TOM-3

Пр имечание: * – достовер ность отличия от исходного (р < 0,05).

131

цифических фер ментов (ур оканиназы и гистидазы) в экспер именте на моделях остр ого холестаза и токсического повр еждения печени [3].

Нами было пр оведено углубленное изучение влияния ТЭС на цитолитический синдр ом у больных ХДЗП. Помимо р утинных печёночных пр об, была изучена активность печёночно-специфических фер ментов: сывор оточной ур оканиназы, сывор оточной гистидазы, L-сер индегид- р атазы, L-тр еониндегидр атазы, а также N-ацетил-b-D-глюкозамини­ дазы.

Исследование цитолитического синдр ома до начала лечения показало повышенную активность фер ментов во всех исследуемых гр уппах. Имеется зависимость между тяжестью патологии и степенью повышения активности исследуемых фер ментов. Максимальное увеличение активности фер ментов отмечено у больных циррр озом печени, менее значимые изменения выявлены у больных хр оническим гепатитом. Ур овни АЛАТ и АСАТ значительно пр евышали нор мальные показатели только у больных циррр озом печени. У больных хр оническим гепатитом ур овень тр ансаминаз был умер енно повышен. Показатели цитолитического синдр ома в основной и контр ольной гр уппах до начала лечения пр и этом оказались сопоставимы между собой.

После кур са ТЭС-тер апии отмечено значительное снижение ур овня как тр ансаминаз, так и ор ганоспецифических фер ментов. У больных хр оническим гепатитом и циррр озом печени степень снижения активности ор ганоспецифических фер ментов соответствовала тяжести патологии. Снижение активности печёночно-специфических фер ментов после ТЭС было больше, чем у больных, пр олеченных медикаментозными методами лечения. Данные закономер ности пр ослеживаются в изменении активности в плазме кр ови и др угих фер ментов.

Возр астание ур овня пр одуктов ПОЛ и снижение ур овня фер ментов АОЗ может находиться в зависимости от фазы и степени тяжести патологического пр оцесса печени. Пр одукты ПОЛ оказывают мембр а- нотоксическое действие, угнетают окислительное фосфор илир ование, нар ушают р аботу многих фер ментов, тр анспор т ионов в печёночных клетках. Стимуляция ПОЛ у больных с пор ажением печени иниции- р ует воспалительную моноцитар но-макр офагальную инфильтр ацию пор тальной тр иады, а также вызывает депозицию в ткани печени коллагена и жир овых клеток. С др угой стор оны, эндор фины увеличивают ур овень синтеза NO, котор ый может действовать как антиоксидант, взаимодействуя с анионом супер оксида, гидр оксильным р адикалом и пер екисью водор ода [1, 4].

Наши данные свидетельствуют о достовер ном р осте концентр ации вплазмекр овибольныхХДЗПпр одуктовПОЛисниженииур овняфер - ментов АОЗ. Эта закономер ность хар актер на для всех нозологических фор м ХДЗП, что свидетельствует о едином патогенетическом механизме данных нар ушений. Необходимо отметить наличие взаимосвязи

132

между тяжестью патологии печени и выр аженностью нар ушений ПОЛ и АОЗ. Наименьшие нар ушения отмечены у больных хр оническим гепатитом, наибольшие – у больных циррр озом печени.

После кур са ТЭС-тер апии во всех исследуемых гр уппах концент- р ация в плазме кр ови пр одуктов ПОЛ значительно снизилась, ур овень фер ментов АОЗ возр ос во всех гр уппах. Пр и этом ур овень снижения пр одуктов ПОЛ и повышения АОЗ тесно коррр елир овал с тяжестью патологии. Изменения ур овня фер ментов АОЗ и пр одуктов ПОЛ после ТЭС были большими таковых у больных, пр олеченных медикаментозными методами ср едствами.

После кур са ТЭС-тер апии больные отмечали значительное улучшение самочувствия, выр ажавшееся в уменьшении слабости и утомляемости, улучшении сна, увеличении р аботоспособности, исчезновении кожного зуда. Отмечалось уменьшение болезненности печени пр и пальпации и уменьшение болей в пр авом подр еберь е, а в р яде случаев уменьшение её р азмер ов. За всё вр емя пр оведения р аботы ни у одного из больных в пр оцессе пр оведения ТЭС не отмечалось р азвития клинически выр аженных осложнений и побочных эффектов.

Немаловажен и экономический аспект пр облемы: пр и пр именении тр анскр аниальной электр остимуляции р асходы состоят из р асходов на  амор тизацию и однор азовые пр окладки, стоимость котор ых невелика.

