БИОИНЖЕНЕРИЯ

MINICIRCLE DNA VECTORS

МЕХАНИЗМ ФОРМИРОВАНИЯ

MINICIRCLE DNA VECTORS

Сборка с использованием перекрывающихся фрагментов

(Long-overlap-based assembly)

Gibson assembly

Сборка по Гисбону, вариант 1

•T4 полимераза обладает 5´→ 3´ полимеразной активность, выраженной 3´→ 5´ экзонуклеазной активностью. НЕ ОБЛАДАЕТ 5´→ 3´ экзонуклеазной активностью.

•Taq ДНК полимераза обладает 5´→ 3´ полимеразной активность и 5´→ 3´ экзонуклеазной активностью. НЕ ОБЛАДАЕТ 3´→ 5´ экзонуклеазной активностью.

•Taq ДНК лигаза соединяет только липкие концы.

Сборка по Гисбону, вариант 2

•Экзонуклеаза III обладает 3´→ 5´ экзонуклеазной активностью,

предпочтительно начиная удалять

нуклеотиды с тупых концов. Не работает с одноцепочечной ДНК!

•Использование АТ, инактивирующих работу ДНК полимеразы при 37 градусах.

Сборка по Гисбону, вариант 3

•Экзонуклеаза T5 обладает 5´→ 3´

экзонуклеазной активностью. Работает с одноцепочечной ДНК.

•Phusion полимераза обладает 5´→ 3´ полимеразной активность и 3´→ 5´

экзонуклеазной активностью. НЕ

ОБЛАДАЕТ 5´→ 3´ экзонуклеазной активностью. Лучшая корректирующая активность, чем у Taq полимеразы