БИОИНЖЕНЕРИЯ

Избранные loxP варианты

Red recombination system

•5`-3` экзонуклеаза

(Exo) (ген exo)

связывает и процессирует двухцепочечные концы ДНК

•Белок, связывающий одноцепочечную ДНК

(Bet) (ген bet)

•Белок-ингибитор экзонуклеазной активности (Gam) (ген gam) обеспечивает защиту от нуклеаз

ДНК-лигазы

ДНК лигаза бактериофага T4 (T4 DNA Ligase)

За одну единицу активности Т4 ДНК лигазы принимали количество фермента, необходимое для 50% сшивки HindIII-фрагментов ДНК фага лямбда за 30 мин при 16°С в 20 мкл реакционной смеси при концентрации ДНК 300 mkg/ml

Катализирует образование фосфодиэфирной связи между 5`- фосфатной и 3`-гидроксильными концевыми группами ДНК (РНК)

Лигирует как липкие, так и тупые концы

Использует в качестве кофактора АТФ в присутствии Mg2+

ДНК-лигазы

Taq ДНК лигаза (Taq DNA Ligase)

За одну единицу активности Taq ДНК лигазы принимали количество фермента, необходимое для 50% сшивки 12-ти мерных липких концов после рестрикции BstEII фага лямбда за 15 мин при 45°С в 50 мкл реакционной смеси

Катализирует образование фосфодиэфирной связи между 5`- фосфатной и 3`-гидроксильными концевыми группами ДНК

Лигирует только липкие концы

Использует в качестве кофактора дифосфопиридиннуклеотид

САЙТ-СПЕЦИФИЧЕСКИЕ НУКЛЕАЗЫ