БИОИНЖЕНЕРИЯ
.pdf
ТИПЫ ПРОМОТОРОВ ЭУКАРИОТ
ПРОМОТОР |
ВАРИАНТ |
РНК |
ОПИСАНИЕ |
ЭКСПРЕССИЯ |
ДОПОЛНИТЕЛЬНАЯ |
|
ИСПОЛЬЗОВАНИЯ |
|
|
|
ИНФОРМАЦИЯ |
|
|
|
|
|
|
Ubc |
Обычная экспрессия |
мРНК |
Промотор для |
конститутивная |
Является повсеместно |
|
|
|
экспрессии в |
|
экспрессируемым |
|
|
|
клетках |
|
|
|
|
|
млекопитающих |
|
|
|
|
|
из гена |
|
|
|
|
|
убиквитина С |
|
|
|
|
|
человека |
|
|
|
|
|
|
|
|
Бета-актин |
Обычная экспрессия |
мРНК |
Промотор для |
конститутивная |
Является повсеместно |
(human beta |
|
|
экспрессии в |
|
экспрессируемым |
actin) |
|
|
клетках |
|
|
|
|
|
млекопитающих |
|
|
|
|
|
из гена бета- |
|
|
|
|
|
актина |
|
|
|
|
|
|
|
|
CAG |
Обычная экспрессия |
мРНК |
Сильный |
конститутивная |
Содержит CMV |
|
|
|
гибридный |
|
энхансер и куриный |
|
|
|
промотор для |
|
бета-актин промотор |
|
|
|
экспрессии в |
|
|
|
|
|
клетках |
|
|
|
|
|
млекопитающих |
|
|
|
|
|
|
|
|
TRE |
Обычная экспрессия |
мРНК |
Тетрациклин |
Активируется |
Содержит |
|
|
|
зависимый |
тетрациклином, |
минимальный участок |
|
|
|
промотор |
либо его |
промотора с низкой |
|
|
|
|
производными |
активностью и |
|
|
|
|
|
несколько |
|
|
|
|
|
тетрациклиновых |
|
|
|
|
|
операторов |
|
|
|
|
|
|
ТИПЫ ПРОМОТОРОВ ЭУКАРИОТ
ПРОМОТОР |
ВАРИАНТ |
РНК |
ОПИСАНИЕ |
ЭКСПРЕССИЯ |
ДОПОЛНИТЕЛЬНАЯ |
|
ИСПОЛЬЗОВАНИЯ |
|
|
|
ИНФОРМАЦИЯ |
|
|
|
|
|
|
UAS |
Обычная экспрессия |
мРНК |
Дрозофилиный |
специфическая |
Требует наличия Gal4 |
|
|
|
промотор, |
|
гена для активации |
|
|
|
содержащий Gal4 |
|
промотора |
|
|
|
связывающие |
|
|
|
|
|
сайты |
|
|
|
|
|
|
|
|
Ac5 |
Обычная экспрессия |
мРНК |
Сильный |
конститутивная |
Обычно используется |
|
|
|
промотор для |
|
для экспрессии генов в |
|
|
|
насекомых из |
|
Дрозофилах |
|
|
|
дрозофилиного |
|
|
|
|
|
гена актин 5с |
|
|
|
|
|
|
|
|
Polyhedrin |
Обычная экспрессия |
мРНК |
Сильный |
конститутивная |
Обычно используется |
|
|
|
промотор для |
|
для экспрессии генов в |
|
|
|
насекомых из |
|
клетках насекомых |
|
|
|
бакуловируса |
|
|
|
|
|
|
|
|
CaMKIIa |
Экспрессия генов |
мРНК |
Промотор от |
специфическая |
Используется для |
|
для оптогенетики |
|
Ca\кальмодулин |
|
экспрессии в нейронах. |
|
|
|
зависимой |
|
Модулируется |
|
|
|
протеин киназы II |
|
кальцием или |
|
|
|
|
|
кальмодулином |
|
|
|
|
|
|
ТИПЫ ПРОМОТОРОВ ЭУКАРИОТ
ПРОМОТОР |
ВАРИАНТ |
РНК |
ОПИСАНИЕ |
ЭКСПРЕССИЯ |
ДОПОЛНИТЕЛЬНАЯ |
|
ИСПОЛЬЗОВАНИЯ |
|
|
|
ИНФОРМАЦИЯ |
|
|
|
|
|
|
Gal1,10 |
Обычная экспрессия |
мРНК |
Промотор |
Индуцируется |
Регулируется GAL4 и |
|
|
|
дрожжей, |
галактозой, |
GAL10 |
|
|
|
работающий в |
ингибируется |
|
|
|
|
обоих |
глюкозой |
|
|
|
|
направлениях |
|
|
|
|