Необходимо отметить эффективность ТЭС-тер апии пр и наличии у больных сопутствующей патологии: гипер тонической болезни, язвенной болезни желудка и двенадцатипёр стной кишки, поскольку ТЭС обладает антиар итмическим, иммуномодулир ующим, антистр ессор - ным, р епар ативным эффектами. ТЭС пр именяется как неинвазивный метод лечения, что делает его пр именение более удобным для вр ача и пациента, исключает возможность зар ажения инфекциями, пер едающимися пар ентер альным путём.

Заключение

Таким обр азом, основываясь на р езультатах пр оведённого исследования, можно сделать вывод, что тр анскр аниальная электр остимуляция у больных ХДЗП обладает многостор онним положительным влиянием на гемодинамику печени, системную микр оцир куляцию, выр аженность цитолитического синдр ома, пр оцессы ПОЛ и состояние АОЗ. Пр именение ТЭС удобно с пр актической точки зр ения, более выгодно экономически, имеет малое количество пр отивопоказаний.

133

18.Активация репаративной регенерации

иинсулинпродуцирующей функции β-клеток

поджелудочной железы

при аллоксановом диабете у крыс под влиянием транскраниальной электростимуляции

Лебедев В. П., Биличенко С. В., Ордян Н. Э., Пивина С. Г., Нечипоренко С. П., Пузырев А. А., Михеева Е. А.

Институт физиологии им. И. П. Павлова РАН, Институт токсикологии,

Государ ственная медицинская академия им. И. И. Мечникова, Санкт-Петер бур г

Резюме

В опытах на кр ысах с экспер иментальным диабетом, вызванным введением аллоксана, показано, что тр анскр аниальная электр остимуляция эндор финных стр уктур мозга стимулир ует р егенер ацию пов- р ежденных β-клеток остр овков Лангер ганса поджелудочной железы. Это опр еделено на ср езах поджелудочной железы, окр ашенных гема- токсилин-эозином. Пр и этом отмечено новообр азование остр овков малого р азмер а, свидетельствующее об их возникновении из клеток-пр о- генитор ов. После тр анскр аниальной электр остимуляции в β-клетках остр овков пр и окр аске по Гомор и отмечено восстановление зер нистости  – пр изнака пр одукции инсулина. В соответствии с этим с помощью иммунофер ментного метода было также опр еделено восстановление ур овня инсулина в кр ови, динамика р оста котор ого высоко достовер но отр ицательно коррр елир овала со степенью снижения ур овня глюкозы кр ови. Делается вывод, что антигипер гликемический эффект тр анскр а- ниальной электр остимуляции пр и экспер иментальном аллоксановом диабете обусловлен р епар ативной р егенер ацией β-клеток остр овков Лангер ганса с восстановлением их инсулинпр одуцир ующей функции.

Введение

Согласно р анее полученным нами экспер иментальным данным тр анскр аниальная электр остимуляция эндор финных стр уктур мозга оказывает выр аженный антигипер гликемический эффект пр и аллоксановом диабете у кр ыс [7]. Исходным моментом для этого исследования было пр едположение о том, что тр анскр аниальная электр остимуляция может способствовать р епар ативной р егенер ации повр ежденных β- клеток остр овков Лангер ганса поджелудочной железы. Основой такому пр едположению послужили данные об интенсивном активир ующем

135

воздействии тр анскр аниальной электр остимуляции на пр оцессы р епа- р ативной р епар ации слизистой желудка, двенадцатипер стной кишки и гепатоцитов [2, 8], котор ые, как и β-клетки, являются пр оизводными энтер оцитов пер вичной кишки [5, 9, 10, 26, 27]. В то же вр емя гепатоциты и β-клеток имеют одинаковые эндогенные фактор ы, активир ующие р егенер ацию [20, 29].

Наличие антигипер гликемического эффекта пр и аллоксановом диабете является важным, но косвенным показателем р епар ативного влияния тр анскр аниальной электр остимуляции в отношении β-клеток. Целью настоящей р аботы было получение пр ямых доказательств наличия этого эффекта путем выявления позитивных изменений мор фологии повр еждённых β-клеток и восстановления их способности пр одуцир овать инсулин.

Материалы и методы исследования

Исследование пр оведено на 80 половозр елых кр ысах-самцах линии Вистар , массой 180–220 г. Животные имели свободный доступ к стандар тному гр анулир ованному кор му и воде.

