- •Кафедра микробиологии, вирусологии и иммунологии
- •060101- «Лечебное дело»
- •Методические указания к практической работе
- •Практическая работа
- •Методические указания к практической работе
- •Практическая работа
- •Шкала гемолиза
- •Методические указания к практической работе
- •Практическая работа
- •Методические указания к практической работе
- •Практическая работа
- •Методические указания к практической работе
- •Методические указания к практической работе
- •Практическая работа
- •Методические указания к практической работе
- •Практическая работа
- •Возможные ошибки при проведении лимфоцитотоксического теста
- •8. Решить ситуационную задачу:
- •Методические указания к практической работе
- •Практическая работа
- •Методические указания к практической работе
- •Практическая работа
- •Методические указания к практической работе
- •Практическая работа
- •Методические указания к практической работе
- •Практическая работа
- •Ртга с типоспецифической сывороткой
- •Методические указания к практической работе
- •Практическая работа
- •Методические указания к практической работе
- •Практическая работа
- •1. Изучить механизм развития III –типа гиперчувствительности по схеме (зарисовать)
- •Методические указания к практической работе
- •Практическая работа
- •5. Изучить постоянные противопоказания к препаратам календаря прививок (записать в терадь, табл.19)
- •Определение титра токсина
- •8. Изучить список вакцин и сформировать по видам:
- •Методические указания к практической работе
- •Практическая работа
- •Определение титра антитоксической сыворотки в реакции флоккуляции
- •4. Изучить список препаратов и разделить их на антитоксические сыворотки и иммуноглобулины:
- •Методические указания к практической работе
- •Практическая работа
- •Цитокины – более узкое понятие, гуморальная составляющая межклеточных взаимодействий в иммунной системе. Гормоны тимуса
- •Биологические эффекты основных цитокинов (л.В. Ковальчук)
- •Системные проявления (синдромы) токсического действия цитокинов (а.А.Ярилин)
- •Провоспалительные цитокины (а.А. Тотолян, и.С. Фрейдлин)
- •Противовоспалителдьные цитокины (а.А. Тотолян, и.С. Фрейдлин)
- •На иммуноглобулины класса g (IgG)
- •Методические указания к практической работе
- •Практическая работа
- •Характеристика некоторых этапов диагностического анализа
- •Характеристика терминов и критериев статистических методов, используемых при проведении иммунологических исследований
- •Некоторые процедуры иммунологических исследований и критерии их стандартизации
- •Характеристика наиболее часто встречающихся причин аналитических ошибок при проведении рид и ифа
- •Оглавление
Некоторые процедуры иммунологических исследований и критерии их стандартизации
|
Аналит |
Этап |
Критерии стандартизации процедур |
|
Иммуно-глобулины сыворотки крови |
Пре- аналитический |
Получение сыворотки из крови Отсутствие в пробе примесей фибрина, гемолиза, агрегатов Ig, эритроцитов, контаминации микроорганизмами Хранение сывороток не более 3 дней при t = +4°С или длительное хранение при температуре не менее -20°С |
|
Аналитический |
Использование коммерческих тест-систем или автоматизация метода Использование стандартных растворов с различным содержанием Ig (минимум 3 уровня) Стандартизация температуры инкубации при использовании РИД Концентрация Ig в пробе не должна превышать таковую в стандарте Учет физиологических колебаний Ig (+20%) | |
|
Иммуно-глобулины мочи |
Пре-аналитический |
Суточная или утренняя порция Проба на скрытую кровь Центрифугирование, концентрирование не менее чем в 50 раз Хранение при t = -20°С |
|
Аналитический |
Определение белка в единице объема Определение альбумина | |
|
Иммуно-глобулины секретов |
Пре-аналитический |
Центрифугирование, разлив по аликвотам,хранение при t = -20°С При появлении хлопьевидного осадка в результате хранения – центрифугировать при 1500 g 30 мин Использование ингибиторов протеаз |
|
Аналитический |
Использование стандартов для секреторных и сывороточных форм Ig Использование IgG-фракции анти-сывороток Определение Ig Использование критериев соотношения Ig в сыворотке и секрете (относительные показатели) | |
|
ЦИК, идентификация структуры |
Пре- аналитический |
Контроль на присутствие криосвойств Концентрация рН ПЭГ и используемых растворов |
|
Аналитический |
Продолжительность времени и температуры инкубации Отмывание осадка ЦИК Использование адекватных стандартов (полимерных и мономерных молекул Ig при исследовании разных изотипов) | |
|
Криоглобулины |
Пре- аналитический |
Наличие криосвойств белков сыворотки Выделение осадка криоглобули- нов при t = 4°С Температурный режим, продолжительность |
|
Аналитический |
Идентификация типа криоглобулинов с использованием адекватных стандартов и антисывороток | |
|
Компоненты комплемента |
Пре-аналитический |
Использование свежих образцов сывороток крови |
|
Аналитический |
