TOM-3

15. Экспериментальная терапия алкогольного цирроза печени с помощью транскраниальной электростимуляции эндорфинных структур мозга

Лебедев В. П., Мелихова М. В., Колбасов С. Е., Стройкова Г. С.

Институт физиологии им. И. П. Павлова РАН, Институт токсикологии, Санкт-Петер бур г

Резюме

Пр и моделир ованном алкогольном циррр озе у кр ыс тр анскр аниальная электр остимуляция оказывает нор мализующее влияние на показатели патологии печени – цитолитический синдр ом (с учетом оп- р еделения мембр анно-связанных фер ментов гепатоцитов), активность пер екисного окисления липидов и антиоксидантную защиту, а также избыточный р ост внутр и- и внедольковой соединительной ткани, т.  е. имеет отчетливое лечебное действие. Эти данные дают основание для пр именения ТЭС-тер апии пр и лечении хр онических диффузных заболеваний печени в клинике.

Введение

Известно, что в патогенезе алкоголизма опр еделенное значение снижение выр аботки эндор финов мозгом [1]. В соответствии с этим оказалось, что р азр аботанный нами метод неинвазивной селективной тр анскр аниальной электр остимуляции (ТЭС) эндор финных стр уктур мозга оказался эффективным пр и купир овании основных синдр омов алкоголизма – абстиненции, постабстинентных аффективных нар ушений, в конечном итоге, патологического влечения к пр иему алкоголя

[2, 3, 4].

Общеизвестно также, что хр онический алкоголизм в опр еделенной части случаев пр иводит к р азвитию циррр оза печени. Поэтому пр едставлялось интер есным выяснить, не может ли ТЭС оказать лечебный эффект в условиях экспер иментальной модели алкогольного циррр оза, что могло бы послужить для клинических р екомендаций [5]. Возможность получения положительного эффекта пр именения ТЭС на такой модели основывалась на р езультатах наших р анее выполненных исследований, согласно котор ым пр и тр анскр аниальной активации эндор финной системы мозга интенсифицир уются пр оцессы р епар ативной р егенер а- ции повр ежденных тканей р азного типа [6]. Пр именительно к гепатоцитам было показано, что ТЭС восстанавливает их функциональную активность пр и остр ом и хр оническом повр еждении дихлорэ таном [7, 8], а также активир ует митотическое деление гепатоцитов в условиях частичной гепатэктомии [9].

112

Методика

Экспер именты были выполнены на 3 гр уппах кр ыс линии Вистар : интактные, с моделью алкогольного циррр оза и такая же гр уппа, получавшая ТЭС.

Моделир ование циррр оза. Две гр уппы экспер иментальных животных (контр ольная и опытная) в течение 6 недель получали в качестве питья вместо воды 5% р аствор этанола. Для ускор ения фор мир ования циррр отического пр оцесса в печени в 4 недели еженедельно однокр атно внутр ибр юшинно вводили р аствор четыр еххлор истого углер ода (CCl4) в оливковом масле в дозе 0,1 мл/кг. [10]. Тр етья гр уппа интактных животных служила контр олем нор мального состояния печени.

Тр анскр аниальная электр остимуляция. Одной гр уппе экспер иментальных животных, получавших этанол ± CCl4, сеансы ТЭС пр оводили 4 р аза чер ез день в течение двух последних недель наблюдения по методике, описанной нами р анее (пр одолжительность сеанса 60 минут, частота импульсов 70 Гц, длительность импульса 3,5 мсек, ток 0,8 мА) [7]. Втор ая экспер иментальная гр уппа служила контр олем. Пр и этом условия воздействия ТЭС с наложением электр одов только имитир о- вались (без включения тока).

Оценка моделир ования циррр оза и эффектов тр анскр аниальной электр остимуляции. Наблюдения заканчивались чер ез 10 дней после начала стимуляции. О состоянии животных в это вр емя судили по клинической кар тине, динамике массы тела (весы ВЛР-500). На фоне эфир ного нар коза опытных и контр ольных кр ыс подвер гали декапитации, бр али кр овь для биохимических исследовании, а печень – для взвешивания и гистологии. Печень взвешивали на весах 1602 МР (таблица 1).

Оценивали 6 гр упп биохимических показателей (таблица 2), для опр еделения основной части котор ых использовали набор ы «Ольвекс

Та б л иц а 1

Масса тела и относительная величина массы печени у интактных и групп экспериментальных животных (М ± m)

Пр имечание:

1.Достовер ность отличия гр уппы «Этанол ± CCl4» от гр уппы « Интактные» – *.

2.В нижних стр оках – величины в % по ср авнению с гр уппой «интактные».

