- •Кафедра микробиологии, вирусологии и иммунологии
- •Часть 1
- •Методические указания к практической работе
- •Практическая работа
- •1. Ознакомиться с иммерсионной системой микроскопа
- •8. Просмотр фильмов: «Живая клетка», «l-формы бактерий», «Спора»
- •9. Просмотр фильма: «Жизнь бактериальной клетки»
- •2. Изучение мазка из культуры Bac.Anthracis, окрашенного по Гутштейну (клеточная стенка)
- •3. Изучение устройства фазово-контрастного микроскопа
- •Методические указания к практической работе
- •5. Изучение устройства темнопольной микроскопии
- •Методические указания к практической работе
- •3. Изучение и зарисовка демонстрационных препаратов грибов Mucor, Aspergillus, Penicillium
- •1. Изучение методики приготовления пластинчатого агара
- •Характеристика роста исследуемых культур
- •3. Изучение методики посева культуры на пестрый ряд
- •1. Знакомство со средами и аппаратурой для культивирования анаэробов
- •4. Итоговая контрольная работа по теме: «Физиология микроорганизмов (химический состав, питание, дыхание, питательные среды, ферменты, размножение, стерилизация, дезинфекция)»
- •Характеристика типовых штаммов, входящих в задачи
- •Характеристика выделенных культур
- •1. Знакомство с методикой забора водопроводной воды для бактериологического исследования
- •Расчет наиболее вероятного числа бактерий (нвч) в 100 мл питьевой воды централизованного хозяйственно-питьевого водоснабжения
- •Расчет наиболее вероятного числа бактерий (нвч) в 100 мл воды водоемов
- •5. Знакомство с методикой определения количество микроорганизмов в воздухе
- •2. Знакомство с устройством и работой автоклава, сухожаровой печи
- •2. Изучить методы, доказывающие спонтанные мутации у бактерии:
- •4. Зарисовать схему строения бактериофага
- •5. Определить титр бактериофага
- •Результаты титрования фага по методу Грациа
- •Интерпретация значений диаметров зон задержки роста при определении чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам (Среда агв)
- •Допустимые пределы диаметров зон задержки роста
- •Эталонных штаммов при контроле воспроизводимости
- •И точности результатов диско-диффузионного метода
- •(Среда агв)
- •Определение степени чувствительности кишечной палочки к стрептомицину
- •1. Изучение окрашенных по Граму мазков-отпечатков из органов
- •6.1. Возбудитель холеры
- •1. Зарисовка демонстрационных препаратов холероподобного и Эль-Тор вибрионов
- •Патогенез холеры
- •4. Нарисовать колонии вибрионов на средах сэдх и tcbs
- •6.2. Возбудитель чумы
- •1. Изучение мазка из чистой культуры Yersinia pestis, окраска метиленовым синим
- •2. Изучение Yersinia pestis в мазке-отпечатке из органов, окрашенном по Граму
- •3. Изучение колоний вакцинного штамма палочки чумы на среде Туманского
- •Диагностика иерсиниоза
- •Диагностика холеры
- •Бактериологическая диагностика чумы
- •Практическая работа
- •6.1. Возбудитель туляремии
- •6.2. Возбудитель бруцеллеза
- •6.3. Возбудитель сибирской язвы
- •Бактериологическая диагностика туляремии
- •Бактериологическая диагностика бруцеллеза
- •Бактериологическая диагностика сибирской язвы
- •Список сокращений
4. Нарисовать колонии вибрионов на средах сэдх и tcbs
5. Изучение препаратов для специфической профилактики холеры (записать в тетрадь)
Специфическая профилактика
Специфическая профилактика холеры имеет вспомогательное значение; ее проводят по эпидемическим показаниям, начиная с 7-летнего возраста.
Вакцина холерная корпускулярная инактивированная живая. Состав: взвесь равных количеств холерных вибрионов Огава, Инаба, классических или Эльтор биоваров. Назначение: для профилактики по эпидемическим показаниям. Создание активного антибактериального иммунитета.
Вакцина холерная. Состав: холероген-анатоксин + О-антиген из бульонной культуры холерного вибриона 569-В, серовар Инаба. Назначение: для профилактики по эпидемическим показаниям. Создание активного антибактериального и антитоксического иммунитета.
Вакцина холерная бивалентная, химическая. Состав: холероген-анатоксин сероваров Инаба и Огава и соматические О-антигены. Назначение: для профилактики по эпидемическим показаниям. Создание активного антибактериального и антитоксического иммунитета.
Экстренная профилактика тетрациклином проводится по эпидемиологическим показаниям лицам, тесно общавшимся с больным холерой (вибрионосителем), по схеме: 300 000 ЕД 3 раза в день в течение 4 суток. Дозировки для детей: 15–17 лет – 3/4 дозы взрослых, 8–14 лет – 1/2, 7 лет – 1/3, 5–6 лет – 1/4, 4 лет – 1/6, 2–3 лет – 1/8 и 1 года – 1/12 дозы взрослых. Применяют также доксициклин внутрь 1 раз в сутки по 0,2 г, рифампицин 2 раза в сутки по 0,3 г, сульфатон 2 раза в сутки по 0,7 г (2 таблетки).
6.2. Возбудитель чумы
1. Изучение мазка из чистой культуры Yersinia pestis, окраска метиленовым синим
Характерной особенностью является овоидная форма микроба, биполярная окрашиваемость, когда средняя часть клетки почти не окрашивается, а полюса окрашены интенсивно (зарисовать).
2. Изучение Yersinia pestis в мазке-отпечатке из органов, окрашенном по Граму
В мазке на фоне ткани органа наблюдается значительное количество возбудителей в виде мелких грамотрицательных овоидных палочек, биполярно окрашенных (зарисовать).
