БИОИНЖЕНЕРИЯ

ДНК-нуклеазы

Дезоксирибонуклеаза I (DNase I)

Одна единица ДНКазы I полностью деградирует 1 микрограмм pBR322 за 10 минут при 37 градусах Цельсия

Расщепляет фосфодиэфирные связи в ДНК вблизи пиримидиновых нуклеотидов, образуя при этом полинуклеотиды

сконцевым-5'-фосфатом и свободной гидроксильной группой на 3'-конце

ДНКаза I действует на одноцепочечную и двухцепочечную ДНК, хроматин, а так же РНК:ДНК дуплексы

Применяется для «удаления» матрицы ДНК после реакции in vitro транскрипции

Применяется для «удаления» геномной ДНК из образцов РНК

Используется для ник-трансляции (nick-translation): ДНКаза+ДНК полимераза 1+меченые нуклеотиды

ДНКаза I, образует концевые 5'- фосфатом

ДНКаза II, образует концевые 3'-фосфатом

ДНК-нуклеазы

Экзонуклеаза III (Exonuclease III)

Одна единица Экзонуклеазы III разрушает до нуклеотидов 1 наномоль ДНК за 30 минут при 37 градусах Цельсия

Катализирует последовательное отщепление нуклеотидов из двухцепочечных ДНК в направлении 3'-5‘

Действует на «тупые» концы, на 3'-конец при выступающем 5'- конце, а так же на ники, формируя одноцепочечные гэпы.

НЕ ДЕЙСТВУЕТ на одноцепочечную ДНК и на выступающий 3'- конец ДНК

Обладает эндонуклеазной активностью по отношению к апуринизированной ДНК, активностью РНКазы H (гидролиз РНК

вРНК- ДНК-гибридах) и 3'-фосфатазной активностью.

ДНК-нуклеазы

Нуклеаза BAL-31 (Nuclease BAL-31)

Одна единица нуклеазы BAL-31 удаляет по 200 пар нуклеотидов с каждого конца линеаризованной двух цепочечной ДНК ΦX174 (40 микрограмм/миллилитр) за 10 минут при 30 градусах Цельсия

Используется для укорачивания концов ДНК с двух сторон

Обладает нуклеазной активностью в отношении ников, гэпов, а так же одноцепочечных регионов в дуплексах ДНК и РНК

ДНК-нуклеазы

Экзонуклеаза T5 (Exonuclease T5)

Одна единица Экзонуклеазы T5 разрушает до нуклеотидов 1 наномоль ДНК за 30 минут при 37 градусах Цельсия

Катализирует последовательное отщепление нуклеотидов из двухцепочечных ДНК в направлении 5'- 3'

Инициирует удаление нуклеотидов с 5'-конца в никах или гэпах как линейной, так и замкнутой двухцепочечной ДНК

НЕ ДЕЙСТВУЕТ на суперскрученную ДНК

Проявляет эндонуклеазную активность в отношении одноцепочечной ДНК

ДНК-нуклеазы

Экзонуклеаза I (Exonuclease I)

Одна единица Экзонуклеазы I разрушает до нуклеотидов 10 наномоль ДНК за 30 минут при 37 градусах Цельсия

Катализирует удаление нуклеотидов в направлении 3'-5‘ одноцепочечной ДНК

Используется для удаления праймеров из реакционной смеси, содержащей двух цепочечную ДНК

ДНК-нуклеазы

Нуклеаза S1 (S1 Nuclease)

Специфически расщепляет молекулы одноцепочечной ДНК и РНК с образованием 5'- фосфорилированных моно – и олигонуклеотидов

Расщепляет бреши и петли двухцепочечной ДНК,

НО! Не узнает мисматчи