113

8. Заказ № 282

Та б л иц а 2

Биохимические и функциональные показатели состояния печени экспериментальных животных после лечения алкогольного цирроза ТЭС

(М ± m)

Пр имечания. 1. Типы показателей: ПЦ – показатели цитолиза; ПХ – показатели холе­ стаза; ВП – показатель воспалительной р еакции; ПОЛ – показатель пер екисного окисления липидов; АОЗ  – показатели антиоксидантной защиты; ФП – функциональная пр оба.

2.Достовер ные отличия (р< 0.05) показателей у животных гр уппы «Этанол ± CCl4» от гр уппы «Плацебо» – **; у гр уппы «Этанол ± CCl4 ± ТЭС» от гр уппы «Этанол ± CCl4» – *.

3.В нижних стр оках – величины в % по ср авнению с «Плацебо».

114

Диагностикум». Показателями цитолиза (ПЦ) гепатоцитов, нар яду с р утинными № 1–3, служили также ур овни печеночно-специфических мембр анно-связанных фер ментов № 4–8. О холестазе судили по показателям (ПХ) № 9–11, о степени воспалительной активности (ВП) – по показателю № 12. Состояние пер екисного окисления липидов (ПОЛ) и антиоксидантной защиты (АОЗ) оценивали соответственно по показателям № 13 и № 14–16. Антитоксическую функцию печени (АФП) опр еделяли по пр одолжительности гексеналового сна (в/б, 80 мг/кг).

Пр обы ткани печени животных контр ольной и экспер иментальных гр упп фиксир овали в 10% фор малине и заливали в пар афин. Пар афиновые ср езы окр ашивали гематоксилин-эозином и по Ван-Гизону.

Статистическую обр аботку р езультатов экспер иментов пр оводили по Стьюденту-Фишер у.

Результаты

Оценка моделир ования циррр оза. У животных гр уппы «Этанол ± CCl4»,без пр именения ТЭС отмечались выр аженные пр изнаки интоксикации  – гиподинамия, затор моженность, взъер ошенность шер сти и неопр ятность. В соответствии с этим масса тела животных этой гр уппы была достовер но меньше, чем у интактных, а относительная масса печени была большей (таблица 1).

Рассмотр ение р езультатов биохимических исследований показывает (таблица 2), что у животных гр уппы «Этанол ± CCl4» пр оисходило существенное нар ушение функций печени. Наблюдалось повышение ур овня в кр ови индикатор ных фер ментов цитолиза, как р утинных (№  1–3), так и мебр анно-связанных (№ 4–8). Повышение активности в сывор отке кр ови типичного для синдр ома холестаза экскр етор ного фер мента щелочной фосфатазы и увеличение общего и пр ямого билир убина (№ 9–11) свидетельствовали о нар ушении желчеобр азовательной функции печени. Наличие пр изнаков воспалительного пр о- цесса хар актер изовалось изменением тимоловой белково-осадочной пр обы (№  12).Одновр еменно с этим пр оисходил достовер ный р ост концентр ации в плазме кр ови пр одуктов пер екисного окисления липидов (№  13) и снижение ур овня фер ментов антиоксидантной защиты (№  14–16). Нар ушение одной из пр иор итетных функций печени – антитоксической пр оявлялось в удлинении «гексеналового сна».

Гистологические изменения печени у кр ыс в гр уппе «Этанол ± CCl4» можно хар актер изовать как начальные фор мы циррр оза (р ис. 1). Ткань печени состояла из так называемых «ложных долек», в котор ых гепатоциты р асполагались беспор ядочно и были окр ужены р азр астающейся соединительной тканью. В «ложных дольках» встр ечались кр упные клетки с кр упными ядр ами и 2-ядер ные клетки. Эти участки были окр ужены пр олифер ир ующими фибр областами, ср еди котор ых

115

лифер ация соединительнотканых элементов была значительно менее выр ажена, чем у контр ольных кр ыс (р ис. 2). В большинстве пр епар атов наблюдались значительные поля гипер тр офии и гипер плазии гепатоцитов, что подтвер ждалось наличием большого количества 2-ядер ных гепатоцитов и гепатоцитов с кр упными ядр ами.

Заключение

Полученные данные показывают, что ТЭС оказывает нор мализующее влияние на цитолитический синдр ом, активность пер екисного окисления липидов и антиоксидантную защиту, а также избыточный р ост внутр и- и внедольковой соединительной ткани, т.е. оказывает лечебное действие пр и алкогольном циррр озе у кр ыс. Эти данные дают основание для пр именения ТЭС-тер апии пр и лечении хр онических диффузных заболеваний печени в клинике.

Литература

1.Гриненко А. Я., Крупицкий Е. М., Шабанов П. Д. и др. Нетр адиционные методы лечения алкоголизма // СПб.: 1993. – Изд. «Гиппокр ат». – 180 с.

