8. Решить ситуационную задачу:

У реципиента определен следующий набор антигенов гистосовместимости: HLA – A 1,3; В 7,12. В банке данных о донорских почках имеются следующие варианты:

1. HLA – A 1, 3; В 1, 12

2. HLA – A 2, 9; В 8, 15

3. HLA – A 1, 2; В 7, 12

4. HLA – A 3, 9; В 7, 13

5. HLA – A 9, 10; В 5, 7

Выберите варианты для пересадки (дать заключение, оформить протокол)

9. Изучить РБТЛ (записать в тетрадь)

Ре­акция бласттрансформации (РБТЛ) для определения физиологической активности (пролиферативного потенциала) клеток на неспецифические активаторы (митогены) и на специфические антигены (про­стейшие, грибы, бактерии, вирусы, ткани организма) играет большое значение для оценки ИДС, аутоиммунных и аллер­гических заболеваний, для трансплантационной иммуноло­гии – подбора донора и реципиента и т.д. Подбирая различные митогены и оптимальные усло­вия проведения реакции, можно в принципе дать количест­венную оценку Т- и В-лимфоцитов в общей популяции.

Принцип реакции бласттрансформации (РБТЛ) – ак­тивация лимфоцитов (пролиферация, трансформация) под влиянием стимулов (митогенов или антигенов) с последую­щей трансформацией их в бласты (большие делящиеся клет­ки).

В качестве активаторов РБТЛ обычно используются ФГА (фитогемагглютинин), конкавалин (Кон-А), митоген лаконоса (МЛ), бактериальные полисахариды (ЛПС), фермен­ты, аллергены и др. Для оптимального протекания РБТЛ це­лесообразно применение нескольких доз стимулятора (опти­мальную, низкую и высокую) и разное время культивирова­ния.

Техника постановки анализа:

В стерильные пенициллиновые пузырьки вносят реак­тивы для контрольной (1) и опытной (2) серий.

Контроль (1): 4 мл среды 199 или Игла +1 мл инактивированной сыворотки крупного рогатого скота + 0,25 мл среды^г199 или Игла + 0,1 мл гепаринизированной крови пациента

Опыт (2): 4 мл среды 199 или Игла, + 1 мл инактивированной сы­воротки крупного рогатого ско­та + 0,25 мл митогена + 0,1 мл гепаринизированной крови пациента.

Пенициллиновые пузырьки закрыть стерильными ре­зиновыми пробками и культивировать 4 сут при t = 37°С в термостате.

Учет результатов:

1. Собрать содержимое пузырьков в пробирки и отцентрифугировать 10 мин. при 1000 об./мин.

2. Удалить супернатант. Осадок ресуспендировать в 10 мл 10%-ной уксусной кислоты и повторить центрифугирова­ние (10 мин. при 1000 об./мин).

3. Удалить супернатант. Осадок ресуспендировать, доба­вить каплю метанола.

4. Приготовить мазки. Высушить на воздухе. Красить по Романовс-кому-Гимзе.

5. Просчитать процент бластов на 100-200 лимфоцитов.

Учет бластов можно вести также по изменению радиактивности культуры клеток в результате включения радиактивного изотопа в клетки, входящие в митотический цикл, используя для этого автоматический сцинтилляционный счетчик.

В контроле бласты отсутствуют, в опытном образце с митогеном бласты составляют 60-80%.

Возможен другой способ постановки анализа

Контроль: 5 мл культуральной среды + 0,1 мл гепаринизированной крови пациента + 50 мкг физиологического раствора.

Опыт: 5 мл культуральной среды, + 0,1 мл гепаринизированной

+ крови пациента + 50 мкг ФГА.

Культивировать в термостате при t = 37°С 3–4 сут. Можно использовать культуральную среду приготовленную для PTMЛ (см. предыдущее занятие).

10. Изучить значение определения HLA-B27 и HLA-B7 антигенов в патологии человека (записать в тетрадь, оформить протокол).

HLA-B27 – это антиген, который определяют для дифференциальной диагностики аутоиммунных болезней. Он выявляется у 90% больных анкилозирующим спондилитом и синдромом Рейтера, а также при некоторых других аутоиммунных патологиях.

HLA-B7 – это антиген, который также связан с риском развития анкилозирующего спондилоартрита, но его выявляют и при других, не аутоиммунных заболеваниях. HLA-B27 и HLA-B7 определяют в ПЦР в режиме Real-time.

Тест на HLA-B27 – это генетический тест. У пациентов, страдающих воспалительным артритом позвоночника и суставов (не остеоартритом), наличие HLA-B27 свидетельствует о наличии заболевания из группы серонегативных спондилоартропатий. Данная группа включает анкилозирующий спондилоартрит (АС), псориатический артрит, болезнь Рейтера. HLA-B27 присутствует у 90% людей, страдающих АС, однако ген может присутствовать и у людей, не страдающих артритом или воспалением.

Целесообразно определять антиген HLA-B27 при анкилозирующем спондилоартрите, синдроме Рейтера, ювенильном ревматоидном артрите, псориатическом артрите, хронических заболеваниях кишечника, протекающих с сакроилеитом и спондилитом, а также при увеите и реактивном артрите, вызванных Yersinia spp., Chlamydia spp., Salmonella spp., Shigella spp. Кроме того, наблюдается высокая степень корреляции между антигенами HLA-B7 и B27 и аллергическими заболеваниями, при которых гиперчувствительность проявляется как повышенное образование антител класса IgE.

5. Подведение итогов занятия – 5 мин

Практическое занятие 8

Тема. Антитела. Классы иммуноглобулинов: IgM, IgG, Ig A, Ig E, Ig D. Структура, место образования. Специфичность и гетерогенность антител. Схема строения молекулы иммуноглобулина. Функциональное значение каждого класса иммуноглобулинов. Полные и неполные антитела. Моноклональные антитела. Определение, характеристика, принципы получения и тестирования гибридом. Области применения моноклональных антител

Реакции иммунитета. Реакция агглютинации для определения антител. Определение концентрации иммуноглобулинов методом радиальной иммунодиффузии. Неполные антитела и методы их выявления. Реакции иммунитета с использованием меченых антигенов и антител

Цель занятия. Изучить сущность и методы постановки реакций на выявление полных и неполных антител. Изучить сущность реакций с использованием меченых антигенов или антител, их достоверность и информативность. Методы постановки этих реакций, практическое применение, оценки