|
|
|
|
TEF1 |
Обычная экспрессия |
мРНК |
Промотор |
конститутивная |
Аналог промотора |
|
|
|
фактора |
|
млекопитающих EF1a |
|
|
|
элонгации |
|
|
|
|
|
транскрипции |
|
|
|
|
|
дрожжей |
|
|
|
|
|
|
|
|
GDS |
Обычная экспрессия |
мРНК |
Сильный |
конститутивная |
Очень сильный |
|
|
|
промотор для |
|
промотор |
|
|
|
экспрессии в |
|
|
|
|
|
клетках дрожжей |
|
|
|
|
|
из гена |
|
|
|
|
|
глицеральдегид 3- |
|
|
|
|
|
фосфат |
|
|
|
|
|
дегидрогиназы |
|
|
|
|
|
|
|
|
ADH1 |
Обычная экспрессия |
мРНК |
Дрожжевой |
Подавляется |
Полная версия |
|
|
|
промотор от |
этанолом |
промотора |
|
|
|
алкоголь |
|
способствует сильной |
|
|
|
дегидрогиназы I |
|
экспрессии. |
|
|
|
|
|
Укороченная версия – |
|
|
|
|
|
слабая и |
|
|
|
|
|
конститутивная |
|
|
|
|
|
|
ТИПЫ ПРОМОТОРОВ ЭУКАРИОТ
ПРОМОТОР |
ВАРИАНТ |
РНК |
ОПИСАНИЕ |
ЭКСПРЕССИЯ |
ДОПОЛНИТЕЛЬНАЯ |
|
ИСПОЛЬЗОВАНИЯ |
|
|
|
ИНФОРМАЦИЯ |
|
|
|
|
|
|
CaMV35S |
Обычная экспрессия |
мРНК |
Сильный |
конститутивная |
Активный у |
|
|
|
промотор клеток |
|
двудольных, менее |
|
|
|
растений из |
|
активный у |
|
|
|
вируса мозаики |
|
однодольных. |
|
|
|
цветной капусты |
|
Некоторая активность |
|
|
|
|
|
наблюдается в клетках |
|
|
|
|
|
животных |
|
|
|
|
|
|
Ubi |
Обычная экспрессия |
мРНК |
Промотор клеток |
конститутивная |
Дает сильную |
|
|
|
растений из гена |
|
экспрессию в клетках |
|
|
|
убиквитина |
|
растений |
|
|
|
кукурузы |
|
|
|
|
|
|
|
|
H1 |
Экспрессия малых |
малые |
Промотор для |
конститутивная |
Лучше экспрессируется |
|
РНК |
РНК |
человеческой РНК |
|
в нервных клетках |
|
|
|
полимеразы III |
|
|
|
|
|
|
|
|
U6 |
Экспрессия малых |
малые |
U6 малый |
конститутивная |
Так же используется U6 |
|
РНК |
РНК |
ядерный |
|
промотор мышей, |
|
|
|
промотор |
|
однако он менее |
|
|
|
|
|
эффективный |
|
|
|
|
|
|
ТИПЫ ПРОМОТОРОВ ПРОКАРИОТ
ПРОМОТОР |
ВАРИАНТ |
ОПИСАНИЕ |
ЭКСПРЕССИЯ |
ДОПОЛНИТЕЛЬНАЯ |
|
ИСПОЛЬЗОВАНИЯ |
|
|
ИНФОРМАЦИЯ |
|
|
|
|
|
T7 |
In vitro транскрипция, |
Промотор |
Конститутивная, |
В транскрипции in vitro |
|
обычная экспрессия |
бактериофага T7 |
однако требует T7 |
используется только если |
|
|
|
РНК полимеразы |
два различных промотора |
|
|
|
|
бактериофага |
|
|
|
|
представлены в гене в |
|
|
|
|
противоположной |
|
|
|
|
ориентации |
|
|
|
|
|
T7lac |
Высокий уровень |
Промотор |
Когда не |
Позволяет проводить |
|
экспрессии генов |
бактериофага T7 |
индуцирован – |
тонкую регуляцию, |
|
|
вместе с lac |
наблюдается |
используя различные |
|
|
оператором |
фоновая |
концентрации активатора |
|
|
|
экспрессия. Может |
|
|
|
|
быть индуцирован |
|
|
|
|
IPTG |
|
|
|
|
|
|
Sp6 |
In vitro транскрипция, |
Промотор |