Экспер иментальный диабет индуцир овали путем однокр атного подкожного введения свежепр иготовленного р аствор а аллоксана в дозе 150 мг/кг [4]. Ур овень глюкозы в кр ови опр еделяли глюкозооксидазным методом со стандар тным набор ом р еактивов с помощью фотоэлектр окалор иметр а КФК-2МП у всех животных ежедневно натощак

[12].

Животные были р азделены на 3 гр уппы – интактных, контр ольных (только введение аллоксана) и опытных (введение аллоксана и пр оведение сеансов тр анскр аниальной электр остимуляции). Электр о- воздействие животным опытной гр уппы пр оводили тр ехкр атно по р а- нее использованной схеме, а для контр ольной гр уппы животных были созданы условия имитации пр оведения стимуляции (частичная иммобилизация в станках, введение игольчатых электр одов, но без подачи тока) [5].

Мор фологические наблюдения. Животных – интактных, опытной и контр ольных гр упп (56 кр ыс) выводили из экспер имента с помошью эфир а на 3-и и 15-е сутки после введения аллоксана и начала тр анскр а- ниальной электр остимуляции или её имитации. Эти вр еменные ср оки были выбр аны с учетом динамики ур овня глюкозы – по нашим данным [7] на 3-и сутки после введения аллоксана отмечается пик гипер гликемии в обеих гр уппах, а у животных опытной гр уппы на 15-е сутки достигалась постоянная нор могликемия. Матер иал для гистологии бр али из хвостовой части поджелудочной железы.

Для 1-й сер ии наблюдений матер иал фиксир овали в 10%-нейтр альном фор малине, ср езы толщиной 4–5 мкм окр ашивали гематоксилин-

136

эозином. Оценивали изменения стр уктур ы остр овков Лангер ганса (микр оскоп МБИ-3, об. 40, ок. 7) и опр еделяли площади остр овковой ткани относительно площади ср езов. Мор фометр ические наблюдения пр оводили с использованием сетки окуляр ного микр ометр а. Во всех гр уппах животных пр осмотр ено 6-8 пр епар атов желез, по 400 полей сетки окуляр ного микр ометр а на каждом пр епар ате (площадь одного поля сетки – 0,0466 мм2).

Во 2-й сер ии наблюдений матер иал фиксир овали в жидкости Боуэна. Для избир ательного выявления секр етор ных гр анул инсулина в β-клетках использовали окр аску ср езов пар альдегидфуксином с докр аской тр ехцветной смесью Гомор и. Для мор фометр ического анализа использовали 6–8 пр епар атов у каждой гр уппы животных, где пр осмат- р ивалось 100 полей зр ения каждого пр епар ата в отдельности (общая площадь ткани составляла 2,7–3,6 см2). Подсчитывали число остр овков, визуально по пятибалльной шкале оценивали выр аженность гр а- нуляции в β-клетках и опр еделяли относительную пр едставленность остр овков с р азной интенсивностью окр аски.

Опр еделение цир кулир ующего инсулина. В 3-й сер ии у животных контр ольной и опытной гр упп (24 кр ысы) пр оводили опр еделение ур овня инсулина в плазме с помощью иммунофер ментного набор а (Rat Insulin ELISA, DRG, Гер мания) и использованием иммунофер мент­

ного анализатор а АИФ-Ц-01С (С.-Петер бур г, Россия). Условия хр анения матер иала соблюдались согласно р екомендациям используемого набор а.

Результаты исследования

Мор фологические наблюдения. Опор ными данными в 1-й сер ии опытов было опр еделение площади остр овков относительно пр осмот- р енных полей зр ения ткани поджелудочной железы у интактных животных. Установлено, что площадь остр овков составляла 5,5 ± 0,3% общей площади ср езов. Эта исходная величина была пр инята за 100%.

На ср езах желез животных контр ольной гр уппы на 3-й день после введения аллоксана площади остр овковой ткани уменьшалась по ср авнению с нор мой до 73 ± 3,0%. Пр и этом ур овень глюкозы кр ови был р авен 19,1 ± 1,2 ммоль/л. В опытной гр уппе эта величина составляла 78  ±  2,0% пр и ур овне глюкозы кр ови 15,4 ± 1,3 ммоль/л, т. е. по обоим пар аметр ам данные пр актически не отличались. Мор фологическая кар тина – на 3-й день аллоксанового диабета у контр ольной и опытной гр упп сходные изменения. В остр овках отмечались некр отические пр о- цессы, они тер яли свой четкий контур и выглядели «опустевшими», по­ скольку многие ядр а β-клеток подвер глись пикнозу и пр етер пели кар и- олизис. Этого следовало ожидать в соответствии с р езультатами наших р анее сделанных наблюдений [7], котор ые показали, что на 3-й день

137

после начала экспер имента ур овни гипер гликемии в контр ольной и опытной гр уппах животных были максимальными и одинаковыми.

