Определение титра токсина

Токсин в мл	0,10	0,15	0,20	0,25	0,30
Стандартная сыворотка в мл	1	1	1	1	1
День гибели		4-е сутки

Limes tod = 0,15

2 этап – опытную смертельную дозу токсина соединяют с различными количествами испытуемой сыворотки (разведенной), смеси вводят морским свинкам и вновь наблюдают гибель одной из морских свинок на 4-е сутки.

При постановке реакции в организме можно предварительно опытному животному ввести антитоксическую сыворотку, а потом ввести оттитрованную дозу токсина. Контрольному животному вводят только токсин, и оно погибает, так как в организме нет антител.

Вариантом постановки реакции нейтрализации в организме является определение уровня антитоксического иммунитета путем постановки внутрикожных проб с токсином (пробы Шика, Дика и др.).

Нейтрализация токсина антитоксином может быть определена в чашках Петри методом преципитации в геле. Эта модификация используется для обнаружения токсигенности культур дифтерийных палочек, стафилококков и др. Токсигенность выявляют по линиям преципитации, которые появляются в агаре в результате взаимодействия токсина, образуемого исследуемой культурой и диффундирующего в агар и антитоксина, также диффундирующего в агар из места его нанесения.

Присутствие токсина, а также его силу можно определить пробирочным методом в реакции флоккуляции.

7. Изучить реакцию флоккуляции (записать в тетрадь, оформить протокол)

Реакция флоккуляции (таблица 21) основана на способности смеси токсина с антитоксической сывороткой в определенных условиях опыта давать помутнение и выпадать в осадок. Реакция была предложена Рамоном. Основным условием для визуального проявления реакции является эквивалентные соотношения антигена и антитела. Раньше всего реакция наступает там, где количество единиц токсина соответствует количеству единиц антитоксина. Примечательным является также и то, что реакция флоккуляции произойдет, если в качестве антигена используется и анатоксин. Анатоксин – это обезвреженный токсин, который получают из экзотоксина путем обработки его 0,3–0,4% раствором формалина при температуре 37–40°С в течение 18–30 дней. В результате такой обработки токсин теряет свои ядовитые свойства, но сохраняет антигенные. Сила анатоксина измеряется в антигенных единицах связывания (ЕС). Реакция флоккуляции используется в вакцинном производстве для титрования анатоксина.

Для титрования полученный анатоксин разливают в пробирки по 2 мл, в каждую пробирку добавляют стандартную антитоксическую сыворотку в определенной дозе и определенной силы от 0,2 до 1,6 мл (например: противодифтерийная сыворотка с титром 1000 АЕ, разведение 1:10). Смесь помещают на водяную баню при 45°С на 40–45 мин и наблюдают, в какой из пробирок произойдет инициальная или начинающаяся флоккуляция.

Например: инициальная флоккуляция произошла в пробирке №3.

Силу анатоксина вычисляем следующим образом: для связывания 2 мл анатоксина потребовалось 60 МЕ сыворотки (1 мл сыворотки содержит 100 АЕ, 0,6 мл содержат 60 АЕ), на 1 мл – х, составляем пропорцию:

2,0 – 60 АЕ

1,0 – х х=60:2=30 АЕ

Таблица 21

Схема реакции флоккуляции

№№ пробирок	1		2		3	4		5		6
Анатоксин	2,0		2,0		2,0	2,0		2,0		2,0
Антитоксическая противодифтерийная сыворотка, т. 1000 АЕ, разв.	0,2		0,4		0,6	0,8		1,0		1,2
				инициальная или начинающаяся флоккуляция

Вывод: в 1 мл анатоксина содержится 30 ИЕ. За 1 ИЕ (иммуногенную единицу) или ЕС принимают то количество анатоксина, которое в смеси с 1 АЕ сыворотки дает инициальную флоккуляцию.