3. Изучение колоний вакцинного штамма палочки чумы на среде Туманского
На среде Туманского (через 24час) видны плоские колонии с приподнятым желтоватым или коричневым центром и бесцветным полупрозрачным неровным краем. Эти колонии палочек чумы принято сравнивать по внешнему виду со «смятым кружевным платком».
4. Знакомство со схемой (схема 2) патогенеза чумы (зарисовать, установить связи)
Схема 2
Схема патогенеза чумы
Возбудитель |
Входные ворота |
Смерть |
Первично-легочная чума |
кожа, слизистые оболочки (глаз, носоглотки, ЖКТ, дыхательных путей) |
Септические формы чумы
Повторная генерализация |
Бактериемия
Генерализация инфекции |
Региональные лимфатические узлы (размножение и накопление возбудителя) развитие серозно-геморрагического воспаления с некрозом, периаденитом |
Бактериемия |
Выздоровление |
Бубонная форма
Бактериемия |
Вторичные гематогенные очаги |
Септицемия |
Первичная генерализация |
Вторичные бубоны |
Смерть |
Гематогенный занос возбудителя во внутренние органы и лимфатические узлы, отдаленные от входных ворот |
Вторично-легочная форма чумы |
5. Знакомство со схемой лабораторного диагноза чумы (схему 4 зарисовать)
Проведение лабораторной диагностики в специальных лабораториях требует соблюдения режима с возбудителями ООИ и использования противочумных костюмов. (ПЧК).
1). Бактериоскопия мазков отделяемого язв, пунктата из бубона, мокроты, окрашенных по Граму и с помощью флуоресцентной специфической антисыворотки (МФА),
2). Бактериологическое исследование. При легочной форме исследуются мокрота (слизь из зева), кровь. Положительный предварительный ответ можно получить через 12–24 часа, окончательный ответ выдается через 48 часов.
3). Биологическая проба – в/брюшинное заражение лабораторных животных (в положительных случаях гибель животных наступает через 3–9 дней). Серологические методы идентификации возбудителя:
ИФА с моно- и поликлональными антителами;
РНаг (реакция нейтрализации антигена);
РПГА;
Реакция непрямой иммунофлюоресценции
4). Для серологической диагностики используются парные сыворотки с целью выявления нарастания титра антител (в 4 раза и более). Предварительное заключение выдается через 1–2 часа. Оно основывается на результатах бактериоскопии. Однако положительные результаты МФА, обнаружение морфологически характерных овоидных биполярных палочек, а также однократно полученные положительные результаты серологических реакций позволяют поставить предварительный диагноз чумы. Окончательный результат выдается через 5–7 суток от начала исследований после выращивания микробов на питательных средах и их идентификации с помощью тинкториальных свойств, отношения к специфическому фагу и способности вызывать заболевание у животных, 4-х кратное и более нарастание титра антител в парных сыворотках. Чумной фаг представляет собой фильтрат бульонной культуры чумного микроба. Препарат используется для идентификации возбудителя чумы. Пробу ставят с цельным фагом по методу Грациа.
6. Изучение препаратов для специфической профилактики чумы (записать в тетрадь)
Для специфической профилактики чумы разработано 2 вакцины. Живая чумная вакцина содержит высушенную взвесь живых бактерий вакцинного штамма чумного микроба, полученного Жираром и Робиком из вирулентной культуры путем последовательных пересевов возбудителя на питательных средах в течение 5 лет. Вакцину применяют накожно или подкожно для формирования активного иммунитета против чумы людям, которым угрожает опасность заражения. Продолжительность иммунитета около года. Разработана субъединичная – химическая чумная вакцина.
6.3. Возбудители псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза
Знакомство со схемой диагностики иерсиниоза (зарисовать схему 3)
1). Экспресс-диагностика: Определение Аг иерсиний в копроэкстрактах, слюне, моче и крови больных в РКА (реакция коагглютинации), РЛА, РНИФ, ИФА. Эффективность РКА повышается при утяжелении клиники, обострениях и рецидивах болезни; частота положительных результатов составляет от 55 до 90% (при гастроинтестинальной форме заболевания). 2). Молекулярно-биологический метод – ПЦР.
3). Бактериологический метод. Материалом для исследования являются фекалии, смывы с зева, моча, мокрота, спинномозговая жидкость, кровь, жёлчь, операционный материал (мезентериальные лимфатические лимфоузлы, участки кишечника). Секционный материал.
Возбудителей можно также выделить с объектов внешней среды – овощей и фруктов, из салатов, молока, рыбных и молочных продуктов, а также из смывов с оборудования и тары.
Положительные результаты исследования получают в 9-15% случаев при спорадическом характере заболеваний и в 25–30% при вспышках. Низкая эффективность выделения обусловлена незначительным количеством иерсиний в исследуемом материале (особенно в крови) и высокой обсемененностью исследуемых объектов сопутствующей микрофлорой. Бактериологический анализ требует достаточно длительного времени – от 7 до 30 дней.
4). Серологическая диагностика. С 6–7-го дня болезни применяют РА и РНГА с повторной их постановкой через 5–7 дней. РНГА дает в 40–70% позитивных результатов; минимальный диагностический титр АТ – 1:200. Однако необходимо учитывать возможность появления АТ в диагностических титрах лишь в поздние сроки, после 21–го дня от начала заболевания. При постановке РА с живыми культурами иерсиний можно выявить АТ к большему, чем в РНГА, числу сероваров и в большем проценте случаев. Минимальный диагностический титр АТ – не менее 1:160.
Схема 3