На 15-й день экспер имента на ср езах желез животных контр ольной гр уппы относительная площадь остр овков р езко снижалась до 38  ±  4,0% по ср авнению с нор мой как следствие гибели значительной части β-клеток. В большей их части отчетливо выявлялись некр отиче­ скиепр оцессыср аспадомипр евр ащениемихвнер авномер нуюзер нистую массу. Ар хитектоника многих остр овков не сохр анялась (р ис.  1). Пр и этом ср едний ур овень глюкозы кр ови оставался повышенным и составлял 11,5 ± 1,1 ммоль/л.

Иная мор фологическая кар тина наблюдалась к 15-му дню у опытной гр уппы животных, где относительная площадь остр овковой ткани увеличивалась до 83 ± 2,0% нор мы и статистически достовер но отличалась от таковой в контр оле (p < 0,05). Ср едний ур овень глюкозы кр о- ви был нор мальным и составлял 3,8 ± 0,9 ммоль/л.

Рис. 1. Влияние тр анскр аниальной электр остимуляции на стр уктур у β-клеток остр овков Лангер ганса, повр ежденных аллоксаном (окр аска гематоксилин-эозин,

об.  40, ок. 7).

Обозначения: А, 1, 2 – остр овки интактных кр ыс; Б, 1, 2 – дестр уктивные изменения остр овков на 15-й день после введения аллоксана; В, 1, 2 – р епар ативные изменения остр овков на 15-й день после введения аллоксана и 3-х сеансов тр анскр аниальной электр остимуляции.

138

Весьма важным является тот факт, что в опытной гр уппе отмечено существенное увеличение количества наиболее мелких остр овков. Это следует из данных, пр едставленных в таблице 1. Так, если у интактных животных пр едставленность наименьших по площади остр овков (до 0,0009 мм2) составляла 42,1 ± 2,5%, то у животных в контр оле после введения аллоксана она уменьшалась до 30,8 ± 3,4% (р < 0,05), а у животных после электр овоздействия она достигала 52,7 ± 2,2%, пр евышая

Та б л иц а 1

Относительная представленность островков Лангерганса разной площади (в %) у интактных животных и животных контрольной и опытной групп

(окраска гематоксилин-эозин, 15-й день наблюдения)

Пр имечание: достовер ные отличия (p < 0,05):

* – опытной гр уппы от контр оля;

# – по ср авнению с интактными животными.

Таблиц а 2

Относительная представленность островков Лангерганса (в %)

сразной степенью выраженности грануляции у интактных животных

иживотных контрольной и опытной групп

(окраска по Гомори, 15-й день наблюдения)

Пр имечание: достовер ные отличия (p < 0,05):

* – опытной гр уппы от контр оля;

# – по ср авнению с интактными животными.

139

не только площадь в контр оле, но и таковую у интактных животных (в обоих случаях р < 0,05). Также обр ащает на себя внимание тенденция к увеличению р азмер ов самых больших панкр еатических остр овков, вер оятно, за счет пр олифер ации β-клеток по пер ифер ии.

Во 2-й сер ии опытов с помощью окр аски по Гомор и выявлялось наличие гр анул инсулина в β-клетках. Данные визуальной оценки выр аженности гр ануляции пр едставлены в таблице 2. У интактных животных интенсивная и умер енная степени гр ануляции отмечены в подавляющем большинстве остр овков (98%), а не содер жавшие гр а- нуляции остр овки вообще отсутствовали. В контр ольной гр уппе на 15-й день после введения аллоксана интенсивная и умер енная степени гр ануляции наблюдалась только в 15,6% остр овков. В этой гр уппе пр еобладали остр овки с очень слабо или слабо выр аженной гр ануляцией  – 73%. В то же вр емя в 11,4% остр овков гр ануляция вообще не была обнар ужена. Под влиянием тр анскр аниальной электр остимуля-

Рис. 2. Влияние тр анскр аниальной электр остимуляции на появление гр ануляции β-клеток остр овков Лангер ганса после повр еждения аллоксаном (окр аска по Го-

мор и, об. 40, ок. 7).

Обозначения: А, 1, 2 – остр овки интактных кр ыс; Б, 1, 2 – дегр анулир ованные β- клетки остр овков чер ез 15-й день после введения аллоксана; В, 1, 2 – появление гр ануляции β-клеток остр овков на 15-й день после введения аллоксана и 3-х сеансов тр анскр аниальной электр остимуляции.

140