2.Grinenko A. Ya., Krupitsky E. M., Lebedev V. P. et al. Metabolism of biogenic amines during the treatment of alcohol withdrawal syndrome by transcranial electric treatment // Biogenic amines. – 1988. – Vol. 5. – № 6. – P. 427–436.

3.Krupitsky E. M., Burakov A. M., Karandashova G. F. et al. The administration of transcranial electric treatment for affective disturbances therapy in alcoholic patients. // Drug and alcohol dependence. – 1991. – Vol. 27. – № 1. – P. 1–6.

4.Крупицкий Е. М., Гриненко А. Я., Бураков А. М. и др. Пр именение тр анскр аниального электр ического воздействия в тер апии патологического влечения к алкоголю // Вопр осы нар кологии. – 1996. – № 2. – С. 41–43.

5.Lebedev V. P., Illinsky O. B., Savchenko A. B. et al. Transcranial electrostimulation of the brain endorphinergic system as uninvasive functional electrostimulation of the brain homeostatic mechanisms: activation of tissue repair // Proceedings of the 4th Annual Conference of the International Functional Electric Stimulation Society. – Sendai (Japan). – 1999. – P. 215–219.

6.Емельянов Д. Н., Тумаренко А. В., Стаценко И. Ю., Скворцов В. В. Тр анскр а- ниальная электр остимуляция как метод монотер апии циррр озов печени // МедлайнЭкспр есс. – 2005. – № 2. – C. 19–20.

7.Лебедев В. П., Мелихова М. В., Колбасов С. Е. и др. Влияние тр анскр аниальной электр остимуляции эндор финных стр уктур мозга кр ыс на функциональную активность гепатоцитов пр и их токсическом повр еждении. // Росс. физиол. жур н. им. И. М. Сеченова. – 2000. – т. 86. – № 11 – С. 1449–1457.

8.Лебедев В. П., Нечипоренко С. П., Мелихова М. В. и др. Влияние тр анскр а- ниальной электр остимуляции эндор финных стр уктур мозга на функциональную активность гепатоцитов пр и их токсическом повр еждении: экспер иментальные данные и пер вые клинические наблюдения // Тр анскр аниальная электр остимуляция. Экспер иментально-клинические исследования / Под р ед. В. П. Лебедева  – СПб.: 2003. – т. 2. – С. 302–321.

118

16. Стимулирующее влияние бета-эндорфина на ткань печени в органотипической культуре

Чалисова Н. И., Лесняк В. В., Лебедев В. П.

Институт физиологии им. И. П. Павлова РАН, Санкт-Петер бур г

Резюме

Показано, что микр омоляр ные концентр ации бета-эндор фина даже пр и кр аткоср очном воздействии стимулир уют пр олифер ациионные и мигр ационные пр оцессы в ор ганотипической культур е печени. Этот эффект был дозозависимым, пр ичем зависимость «доза-эффект» имела хар актер ную для др угих эффектов бета-эндор фина колоколообр азную фор му. Результаты, полученные in vitro, позволяют считать, что гепатотр опные эффекты ТЭС в целом ор ганизме действительно обусловлены непоср едственным действием бета-эндор фина на ткани печени.

Введение

Ранее было показано, что тр анскр аниальная электр остимуляция (ТЭС) защитных механизмов мозга активир ует пр оцессы р епар ативной р егенер ации повр ежденных клеток печени. Это наблюдалось как в экспер именте [1–3], так и в клинике [4]. На основании опытов на животных имеются основания считать, что этот эффект ТЭС имеет эндор финер гическую пр ир оду, поскольку он устр аняется блокадой опиоидных р ецептор ов и потенцир уется пр и дегр адации системы фер - ментативного р азр ушения бета-эндор фина [1]. Пр едставлялось инте- р есным выяснить, как влияет бета-эндор фин на ткань печени в ор ганотипической культур е в отсутствии нер вных, гумор альных и др угих влияний, котор ые имеются в целостном ор ганизме.

Методы исследования

Ор ганотипическое культивир ование тканей пр оводилось по описанной р анее методике [5]. В экспер иментах использовано 200 эксплантатов печени 21-дневных кр ыс линии Вистар . Отпр епар ир ованные в стер ильных условиях фр агменты ткани кр ыс р азделяли на более мелкие фр агменты объемом около 1 мм3, котор ые помещали в чашки Петр и с коллагеновым покр ытием дна. Питательная ср еда состояла из 35% ср еды Игла, 35% р аствор а Хенкса, 25% фетальной телячей сыво- р отки и 5% кур иного эмбр ионального экстр акта. В ср еду добавляли глюкозу (0,6%), инсулин (0,5 ед/мл), гентамицин (100 ед/мл). Бетаэндор фин (фир ма «Sigma», США) вводился в культур альную ср еду в

120