крови вместе с 0,5 мл цитрата натрия набирают в цилиндрическую трубку, заполняя её до уровня 200 мм, и помещают вертикально в штатив. Через 1 час измеряют расстояние от верхней границы столбика плазмы до верхней границы столбика эритроцитов. Это расстояние, выраженное в мм/ч и является показателем СОЭ. Метод измерения СОЭ по Вестергрену одобрен Международным комитетом стандартизации гематологических исследований (ICSH) и является эталонным [6].

Метод Винтроба: кровь не разводят, а после добавления антикоагулянта, помещают в трубку длиной 100 мм. Длина трубки и является недостатком этого метода, т.к. при СОЭ более 60 мм/ч результат становится недостоверным из-за закупоривания трубки осевшими эритроцитами. Кроме того, трубка Wintrobe имеет малое сечение, что иногда нарушает воспроизводимость результатов.

В нашей стране используется метод Панченкова Т.П. Специальную стеклянную пипетку (капилляр Панченкова) шириной 1 мм и длиной в 100 мм заполняют наполовину (50 мм) 5% раствором цитрата натрия, который затем выдувают в пробирку. После укола пальца тот же капилляр полностью наполняют кровью (100 мм) и выдувают в пробирку с антикоагулянтом. Набор крови повторяют. Таким образом, в пробирке кровь перемешивается с реактивом в соотношении 4:1. Полученную смесь набирают в капилляр до метки 0 (100 делений), который ставится вертикально в штатив. Через час отмечают число миллиметров отстоявшегося столбика плазмы.

Результаты, получаемые при определении СОЭ по Вестергрену и Панченкову, совпадают, если речь идёт о нормальных значениях. Однако, в случае ускорения СОЭ метод Вестергрена выдаёт более высокие значения.