Конститутивная, |
В транскрипции in vitro |
|
обычная экспрессия |
бактериофага Sp6 |
однако требует SP6 |
используется только если |
|
|
|
РНК полимеразы |
два различных промотора |
|
|
|
|
бактериофага |
|
|
|
|
представлены в гене в |
|
|
|
|
противоположной |
|
|
|
|
ориентации |
|
|
|
|
|
ТИПЫ ПРОМОТОРОВ ПРОКАРИОТ
ПРОМОТОР |
ВАРИАНТ |
ОПИСАНИЕ |
ЭКСПРЕССИЯ |
ДОПОЛНИТЕЛЬНАЯ |
|
ИСПОЛЬЗОВАНИЯ |
|
|
ИНФОРМАЦИЯ |
|
|
|
|
|
araBAD |
Обычная экспрессия |
Промотор |
Индуцируется |
Слабый промотор. |
|
|
метаболического |
арабинозой и |
Подходит для |
|
|
оперона арабинозы |
репрессируется |
экспериментов, где |
|
|
|
глюкозой |
требуется низкая фоновая |
|
|
|
|
активность |
|
|
|
|
|
trp |
Высокий уровень |
Промотор от |
репрессируемый |
Выключается в |
|
экспрессии |
триптофанового |
|
присутствии высокой |
|
|
оперона E.coli |
|
концентрации |
|
|
|
|
триптофана в клетке |
|
|
|
|
|
lac |
Обычная экспрессия |
Промотор от |
Конститутивная в |
Подходит для модуляции |
|
|
лактозного оперона |
отсутствии |
экспрессии различной |
|
|
|
репрессора. |
концентрацией |
|
|
|
Может быть |
индуктора |
|
|
|
индуцирован IPTG |
|
|
|
|
или лактозой |
|
|
|
|
|
|
ТИПЫ ПРОМОТОРОВ ПРОКАРИОТ
ПРОМОТОР |
ВАРИАНТ |
ОПИСАНИЕ |
ЭКСПРЕССИЯ |
ДОПОЛНИТЕЛЬНАЯ |
|
ИСПОЛЬЗОВАНИЯ |
|
|
ИНФОРМАЦИЯ |
|
|
|
|
|
Ptac Обычная экспрессия |
Гибридный |
Конститутивная в |
Содержит |
|
промотор от |
отсутствии |
последовательность -35 |
|
лактазного и |
репрессора. |
от триптофанового |
|
триптофанового |
Может быть |
промотора и -10 от |
|
оперона |
индуцирован IPTG |
лактазного промотора. |
|
|
или лактозой |
Хорош для модуляции |
|
|
|
экспрессии различными |
|
|
|
концентрациями |
|
|
|
активатора |
|
|
|
|
pL Высокий уровень |
Промотор от |
Может |
Часто используется |
экспрессии |
бактериофага |
регулироваться |
вместе с чувствительным |
|
лямбда |
температурой |
к температуре |
|
|
|
репрессором cl857 |
ВЕКТОРЫ ДЛЯ ЭКСПРЕССИИ ЭУКАРИОТИЧЕСКИХ ГЕНОВ
Поскольку плазмиды в природных условиях не существуют в клетках млекопитающих, необходимо придавать плазмидам специфические особенности!
Скорость деления клеток млекопитающих в культуре значительно ниже, чем бактерий (24 часа прости 20 минут), в связи с чем, плазмиды не успевают элиминироваться из клеток.
Для поддержания плазмид в клетках млекопитающих в них кодируется точка начала репликации вирусов – тогда эта генетическая конструкция существует в клетке в виде эписомы!
ТРАНСФЕКЦИЯ КЛЕТОК МЛЕКОПИТАЮЩИХ
Трансфекция – процесс введения нуклеиновой кислоты в клетки человека и животных невирусным методом. Внесение в
клетки бактерий – трансформация!
ТРАНСФЕКЦИЯ КЛЕТОК МЛЕКОПИТАЮЩИХ
Трансфекция путем электропорации