БИОИНЖЕНЕРИЯ
.pdfMINICIRCLE DNA VECTORS
МЕХАНИЗМ ФОРМИРОВАНИЯ
MINICIRCLE DNA VECTORS
Сборка с использованием перекрывающихся фрагментов
(Long-overlap-based assembly)
Gibson assembly
Сборка по Гисбону, вариант 1
•T4 полимераза обладает 5´→ 3´ полимеразной активность, выраженной 3´→ 5´ экзонуклеазной активностью. НЕ ОБЛАДАЕТ 5´→ 3´ экзонуклеазной активностью.
•Taq ДНК полимераза обладает 5´→ 3´ полимеразной активность и 5´→ 3´ экзонуклеазной активностью. НЕ ОБЛАДАЕТ 3´→ 5´ экзонуклеазной активностью.
•Taq ДНК лигаза соединяет только липкие концы.
Сборка по Гисбону, вариант 2
•Экзонуклеаза III обладает 3´→ 5´ экзонуклеазной активностью,
предпочтительно начиная удалять
нуклеотиды с тупых концов. Не работает с одноцепочечной ДНК!
•Использование АТ, инактивирующих работу ДНК полимеразы при 37 градусах.
Сборка по Гисбону, вариант 3
•Экзонуклеаза T5 обладает 5´→ 3´
экзонуклеазной активностью. Работает с одноцепочечной ДНК.
•Phusion полимераза обладает 5´→ 3´ полимеразной активность и 3´→ 5´
экзонуклеазной активностью. НЕ
ОБЛАДАЕТ 5´→ 3´ экзонуклеазной активностью. Лучшая корректирующая активность, чем у Taq полимеразы