Использование откалиброванных стандартных образцов комплемента Содержание комплемента в образце не должно быть больше, чем в стандарте | |
|
Популяции и субпопуляции лимфоцитов (иммунофено- типирование) |
Пре-аналитический |
Выбор адекватного антикоагулянта (цитрат натрия, гепарин, ЭДТА или смесь гепарина с ЭДТА) Использование коммерческого раствора градиента плотности Выбор адекватного градиента плотности Контроль режима центрифугирования (скорость, время, температура) Контроль рН всех используемых растворов Использование цитратного гемо-стабилизатора (освобождение от тромбоцитов) Хранение не более 8 ч при комнатной температуре Контроль разведения МкАт |
|
|
Аналитический |
Контроль чистоты выделенной популяции клеток (не менее 80%) Контроль жизнеспособности клеток (не менее 80%) Контроль концентрации реагентов, модифицирующих мембрану клеток |
|
Фагоцитарная активность (гранулоцитов) |
Пре-аналитический |
Контроль значений градиента плотности Использование цитратного гемостабилизатора (удаление тромбоцитов) Контроль чистоты популяции – не менее 80% Контроль полноценности лизиса эритроцитов Количество выделенной субпопуляции клеток не менее 1 х 106 в 1 мл Контроль концентрации объектов фагоцитоза (латексные частицы, микробные антигены, химические модификаторы мембран) и т.д. Контроль качества раствора Хен- кса, люминала и его концентрации при методе хемилюминесценции |
|
Аналитический |
Калибровка используемых приборов Постановка контролей (положительных и отрицательных) |
Для проведения исследований на данном этапе необходима полная подготовка к работе приборов и наличие контрольных материалов
Контрольные материалы должны быть адаптированы к применяемым методикам и должны включать:
- контрольные сыворотки с различным содержанием исследуемых компонентов (неспецифические и специфические; IgA, IgM, IgG, IgE; СЗ, C4 и др.);
- калибраторы с известным и желательно различным содержанием исследуемого компонента (не менее 3);
- контрольные образцы суспензий клеток (лимфоцитов при иммунофенотипировании);
- контрольные мазки (нормальные и патологические);
- референс-контроли (эталонные контроли) для оценки работы тест-системы в целом.
Контрольные материалы исследуют так же, как и образцы пациен-тов.
Принципиальным для получения сопоставимых и надежных результатов является использование стандартизованных контроль-ных материалов и реагентов, унифицированных методов с крите-риями надежности, сведение к минимуму влияния человеческого фактора. Всем этим требованиям отвечает автоматизирование системы анализа с программой контроля качества.
Таким образом, для получения надежных результатов при использовании иммунологических методов оптимальным представ-ляется путь максимальной автоматизации аналитического процесса и стандартизации пре- и постаналитического этапов. Стандартизация преаналитического этапа, как было указано выше включает стандартизацию способов доставки и хранения проб (контейнер с диапазоном температурного режима), унификацию пробирок (вакутейнеры, микроветы с различными антикоагулянтами), стандартизацию маркировки проб, растворов для подкисления или подщелачивания используемых в работе буферных растворов, универсальность коагулянтов, отмывающих и разводящих растворов и т.д.
Постаналитический этап связан с анализом результатов исследования контрольных материалов, проб пациента их статистической обработки, построения контрольных карт. Наиболь-шее распространение получила карта Шухарта (контроль правиль-ности и воспроизводимости). Помимо непосредственной работы по контролю качества, необходимо проведение работы по оформлению результатов исследования проб пациентов (отражение в рабочем журнале, направительных бланках или использование компьютерной программы). Контроль качества включает следующие этапы:
1-й этап – постановка и ежедневное измерение контрольного материала исследуемых образцов пациентов в течение 20 дней.
2-й этап – статистическая обработка данных: вычисление средней (межсерийная воспроизводимость).
3-й этап – по результатам статистической обработки данных построение контрольной карты Шухарта.
4-й этап – по мере постановки анализов внесение результатов измерения контрольных материалов на карте Шухарта.
Построение новой карты Шухарта проводится при следующих условиях: 1) при смене серии контрольных материалов, 2) после измерения настройки приборов, 3) при замене одного из компонентов технологии метода, 4) при неудовлетворительных результатах анализа контрольных материалов (критерии Вестгарда).
7. Проанализировать характеристику и причины возможных ошибок при постановке лабораторных исследований (записать в тетрадь)
При получении неудовлетворительных результатов контрольных измерений необходимо проанализировать возможные ошибки и устранить их. В табл. 30 представлена характеристика наиболее часто встречающихся причин аналитических ошибок при проведении, например, методов РИД и ИФА.
Таблица 30